无病毒苗木繁育技术（苗木生产技术）

无病毒苗木脱毒技术主要内容01无病毒苗木定义及培育意义02病毒病的传播途径03无病毒苗木脱毒方法又称为脱毒苗，是指经过脱毒处理和病毒检测，证明确已不带指定病毒，且无病毒病症状表现的健康苗。一、无病毒苗木定义及培育意义概念01一、无病毒苗木定义及培育意义病毒病对园艺植物的危害02种子发芽率降低苗期分株数量减少嫁接不亲和萌芽率降低，生长量减少枣疯病一、无病毒苗木定义及培育意义病毒病对园艺植物的危害02产量降低果实品质下降树势衰退，直至死亡枣疯病卷叶病卷叶病葡萄病毒病卷叶病新梢扇叶病葡萄病毒病苹果茎沟病毒苹果茎痘病毒苹果病毒病一、无病毒苗木定义及培育意义培育无病毒苗木的意义03123提高产量提高品质增强抗病性扇叶病二、病毒病的传播途径12接触传染借助媒介传播主要包括营养繁殖材料接触、汁液接触、伤口或根系接合等接触面传播病毒。接穗、苗木、花粉、种子、虫害等均可以传播病毒。三、无病毒苗木脱毒方法0102030405热处理脱毒微茎尖培养脱毒热处理结合茎尖脱毒花药培养脱毒茎尖微体嫁接脱毒1.热处理脱毒12原理方法植物处于高温环境中，体内病毒全部或部分钝化，不能生成或生成病毒很少，病毒含量不断降低，从而达到脱毒目的。a.温汤浸渍处理脱毒b.热空气处理脱毒已用热处理脱除的果树病毒果树病毒种类热处理脱毒难易温度（℃）时间柑橘柑橘速衰病毒3928天容易柑橘裂皮类病毒3833周很困难柑橘脉突病毒40/308周困难柑橘碎叶病毒40/30+44/306+2周困难苹果苹果褪绿叶斑病毒3720天容易苹果茎痘病毒3720天容易苹果花叶病毒372-3周容易1.热处理脱毒1.热处理脱毒核果类李属坏死环斑病毒3817天容易李痘病毒3714-21天容易李矮缩病毒3817天容易樱桃绿环斑病毒3814天容易桃X病37.53周容易桃黄化病3514天容易樱桃绿环斑驳病毒386周困难李线纹斑病毒3721-28天容易梨梨环纹花叶病毒3720天容易梨脉黄化病毒363周容易葡萄葡萄扇叶病毒3521天容易葡萄卷叶病毒388周困难葡萄栓皮病毒3814天很容易2.微茎尖培养脱毒12原理过程茎尖或根尖分生组织（0.1－0.5mm）大多不含病毒。a.取材：取新梢顶端3－5cmb.消毒c.接种：切取0.2－0.5mm的茎尖组织接种于培养基上。2.微茎尖培养脱毒微茎尖分组织培养花药接种在诱导愈伤组织培养基上，诱导产生愈伤组织，然后从愈伤组织再分化产生芽，长成小植株，从而获得无病毒苗。3.花药培养脱毒4.茎尖微体嫁接脱毒12适用植物操作过程茎尖培养脱毒生根困难，不能获得完整植株的植物。a.培养砧木：种子去皮后接在MS培养基上，25℃环境下暗箱培养2周，转入光照培养。b.准备微茎尖：从供体上采集茎尖。4.茎尖微体嫁接脱毒34嫁接嫁接苗培养从试管中取出砧木，切去子叶，留1－2cm长的上胚轴，切去过长的根系，保留4－6cm。茎顶部一侧切U切口，茎尖置于切口上。送入MS液体培养基中，由滤纸桥支撑进行培养。4.茎尖微体嫁接脱毒5移栽培养1个月左右，具2－3片叶时移入基质中，套袋、保温，保湿，20天后成活。4.茎尖微体嫁接脱毒12适用植物操作过程茎尖培养脱毒生根困难，不能获得完整植株的植物。a.培养砧木：种子去皮后接在MS培养基上，25℃环境下暗箱培养2周，转入光照培养。b.准备微茎尖：从供体上采集茎尖。5.热处理结合茎尖培养脱毒将热处理后的植株选取嫩梢，切取0.4～0.5mm大小的茎尖进行组织培养；或从田间植株上取嫩梢，剥取0.4～0.5mm大小的茎尖培养成株，在光照培养箱中进行热处理后，再切取梢端培养成株。移栽成活后，进行脱毒效果的鉴定。无病毒苗木的鉴定及保存01020304目录：脱毒效果的鉴定农艺性状鉴定无病毒苗木的繁殖无病毒苗木的保存1234指示植物法电子显微镜法抗血清鉴定法分子生物学检测法一、脱毒效果的鉴定

利用病毒在其他植物上产生特定症状作为鉴别病毒存在与否及种类的方法称指示植物法。一、脱毒效果的鉴定1.指示植物检测灵敏、准确、可靠、操作简便。根据不同病毒，选择合适的指示植物。一、脱毒效果的鉴定1.指示植物检测（1）优点：（2）对指示植物的要求：容易栽培。对要鉴别的病毒敏感，易接种，易感染，症状显著。一、脱毒效果的鉴定汁液涂抹法嫁接接种法1.指示植物检测(3)鉴定方法:一、脱毒效果的鉴定1.指示植物检测（1）汁液涂抹法香石竹汁液涂抹脱毒鉴定法操作示意图研钵中研磨，过滤。15432取被鉴定植物幼叶1－3g。滤液中加少量500－600目金刚砂。棉花球醮汁液涂抹叶面2－3次。指示植物15－25℃培养。一、脱毒效果的鉴定1.指示植物检测（1）汁液涂抹法一、脱毒效果的鉴定1.指示植物检测（2）嫁接接种法草莓指示植物小叶嫁接检测法示意图一、脱毒效果的鉴定1.指示植物检测（2）嫁接接种法将被鉴定植物的芽或幼叶嫁接在指示植物上，4～6周后根据指示植物症状来判断是否脱毒。抗原与抗体发生特异性反应（血清学反应），根据反应的症状可鉴别病毒存在与否和种类，这种方法称为血清学鉴定。一、脱毒效果的鉴定(1)概念：2.抗血清鉴定法一、脱毒效果的鉴定2.抗血清鉴定法(2)原理：病毒侵入动物体后，动物血清中会产生抗体，含抗体的血清称为抗血清，病毒即为抗原。专一性高，结果准确，快速简便，一般几小时甚至几分钟就可完成。①间接法：是用家兔球蛋白的山羊抗体与酶结合后制成羊抗兔酶标记抗体，检测各种病毒。一、脱毒效果的鉴定2.抗血清鉴定法（3）优点：（4）方法：②双抗体夹心法：是用酶特异性抗体检测抗原的方法。利用电镜直接观察、检查出有无病毒存在。还可得知有关病毒颗粒的大小、形状和结构。一、脱毒效果的鉴定(1)概念：3.电子显微镜法一、脱毒效果的鉴定3.电子显微镜法(2)优点：由于观察病毒特征是相当稳定的，故对病毒鉴定及研究一种未知的病原物是很重要的。通过检测病毒核酸来证实病毒的存在。一、脱毒效果的鉴定(1)概念：4.分子生物学检测法一、脱毒效果的鉴定(2)优点：

此法操作简便，灵敏度高，特异性强，检测速度快，可用于大量样品的检测。4.分子生物学检测法无病毒苗木经过脱毒和脱毒效果鉴定后，还需进行田间农艺性状鉴定，确证脱毒苗仍保持原品种的特征特性之后，才能作为原种进行推广。二、农艺性状鉴定三、无病毒苗木的繁殖主要采用无性繁殖方法，如嫁接、扦插、压条、匍匐茎繁殖和微型块茎(根)繁殖等方法繁育无病毒苗木。1.建立无病毒母本园2.完善繁育手续3.规范繁育