动物药敏实验（动物实验室诊断技术）

细菌的药敏试验——纸片扩散法一细菌的药敏试验---纸片扩散法（一）器材与试剂接种环、洒精灯、试管架、玻璃笔、恒温培养箱、镊子、购买的各种抗生素药敏纸片、普通琼脂平板、无菌的生理盐水，无菌棉拭子，大肠杆菌、葡萄球菌的培养物或临床分离的纯菌株等。（二）操作步骤1．在无菌超净台中，用经(酒精灯)火焰灭菌的接种环挑取适量细菌纯培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式;用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。(另:可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面，要求一定涂布均匀致密。细菌的药敏试验——纸片扩散法二2．涂布后的平板培养基在室温静置3～5分钟，将镊子于酒精灯火焰灭菌后略停冷却，取药敏纸片贴到平皿培养基表面。为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。为了使能准确的观察结果，要求药敏片能有规律的分布于平皿培养基上;一般可在平皿中央贴一片，外周可等距离贴若干片(外周一般可贴4片)，每种药敏纸片的间距大于2cm,，避免抑菌圈重叠，每种药敏片的名称要记住。每换一种药敏纸片镊子都要于酒精灯火焰灭菌，药敏纸片贴上后不得再移动位置。3．将平皿培养基倒置于37℃温箱中培养18～24小时后，观察效果。（三）、结果观察在涂有细菌的琼脂平板上，抗菌药物在琼脂内向四周扩散，其浓度呈梯度递减，因此在纸片周围一定距离内的细菌生长受到抑制。18～24小时培养后形成一个透明的抑菌圈，抑菌圈越大，说明该菌对此药敏感性越大，反之越小，若无抑菌圈，则说明该菌对此药具有耐药性。其直径大小与药物浓度、划线细菌浓度有直接关系。药敏实验的结果，应按抑菌圈直径大小作为判定敏感度高低的标准。细菌的药敏试验——纸片扩散法三药敏试验的基本原理一一、基本原理该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度。同时，纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长，而抑菌范围外的菌株则可以生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈，不同的抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同，抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度，抑菌圈越大说明测试菌对药物的敏感程度越强，并与该药物对测试菌的MIC呈负相关。MIC:最小抑制浓度，表示抗生素的抗菌活性,指可以抑制菌生长的最低抗菌的浓度。MIC越低说明该药物对相应的病原菌的作用越强。通俗点说就是：能抑制培养基内细菌生长的最低浓度。药敏试验的基本原理二二、临床意义抗菌药对细菌性传染病的控制起到了非常重要的作用，但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药，很多致病性细菌产生了耐药性，使得抗菌药对细菌性疾病的控制效果越来越差，不但造成药物浪费，而且还延误病情，给养殖户造成了很大的经济损失。随着新型致病菌的不断出现，抗菌药的防治效果越来越差。并且各种致病菌对不同的抗菌药物的敏感性不同，同一细菌的不同菌株对不同抗菌药物的敏感性也有差异。长期以来，各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药物往往失去药效，以及不能很好的掌握药物对细菌的敏感度，所以一个正确的结果，可供临床医师选用抗菌药物的参考，并提高疗效。药敏试验的基本原理三具体来讲，有以下几点实践意义：1、帮助正确选择有效药物：无论是初治、复治或难治的菌阳患者避免使用低效或无效药物，真正达到合理，有效用药。2、真正做到适量用药：患者虽然对某种药物一般常用剂量产生耐药，但如果适当加大药量，跟据药敏试验结果调整用药剂量，在病畜能承受的范围内，不失治疗时机。3．及时终止无效药物的毒副作用：如果病畜已对某种药物产生了耐药性，而未做药敏试验，还在继续应用，无形中既增加了经济开支又增加了药物对动物机体的损