云上黑山羊养殖规范 第2部分：人工授精

1DBFORMTEXT153/TFORMTEXT1XXXX—FORMTEXT1XXXX云上黑山羊养殖规范云上黑山羊养殖规范第2部分：人工授精本文件确立了人工授精采精用云上黑山羊种公羊选择、采精、精液检查、精液保存、冻精质量评价、母羊发情鉴定和输精等技术要求。本文件适用于云上黑山羊的人工授精操作。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。DB53/T760.2云南半细毛羊养殖第2部分：人工授精DB53/T860山羊细管冻精制作规程3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4采精4.1采精器具、试剂及地点4.1.1器具假阴道、电刺激采精仪、集精杯、15mL锥形离心管、移液器、注射器、水浴锅、160℃~200℃的干燥箱、煮沸消毒器、显微镜、载玻片、温度计、保温杯。4.1.2试剂凡士林、75%酒精、生理盐水。4.1.3地点符合DB53/T860的要求。4.2操作按DB53/T760.2的要求执行。5精液检查5.1检查2DBFORMTEXT153/TFORMTEXT1XXXX—FORMTEXT1XXXX正常的公羊精液应符合以下要求：a)呈乳白色，浓厚不透明；b)用肉眼能观察到快速的云雾状运动；c)射精量0.5mL～2.0mL。5.2活力评定精子活力采用0～1.0的10级评分标准。在显微镜视野里，100%的精子做活跃的直线前进运动评为1.0分，80%做直线前进运动评为0.8分，以此类推。5.3密度评定精子密度评定分为“密”、“中”、“稀”、“无”，具体要求如下：a)精子密度很大，精子与精子间的距离小于一个精子的长度为“密”；b)精子间有明显的空隙，两精子间的距离相当于1个～2个精子长度为“中”；c)精子数量少，精子之间超过两个精子的长度为“稀”；d)若观察不到精子则记为“无”。6精液保存6.1常温保存6.1.1器具15mL或50mL锥形塑料离心管、0.22μm一次性滤器，0.45μm一次性滤器，水浴锅。6.1.2试剂三羧甲基氨基甲烷（Tris）、柠檬酸、葡萄糖、大豆卵磷脂、青霉素、链霉素、蛋黄、脱脂奶粉、0.9%生理盐水。6.1.3稀释液精液常温制作保存稀释液配方见附录A。6.1.4稀释精液按照以下步骤进行稀释：a)将稀释液于水浴锅（37℃)中平衡30min，至稀释液温度与精液相同；b)精液稀释时，稀释液沿管壁缓缓加入，切忌速度过快；c)轻轻晃动使精液和稀释液混匀，不应用力摇晃或搅拌。6.1.5常温保存原则常温保存应遵循以下原则：a)避免强烈光线的照射及高温；b)精液应恒温保存，降温或升温应缓慢进行；c)宜减少精液与空气的接触。6.2冷冻保存3DBFORMTEXT153/TFORMTEXT1XXXX—FORMTEXT1XXXX按DB53/T860的规定执行。7冻精质量评价输精冻精精液质量应满足以下要求：a)解冻后精子活力不低于0.35，精子畸形率低于15%；b)质膜完整率不低于40%，顶体完整率不低于50%；c)运动速度在100μm/s以上，每剂细管冻精解冻后有效精子数不低于1000万个；d)鲜精活力不低于0.75，精子密度“中”以上。8母羊发情鉴定按DB53/T760.2的要求执行。9输精9.1输精时间母羊发情后12h～24h第1次输精，间隔8h～12h第2次输精，若还持续发情的，可在第2次输精后8h～12h进行第3次输精。9.2输精输精按以下步骤进行：a)输精前将母羊外阴部用0.1%新洁尔灭擦洗消毒，再用生理盐水冲洗干净；b)将用生理盐水温润过的开膣器闭合按母羊阴门的形状慢慢插入后轻轻转动90度，打开开膣器，用额灯或手电筒光源寻找子宫颈口；c)将输精枪慢慢插入子宫颈口内1.0cm～2.0cm，将精液注入子宫颈口内；d)输精完毕使母羊继续倒立2min，轻拍母羊背部，防止精液倒流出。9.3记录人工授精记录见表1。表1人工授精记录表号数号量号量号量4DBFORMTEXT153/TFORMTEXT1XXXX—FORMTEXT1XXXX（资料性）精液常温保存稀释液配方A.1精液常温保存稀释液配方精液常温保存稀释液各配方如下：a)配方一，脱脂奶粉10g、葡萄糖0.2g溶于100mL蒸馏水，95℃加热处理8min。冷却至室温后加入0.5g青霉素和0.5g链霉素。然后于8000g×30min离心取上清，用0.45μm滤器过滤备用；b)配方二，取Tris3.6g、葡糖糖0.5g、柠檬酸2g、青霉素0.006g、链霉素0.1g溶于90mL蒸馏水中，0.22μm滤器过滤除菌后于4℃保存。使用前加入1.5mL蛋黄，并定容至100ml，用0.45μm滤器过滤备用；c)配方三，取Tris2.71g、葡萄糖1.0g、柠檬酸1.4g、青霉素0.0627g、链霉素0.1335g溶于90mL蒸馏水中，0.22μm滤器过滤除菌后于4℃保存。使用前加入1.5mL蛋黄，并定容至100mL，用0.45μm滤器过滤备用；d)配方四：取Tris3.1g、柠檬酸1.7g、葡萄糖1.3g、青霉素0.062