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第第页土壤中性磷酸酶（S—NP）活性测定试剂盒说明书土壤中性磷酸酶（SNP）活性测定试剂盒说明书微量法100T/96S注意：正式测定之前选择23个预期差别大的样本做猜测定。测定意义：土壤磷酸酶是催化土壤有机磷矿化的酶，其活性的高处与低处直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。磷酸酶活性受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH的显著影响，依据最适PH范围，一般把土壤磷酸酶分为中性、酸性和碱性三种类型。测定原理：中性环境中，SNP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出NP活性。自备仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水、乙醇和甲苯。试剂构成和配制：试剂一：液体×1瓶，4℃避光保管。试剂二：粉剂×1瓶，4℃保管。用前加100mL蒸馏水充分溶解。试剂三：液体×1瓶，4℃保管。试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保管。临用前加576μL无水乙醇（自备），24μL蒸馏水充分溶解。（变褐色后不能再使用）标准品：液体×1瓶，0.5μmol/mL酚标准液，4℃保管。催化反应：称取风干混匀土壤约0.1g，加入50μL甲苯（自备），轻摇15min；加400μL试剂一而且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后快速加入1mL试剂二充分混匀，以停止酶催化的反应。8000g，25℃离心10min，取上清液置于冰上待测。显色反应：1.分光光度计预热30min以上，调整波长到660nm，蒸馏水调零。2.空白管：取微量玻璃比色皿/酶标板，加入10μL蒸馏水，20μL试剂三，4μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水166μL，混匀后25℃静置30min，于660nm测定吸光度，记为A空白管。3.标准管：取微量玻璃比色皿/酶标板，加入10μL标准液，20μL试剂三，4μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水166μL，混匀后25℃静置30min，于660nm测定吸光度，记为A标准管。4.测定管：取微量玻璃比色皿/酶标板，加入10μL上清液，20μL试剂三，4μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水166μL，混匀后室温25℃30min，于660nm测定吸光度，记为A测定管。注意：空白管和标准管只需测定一次。SNP活性计算：a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下活性单位定义：37℃中每克土壤每天释放1nmol酚为1个酶活单位。SNP（μmol/d/g土样）=[C标准液×（A测定管—A空白管）÷（A标准管—A空白管）]×V总÷W÷T=0.725×（A测定管—A空白管）÷（A标准管—A空白管）÷WC标

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