动物免疫学应用-血清学试验及生物制品（动物微生物课件）

血清学试验一、血清学试验概述由于抗体主要存在于血清中，所以将体外发生的抗原抗体结合反应称为血清学反应或血清学试验。进行检测机体的体液免疫或进行传染病的免疫学诊断。主要用已知抗原检测免疫动物血清中的特异性抗体，或以已知抗体检验相应抗原。一、血清学试验概述一、血清学试验概述按照参加反应的抗原、抗体性质、反应原理、结果不同可分为：沉淀试验；凝集试验；补体参与的实验；中和试验；标记抗体技术。免疫学检测技术的基本原理免疫学检测技术的基本原理免疫学检测技术的基本原理一、血清学试验概述按照参加反应的抗原、抗体性质、反应原理、结果不同可分为：沉淀试验；凝集试验；补体参与的实验；中和试验；标记抗体技术。抗原-抗体反应的一般规律：1.特异性与交叉反应；2.表面化学基团之间的可逆结合；3.适宜的抗原抗体比例；4.抗原抗体反应的阶段性：

1）抗原抗体特异性结合阶段

2）可见反应阶段一、血清学试验概述1、特异性与交叉反应：高度特异性：抗原表位与抗体分子CDR的互补结合是抗原-抗体反应的化学本质。一、血清学试验概述交叉抗原：不同抗原物质之间可能存在有共同的抗原决簇，这些共有的抗原组成或决定簇称为共同抗原或交叉抗原。交叉反应：如果两种不同的抗原物质之间存在相同的抗原决定簇，则一种抗原可以与另一种抗原物质刺激机体产生的抗体之间相互发生结合反应。2、表面化学基团之间的可逆结合：抗原与相应抗体除空间构型具有互补性外，两者主要是通过分子表面的氢键、疏水键、静电和范德华力非共价结合。亲合力:

指抗体分子的抗原结合部位与抗原表位之间的结合强度。一、血清学试验概述在一定浓度范围内，二者比例合适，可出现肉眼可见的反应物；若比例不合适，即抗原或抗体过剩时，可形成小分子抗原-抗体复合物。此种小分子复合物多呈游离状态，不能为肉眼所见。

3、适宜的抗原抗体比例：一、血清学试验概述4、抗原-抗体反应的两个阶段①抗原-抗体特异性结合阶段：特点：反应快，数秒钟至几分钟内完成。

②反应可见阶段：特点：所需时间较长，从数分钟、数小时到数日不等，且受电解质、温度和酸碱度等因素影响。一、血清学试验概述1.电解质：在电解质作用下，抗原-抗体复合物失去较多负电荷，使彼此连接出现肉眼可见的凝集或沉淀现象。试验中常用0.85%的NaCl溶液作为稀释液，提供适当浓度的电解质。抗原-抗体反应的影响因素

一、血清学试验概述提高浓度可增加抗原与抗体分子碰撞机会，加速抗原-抗体复合物的形成。通常抗原-抗体反应的最适温度是37℃。2.温度3.酸碱度

抗原-抗体反应的最适pH值在6-8之间。pH过高或过低，均可影响抗原或抗体的理化性状，影响试验的可靠性。

一、血清学试验概述二、常见血清学实验可溶性抗原（沉淀原）与相应的免疫血清（沉淀素），在有电解质的环境中，比例适合时，经过二步反应，将出现肉眼可见的沉淀现象。环状沉淀试验—毛皮中炭疽杆菌抗原；免疫扩散试验；双向琼脂扩散单项琼脂扩散免疫电泳试验；对流免疫电泳琼脂免疫电泳火箭电泳（一）沉淀试验二、常见血清学实验颗粒性抗原（凝集原：细菌、红细胞等）与阳性抗体（凝集素）在电解质存在下，比例适合时，经过二步反应，将出现肉眼可见的颗粒抗原凝集现象。玻片凝集试验—细菌鉴定和血型鉴定；试管凝集试验—凝集效价；间接凝集试验—红细胞；（二）凝集试验病毒颗粒红细胞

某些病毒（如流感病毒）表面的血凝素（HA）能引起人或某些哺乳动物的红细胞发生凝集。血凝现象红细胞凝集现象二、常见血清学实验（二）凝集试验病毒颗粒红细胞病毒抗体病毒液中若先加入病毒的特异性抗体，抗体与病毒表面的抗原特异性结合，从而抑制病毒与红细胞的血凝现象，称为红细胞凝集抑制试验。红细胞凝集抑制现象二、常见血清学实验（二）凝集试验二、常见血清学实验补体与抗原抗体的结合物结合后，直接引起可见的溶血反应或溶菌反应等；补体与可溶性抗原抗体复合物结合后，不出现可见现象，需通过红细胞—溶血素这一指示系统测定补体是否已结合，从而间接地检测是否存在抗原抗体反应。（三）补体参与的试验二、常见血清学实验在体外孵育病毒与特异性抗体的混合物，使病毒与抗体相互反应，再将混合物接种到敏感的宿主体内，经培养后观察CPE或红细胞吸附现象是否消失，即特异性抗体是否中和相应病毒，从而测定残存的病毒感染力的一种方法。（四）中和试验二、常见血清学实验指用荧光素、酶或放射性同位素标记的抗原或抗体，进行的抗原抗体反应。免疫荧光技术：直接法、间接法；酶免疫测定技术：酶免疫吸附试验（ELISA）;放射免疫测定法（RIA）。（五）标记免疫测定技术生物制品及应用生物制品学的奠基者据记载，宋真宗时期就接种“人痘”预防天花。英国医生Jenner

在1796年首创接种牛痘预防天花。巴斯德(1822-1895年)Pasteur（法）微生物学、免疫学创始人.1870年,巴斯德和柯赫系统地用弱毒疫菌接种,预防羊炭疽病，鸡霍乱，狂犬病等传染病。生物制品的概念利用微生物、寄生虫及其组织成分或代谢产物以及动物或人的血液与组织液等生物材料研制成的，用于传染病或其他疾病的预防、诊断和治疗的生物制剂称为生物制品。兽医临床常用的生物制品及其应用种类疫苗诊断液免疫血清应用预防诊断治疗疫苗概念：使机体产生人工主动免疫的生物制品。种类弱毒活疫苗灭活疫苗代谢产物疫苗多价苗和联苗亚单位疫苗生物技术疫苗寄生虫疫苗基因工程亚单位疫苗合成肽疫苗抗独特型疫苗DNA疫苗基因工程活疫苗

活疫苗（活苗）强毒苗：毒力没有减弱的疫苗，免疫的过程就是散毒的过程，所以在现在的生产中应严格禁止。弱毒苗：病原微生物毒力减弱，但仍保持良好的免疫原性或筛选自然弱毒株，扩大培养后制成的疫苗。如鸡新城疫Ⅱ系、Ⅳ系弱毒苗。异源苗：用具有共同保护性抗原的不同种病毒制成的疫苗。例如用火鸡疱疹病毒（HVT）预防鸡马立克氏病。灭活疫苗（死苗）概念

选用免疫原性强的病原微生物经人工培养后用理化方法将其灭活制成的疫苗。如鸡新城疫油乳剂灭活苗。

活苗和灭活苗的优缺点比较活苗（弱毒苗）灭活苗一次免疫一次免疫或多次免疫使用剂量小，接种后能增殖使用剂量大，接种后不能增殖多种免疫途径只能注射免疫期长，效果巩固免疫期较短不需佐剂佐剂可增强免疫力有排毒的可能，存在污染危险不排毒，无污染危险通常不制成联苗容易制成联苗或多价苗运输、保存要求条件较高运输保存方便通常制成冻干苗均为湿苗是利用细菌的代谢产物如毒素、酶等制成的疫苗。代谢产物疫苗多价苗和联苗多价苗：是指将细菌（或病毒）的不同血清型混合制成的疫苗。联苗：是指由两种以上的细菌或病毒联合制成的疫苗，一次免疫可达到预防几种疾病的目的。是将病毒的衣壳蛋白与核酸分开，除去核酸用提纯的蛋白质衣壳制成的疫苗。此类苗仅含有病毒的抗原成分，无核酸，因而无不良反应，使用安全，效果较好。亚单位疫苗生物技术疫苗概念：生物技术疫苗是利用生物技术制备的分子水平的疫苗。种类基因工程亚单位疫苗：用DNA重组技术，将编码病原微生物保护性抗原的基因导入受体菌或细胞，使其在受体细胞中高效表达，分泌保护性抗原肽链。提取保护性抗原肽链，加入佐剂即制成基因工程亚单位疫苗。合成肽疫苗：用化学合成法人工合成病原微生物的保护性多肽，并将其连接到大分子载体上，再加入佐剂制成疫苗。抗独特型疫苗：抗独特型抗体，可刺激机体产生与抗原特异性抗体具有同等免疫效应的抗体，由此制成的疫苗。DNA疫苗：将编码保护性抗原的基因与能在真核细胞中表达的载体DNA重组，用重组的DNA做的疫苗。基因工程活疫苗：基因缺失疫苗：是用基因工程技术将毒株毒力相关基因切除构建的疫苗。重组活载体疫苗：是用基因工程技术将保护性抗原基因（目的基因）转移到载体中，使之表达。非复制性疫苗：又称活—死苗，与重组活载体疫苗类似，但载体病毒接种后只产生顿挫感染，不能完成复制过程，无排毒的隐患，同时又可表达目的抗原，产生有效的免疫保护。

寄生虫疫苗由于寄生虫大多有复杂的生活史，具有功能抗原和非功能抗原，其虫体抗原极其复杂并具有高度多变性，因此，较为理想的寄生虫疫苗不多。疫苗使用的注意事项疫苗的质量疫苗的保存和运输疫苗的稀释与及时使用选择适当的免疫途径制定合理的免疫程序

免疫剂量、接种次数及时间间隔疫苗的型别与疫病型别的一致性药物的干扰防止不良反应的发生诊断液概念：利用微生物、寄生虫或其代谢产物，以及含有其特异性抗体的血清制成的生物制品。种类：诊断抗原变态反应性抗原血清学反应抗原诊断抗体诊断血清诊断特殊抗体免疫血清概念：动物经反复多次注射同一种抗原物质后，