检验方法验证和确认

分析方法的验证和确认1检验方法验证和确认5/8/2024目的任何分析测试的目的都是为了获得稳定、可靠和准确的数据。2检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）的法规要求药品生产质量管理规范（2010年修订）

第十二条质量控制基本要求：

（四）检验方法应经过验证或确认。第一百三十九条企业的厂房、设施、设备和检验仪器应当经过确认，应当采用经过验证的生产工艺、操作规程和检验方法进行生产、操作和检验，并保持持续的验证状态。

3检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）的法规要求第一百四十二条当影响产品质量的主要因素，如原辅料、与药品直接接触的包装材料、生产设备、生产环境（或厂房）、生产工艺、检验方法等发生变更时，应当进行确认或验证。必要时，还应当经药品监督管理部门批准。第一百四十三条清洁方法应当经过验证，证实其清洁的效果，以有效防止污染和交叉污染。清洁验证应当综合考虑设备使用情况、所使用的清洁剂和消毒剂、取样方法和位置以及相应的取样回收率、残留物的性质和限度、残留物检验方法的灵敏度等因素。4检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）的法规要求第一百四十七条应当根据确认或验证的对象制定确认或验证方案，并经审核、批准。确认或验证方案应当明确职责。第一百四十八条确认或验证应当按照预先确定和批准的方案实施，并有记录。确认或验证工作完成后，应当写出报告，并经审核、批准。确认或验证的结果和结论（包括评价和建议）应当有记录并存档。5检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）的法规要求第一百四十九条应当根据验证的结果确认工艺规程和操作规程。第一百六十二条质量标准、工艺规程、操作规程、稳定性考察、确认、验证、变更等其他重要文件应当长期保存。6检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）的法规要求第二百二十三条物料和不同生产阶段产品的检验应当至少符合以下要求：（一）企业应当确保药品按照注册批准的方法进行全项检验；（二）符合下列情形之一的，应当对检验方法进行验证：1.采用新的检验方法；2.检验方法需变更的；3.采用《中华人民共和国药典》及其他法定标准未收载的检

验方法；4.法规规定的其他需要验证的检验方法。（三）对不需要进行验证的检验方法，企业应当对检验方法进行确认，以确保检验数据准确、可靠；（四）检验应当有书面操作规程，规定所用方法、仪器和设备，检验操作规程的内容应当与经确认或验证的检验方法一致；

7检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）的法规要求第二百三十条产品的放行应当至少符合以下要求：(一）在批准放行前，应当对每批药品进行质量评价，保证药品及其生产应当符合注册和本规范要求，并确认以下各项内容：1.主要生产工艺和检验方法经过验证；8检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）对比内容适用范围目的发起时机方法验证1.采用新的检验方法；

2.检验方法需变更的；3.采用《中华人民共和国药典》及其他法定标准未收载的检验方法；4.法规规定的其他需要验证的检验方法。证明采用的方法适合相应检测要求1.建立质量标准时；2.在药品生产工艺变更、制剂的组分变更、原分析方法修订时。方法确认1.不需要进行验证的检验方法；2.药典方法和其他法定方法。确认方法在本实验室条件下的适用性在实验室批准适用该方法前注：不是所有的测试项目都必须进行验证或确认，例如干燥失重、炽灼残渣、密度、重量、各种湿法化学步骤如酸值和简单的仪器方法pH值。9检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）的前提条件仪器人员可靠的参照品可靠的材料包括试剂、实验用容器等稳定性确认受试溶液和试剂的稳定，在规定时间内无降解或稳定的10检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）的原则原则上每个检测项目采用的分析方法，均需要进行方法验证。方法验证的内容应根据检测项目的要求，结合所采用分析方法的特点确定。同一分析方法用于不同的检测项目会有不同的验证要求。例如，采用高效液相色谱法用于制剂的鉴别和杂质定量试验应进行不同要求的方法验证，前者重点要求验证专属性，而后者重点要求验证专属性、准确度、定量限等验证项目。

11检验方法验证和确认5/8/2024仪器的确认--概述根据检验仪器类型不同，需要确认的指标不同：计量仪器--安装确认和校正分析仪器--IQ，OQ，PQ，预防性维修和再确认12检验方法验证和确认5/8/2024仪器的确认--IQ安装确认IQ验收，登记安装制定操作规程、维护规程、清洗规程等培训建立使用记录和维修记录13检验方法验证和确认5/8/2024仪器的确认--OQ运行确认OQ即为空载试验，在不使用样品的前提下，确认仪器达到设计的要求。目前许多大型仪器的运行确认都由仪器厂家完成。（仪器使用者需要做的是记录数据，并保存。）14检验方法验证和确认5/8/2024仪器名称仪器组件功能试验项目限度泵流量控制阀向系统输出流动相流速准确度±5％流动相比例控制阀控制各流动相的比例流动相混合比例的准确度±10％自动进样器进样体积控制阀将定量体积的样品注入色谱柱精密度RSD应≤1.0%柱温箱温度控制器保持色谱柱的温度准确度精密度≤±3.0℃波动应在1.0℃内UV检测器单色器从连续光谱中分离出单色光准确度±3nm光电管测定样品的吸收度线性相关系数不得<0.999e.g.HPLC系统运行确认试验及限度15检验方法验证和确认5/8/2024仪器的确认--PQ性能确认（PQ=PerformanceQualification）考察仪器可靠性、运行参数稳定性及结果重现性与具体分析方法相联系系统适用性试验属于性能确认的范畴16检验方法验证和确认5/8/2024仪器的确认--预防性维修目的：减少仪器故障引起实验失败的次数基本流程：根据仪器类别和确认的数据制定维修计划根据计划定期进行运行确认中某些关键项目对不符合规定的元件进行适当的更换或维修再次进行运行确认和性能确认17检验方法验证和确认5/8/2024仪器确认--再确认分析仪器经过较大变更后，需证实已确认状态没有发生漂移而进行再确认。一般只需进行运行确认和性能确认。18检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）-概述概述准确度-Accuracy精密度-Precision专属性-Specificity检测限-LimitofDetection定量限-LimitofQuantitation线性-Linearity范围-Range重现性-Ruggedness耐用性-Robustness19检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）--概述验证内容检验项目鉴别杂质测定含量测定定量限度准确度否是否是精密度重复性否是否是中间精密度否是*否是*专属性**是是是是检测限否是***是否定量限否是否否线性否是否是范围否是否是耐用性是是是是*：已有重现性验证，不需要验证中间精密度；**：如一种方法不够专属，可由其他分析方法予以补充；***：视具体情况予以验证。20检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）-准确度定义：测得的结果与真实值接近的程度，一般用回收率（R）表示。意义：它是反映方法正确性的指标。回收率测定（9次测定结果）：回收试验--用于制剂含量测定方法加样回收试验--用于生物制品和中药制剂21检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）-准确度检验项目原料药制剂备注含量测定方法1:用已知纯度的对照品或供试品进行测定方法2:用本法所得结果与已知准确度的另一方法测定的结果进行比较方法1:用含已知量被测物的各组分混合物进行测定方法2:如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加人已知量的被测物进行测定方法3:用本法所得结果与已知准确度的另一方法测定的结果进行比较如该分析方法已经测试并求出精密度、线性和专属性，在准确度也可推算的情况下，准确度可不必再做e.g.准确度验证方法22检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）-准确度检验项目原料药制剂备注杂质的定量测定方法1:可向原料药或制剂中加人已知量杂质进行测定方法2:如果不能得到杂质或降解产物，可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较，如药典方法或经过验证的方法在不能测得杂质或降解产物的响应因子或不能测得对原料药的相对响应因子的情况下，可用原料药的响应因子。应明确单个杂质和杂质总量相当于主成分的重量比（％)或面积比（％)e.g.准确度验证方法23检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）-准确度举例：测定含量的准确度，按标示量的80%，100%和120%配制三个浓度的溶液，每个浓度各分别制备3份供试品溶液，进行测定。根据测定结果与配制浓度计算出平均回收率以及相对标准偏差。

24检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）-准确度空白回收的计算方法：加样回收的计算方法：其中：M为测定值；P为背景值；A为已知值（真实值）。

25检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）-准确度可接受标准（HPLC）：各浓度下的平均回收率应在98.0%-102.0%之间，9个回收率数据的相对标准差（RSD）应不大于2.0%。中药一般应满足以下规定：回收率计算值在95%-105%范围，相对标准偏差（RSD%）薄层扫描法<5%。。

26检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）-准确度可接受标准（UV）：各浓度下的平均回收率应在98.0%-102.0%之间，9个回收率数据的相对标准差（RSD）应不大于1.0%。可接受标准（容量分析）：各浓度下的平均回收率应在99.7%-100.3%之间，9个回收率数据的相对标准差（RSD）应不大于0.2%。。

27检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）-准确度可接受标准（杂质）：。

28检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）-精密度定义：采用该法测定同一个均质样品的一组测量值彼此符合（接近）的程度。常用标准差（S）或相对标准差（RSD）表示。意义：反映方法稳定性的指标。根据测定方法的不同可以分为：重复性：Repeatability中间精密度：Intermediateprecision重现性：RuggednessSD=n−1∑(x−x)i=12in

SD×100%xRSD=29检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）-精密度-续重复性:

相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度称为重复性。<反映方法是否稳定>中间精密度：指同一实验室内，不同时间不同分析员用不同的设备测定结果的精密度。<目的在于考察实验室内的随机变动因素>重现性：不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度。<反映方法实用性的指标>30检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）-精密度e.g.精密度验证方法名称验证方法重复性在规定范围内，至少用9个测定结果进行评价。例如，设计3个不同浓度，每个浓度各分别制备3份供试品溶液或将相当于100%浓度水平的供试品溶液，用至少测定6次的结果进行评价中间精密度为考察随机变动因素对精密度的影响，应设计方案进行中间精密度试验。变动因素为不同日期、不同分析人员、不同设备重现性法定标准采用的分析方法或在不同实验室之间进行方法转移时，应进行重现性试验。例如建立药典分析方法时，通过协同检验得出重现性结果。协同检验的目的、过程和重现性结果均应记载在起草说明中，应注意重现性试验用的样品本身的质量均匀性和贮存运输中的环境影响因素，以免影响重现性结果31检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）-精密度可接受标准（重复性）：原料药方法验证时，API的RSD≤1.0%；制剂方法验证时，活性成份的RSD≤2.0%；杂质方法验证时，每个杂质的RSD≤20%。。

32检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）-精密度可接受标准（中间精密度）：原料药方法验证时，平行六份样品的RSD≤1.0%，两人之间的平均值之差≤1.0%制剂方法验证时，平行六份样品的RSD≤2.0

%，两人之间的平均值之差≤2.0

%。杂质方法验证时，平行六份样品的RSD≤20.0%，两人之间的平均值之差如下：。

33检验方法验证和确认5/8/2024准确度和精密度的关系红点代表真实值。精密-准确度好理想状态精密度好准确度差精密-准确度差一组三组二组三组黄色组数据同时具有良好的准确度和精密度，可取。一组数据虽然有良好的精密度但是准确度较差，不可取。二组数据虽然准确度较好，但是精密度较差，不可取。34检验方法验证和确认5/8/2024专属性（Specificity）定义：指在其它成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在时，采用的方法能准确测定出被测物的特性。通常，鉴别、杂质检查、含量测定方法中均应考察其专属性。如采用的方法不够专属，应采用多个方法予以补充。35检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）-专属性e.g.专属性验证方法名称概述验证方法备注鉴别试验鉴别试验用于确认被测成分符合其特征专属性要求证明其能与可能共存的物质或结构相似化合物区分。含被测成分的供试品呈正反应，而不含被测成分的供试品以及结构相似或组分中的有关化合物，应均呈负反应对于药品，辅料不得干扰其有效成分的鉴别36检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）-专属性e.g.专属性验证方法名称概述验证方法备注杂质测定（包含限度检查和定量测定）作为纯度检查，所采用的分析方法应确保可检出被分析物中杂质的含量测定，如有关物质、重金属、有机溶剂等。

因此杂质检查要求分析方法有一定的专属性方法1:在杂质可获得的情况下，可向试样中加入一定量的杂质，考察杂质与共存物质能得到分离和检出，并具有适当的准确度与精密度。方法2:在杂质或降解产物不能获得的情况下，专属性可通过测定含有杂质或降解产物的试样，与另一个已验证的方法或药典方法比较结果。或对试样用强光照射、高温、高湿、酸（碱）水解或氧化的方法进行加速破坏，以研究可能的降解产物和降解途径，并比对破坏前后检出的杂质个数。必要时可采用二极管阵列检测和质谱检测，进行峰纯度检查色谱法和其他分离方法，应附代表性图谱，以说明方法的专属性，并应标明诸成分在图中的位置，色谱法的分离度应符合含最测定要求37检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）-专属性e.g.专属性验证方法名称概述验证方法备注含量测定含量测定的目的是得到试样中被分析物的含量测定或效价的准确结果方法1:在杂质可获得的情况下，可向试样中加入杂质或辅料，考察测定结果是否受干扰，并可与未加杂质和辅料的试样比较测定结果。方法2:在杂质或降解产物不能获得的情况下，专属性可通过测定含有杂质或降解产物的试样，与另一个已验证的方法或药典方法比较结果。或对试样用强光照射、高温、高湿、酸（碱）水解或氧化的方法进行加速破坏，用两种方法进行含量测定，比较测定结果。必要时可采用二极管阵列检测和质谱检测进行峰纯度检查，证明含量测定成分的色谱峰中不包含其他成分色谱法和其他分离方法，应附代表性图谱，以说明方法的专属性，并应标明诸成分在图中的位置，色谱法的分离度应符合含最测定要求38检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）-专属性可接受标准（重复性）：

-应当证明潜在的干扰成分不会对方法的性能产生负作用。对于层析分离方法，要求证实杂质之间﹑杂质与主峰之间的选择性；分辨率≥1.5，如果证明确实可行，某些情况下分辨率低于1.2也可以接受。-空白对照应无干扰。。

39检验方法验证和确认5/8/2024检测限（LOD或DL）定义：试样中的被测物质能够被检测的最低量。特点：对准确度没有要求。意义：反映方法灵敏度的指标。

40检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）-检测限e.g.检测限验证方法验证方法方法1：非仪器分析目视法用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量方法2:信噪比法用于能显示基线噪音的分析方法，即把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，计算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般以信噪比为3:1或2:1时相应浓度或注人仪器的量确定检测限41检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）-检测限（LOD或DL）

线截距的标准偏差。42检验方法验证和确认5/8/2024定量限（LimitofQuantitation=LOQ）定义：指在保证具有一定的可靠性（一定的准确度和精密度）的前提下，分析方法可以测定出样品中待测组分的最低限度。特点：测定结果应具有一定的准确度和精密度。意义：反映方法测定低浓度样品时所具有的可靠性。43检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）-定量限e.g.检测限验证方法验证方法方法1：非仪器分析目视法用已知浓度的被测物，试验出能被定量检测出的最低浓度或量方法2:信噪比法用于能显示基线噪音的分析方法，即把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，计算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般以信噪比为10:1相应浓度或注人仪器的量确定量限44检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）-定量限（LOD或DL）

线截距的标准偏差。45检验方法验证和确认5/8/2024线性（Linearity）定义：在一定范围内检测结果（测量值）与测定组分的量（浓度）呈线性关系的程度。测试方法：回归方程Y＝aX＋b，用相关系数r对方法的线性进行评价。要求：根据被验证方法的特点不同，对r有不同的要求。例如HPLC，一般要求r>0.999。46检验方法验证和确认5/8/2024线性（Linearity）线性是定量测定的基础，涉及定量测定的项目，如杂质定量检查、含量和溶出方法均需要验证其线性。可用一贮备液经精密稀释或分别精密称样，制备一系列的供试品进行测定，至少制备5个浓度（通常选取50％,80%,100%,120%和150％）。以测得的响应信号作为被测物浓度的函数作图，观察是否呈线性，用最小二乘法进行线性回归。必要时，响应信号可经数学转换，再进行线性回归计算。47检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）-线性可接受标准：

48检验方法验证和确认5/8/2024范围（Range）定义：能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。意义：说明了该分析方法的适用范围。49检验方法验证和确认5/8/2024分析方法验证（确认）-耐用性可接受标准：① 对于半成品或者成品含量测试，范围通常为测试浓度的80%-120%；② 对于杂质测试，范围为测试浓度的50