上海市二模试题汇编微生物

2022届上海市二模试题汇编微生物（一2022徐汇二模）1.（一）、番茄枯萎病的微生物防治番茄枯萎病是由尖孢镰刀菌引发的番茄主要病害之一。研究人员拟从新鲜蚯蚓粪中分离筛选出对番茄枯萎病有良好抑制效果的拮抗细菌，以期为番茄枯萎病提供生物防治。【阶段一分离筛选拮抗菌株】将蚯蚓粪加入无菌水中制成悬浮液，利用NA培养基进行纯化后，将获得的不同菌株分别接种至NB培养基。培养48h后，进行“平板对峙实验”[该实验的操作为：在有PDA培养基的空白平板一侧放置一直径为5mm番茄枯萎病菌的菌块，在平行另一侧放置直径5mm的经过处理（滴加拮抗菌液或清水）的滤纸片]，每组做3次重复，实验流程见图。（1）以下对“平板对峙实验”的表述错误的是____________A.对照组滤纸片用无菌水处理B.实验组滤纸片用拮抗菌菌液处理C.培养至对照组枯萎病菌菌落长满时开始测量并计算抑制率D.抑制率=（处理组枯萎病菌菌落直径对照组枯萎病菌菌落直径）/对照组枯萎病菌菌落直径×100%（2）步骤I使用的接种方法是____________（填写名称）；I~Ⅲ环节中需要无菌操作的是____________。（3）为达到阶段一的目的，应选择“平板对峙实验”培养后番茄枯萎病菌菌落直径____________（大/小/适中）的细菌。【阶段二防治效果研究】番茄种子播种于营养钵中，实验共设置4个处理组（见下表），每组100盆，接种后用于防治效果的测定。CK组KW组DX组D+K组接种枯萎病菌接种拮抗菌（4）各实验组接种的方案分别是CK组：___________D+K组：___________（可填写：清水处理、接种拮抗菌、接种枯萎病菌、接种枯萎病菌与拮抗菌）能证明拮抗菌对枯萎病菌的作用的组别是：___________。【答案】（1）D（2）①.平板划线法②.Ⅰ、II、III（3）小（4）①.清水处理②.接种枯萎病菌与拮抗菌③.D+K组【解析】【分析】分析图形：Ⅰ为接种，根据NA培养基是菌落的形态可知，接种的方法为平板划线法；Ⅱ为将NA培养基中获取的不同菌株分别接种至NB培养基；Ⅲ为接种后进行平板对峙实验。【小问1详解】AB、本实验的目的是探究拮抗细菌是否对番茄枯萎病有良好抑制，故实验组滤纸片用拮抗菌菌液处理，对照组滤纸片用无菌水处理，AB正确；C、由于对照组没有用拮抗菌菌液处理，故培养至对照组枯萎病菌菌落长满时，通过对滴加拮抗菌液处理组的统计后，开始测量并计算抑制率，C正确；D、抑制率%=（1拮抗菌液处理组菌落半径÷对照菌落半径）×100%，D错误。故选D。【小问2详解】据图可知，NA培养基中是各种线的分布，故步骤Ⅰ使用的接种方法是平板划线法；微生物分离和培养的关键就是防止杂菌污染，故Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ都需要进行无菌操作。【小问3详解】为达到阶段一的目的，应选择“平板对峙实验”培养后番茄枯萎病菌菌落直径小的细菌，因为番茄枯萎病菌菌落直径越小，说明抑制效果越好。【小问4详解】CK组属于对照组，根据实验设计的对照原则与单一变量原则可知，应用清水处理；要能证明拮抗菌对枯萎病菌的作用，D+K组应接种枯萎病菌与拮抗菌，然后进行防治效果的测定。【点睛】本题结合图形与表格，主要考查微生物的分离和培养的相关知识，要求考生识记微生物接种的方法，能正确分析题文和图形，明确实验的目的，再结合所学知识和题中信息正确答题。（一2022宝山二模）2.莠去津是一种含氮农药，在土壤中不易降解，为修复被其污染的土壤，按下图1程序选育能降解莠去津的细菌（目的菌）。已知莠去津在水中溶解度低，含过量莠去津的固体培养基不透明。（1）由图1推断，从A瓶到C瓶液体培养的目的是_________A.初步选择能降解莠去津的细菌 B.初步选择能降解莠去津的细菌菌落C.增加能降解莠去津的细菌数量 D.去除土壤中的杂质（2）图2为A~C瓶中三类细菌的最大密度柱形图，甲类细菌密度迅速降低的主要原因是__________

A.莠去津会杀死甲类细菌B.培养液中缺少甲类细菌可利用的氮源C.振荡造成培养液中溶氧增加，抑制了甲类细菌生长D.培养液中没有甲类细菌寄生的宿主（3）本实验中将C瓶菌种接种到固体培养基的方法是__________，接种之前通常要进行__________。（4）一段时间后，培养基出现无透明圈和有透明圈两种菌落。请根据培养结果，结合两种菌落中细菌利用的氮源，分析说明哪种菌落中的细菌是筛选出来的目的菌。_____________________。（5）为弄清固体培养基中的非目的菌来自C瓶菌种还是培养基，应如何设置对照组？_____________________。【答案】（1）AC（2）BC（3）①.稀释涂布平板法②.梯度稀释（4）有透明带菌落是筛选出来的目的菌（5）本实验的对照组应该为配制的培养基灭菌后不接种，与实验组放在相同条件下培养【解析】【分析】当可能提供目的菌的环境中菌种较少时，为确保能够从样品中分离到所需要的微生物，通常要进行数次选择培养以提高其密度。选择培养后目的菌仍与其他杂菌混在一起，因此若要获得纯种菌，必须在固体培养基上接种分离，为保证在固体培养基上得到单个菌形成的菌落，在接种前要进行梯度稀释。培养基上有透明带，说明莠去津被降解了，也就说明有我们所需要的目的菌。【小问1详解】图中从A瓶到C瓶液体培养过程为选择培养，目的是初步选择能降解莠去津的细菌(目的菌)并增加其数量，AC正确。故选AC。【小问2详解】甲类细菌密度迅速降低的主要原因是培养液中缺少甲类细菌可利用的氮源或(和)有氧条件抑制了甲类细菌的生长，BC正确。故选BC。【小问3详解】从培养液中选取细菌进行涂布培养，如果直接进行接种，培养基中的菌落将会很密，无法进行纯化，通过梯度稀释后再接种，培养基中菌落将会分开，这时就可以进行纯化和分离了。通过培养基上的菌落分布特征可以判断接种方式为稀释涂布平板法。【小问4详解】固体培养基加的是无氮培养液，据题意，无透明菌落是不能降解莠去津中有机氮的菌落，它的生存只能利用空气中的氮；有透明带菌落能够降解莠去津这种含氮有机物，氮源为莠去津，故有透明带菌落是筛选出来的目的菌。【小问5详解】本实验的对照组应该为配制的培养基灭菌后不接种，与实验组放在相同条件下培养。（2022宝山三模）3.产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究如图，据图回答下列问题：（1）图中②过程称为_____，③过程采用的接种方法是_____。（2）图中I号培养基称为_____（按功能分）；该培养基中除了加入脂肪外，还需加入另一种重要的营养成分_____。a、琼脂b、葡萄糖c、硝酸铵d、碳酸氢钠（3）一般对配制的培养基采用高压灭菌，其目的是_____。（4）为提高酵母菌产酶能力，在图的①过程采用射线辐照育种，培养纯化获得A、B两突变菌株，该育种方法是_____。A.杂交育种 B.诱变育种C.单倍体育种 D.多倍体育种（5）在处理含油废水的同时，可获得蛋白质，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如下图，据图分析，应选择菌株_____进行后续相关研究，理由是_____。【答案】（1）①.稀释②.平板涂布法（2）①.选择培养基②.c（3）杀死微生物（细菌）和芽孢（4）B（5）①.B菌株②.与菌株A比较，B菌株增殖速度快，蛋白产量高，降解脂肪能力强，净化效果好。【解析】【分析】1.微生物常见的接种的方法：（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。【小问1详解】图中②过程进行的是梯度稀释步骤，此后进行涂布法接种，即③过程采用的接种方法是平板涂布法。【小问2详解】本实验的目的是筛选产脂肪酶酵母菌株，因此需要配制以脂肪为唯一碳源的培养基进行选择，即图中I号培养基称为选择培养基；培养基的基本成分包括碳源、氮源、水分和无机盐，脂肪作为提供碳源的物质，因此在该培养基中除了加入脂肪外，还需加入另一种重要的营养成分氮源，这里应该选择硝酸铵，即c正确。故选c【小问3详解】培养基的灭菌方法通常用高压蒸汽灭菌法，该方法可以杀死微生物（细菌）和芽孢，以便获得纯净培养物。【小问4详解】为提高酵母菌产酶能力，在图的①过程采用射线辐照育种，其目的是诱发基因突变，获得高效产生脂肪酶的突变菌株，通过培养纯化获得A、B两突变菌株，该育种方法原理是基因突变，所用的育种方法是诱变育种，即B正确。故选B。【小问5详解】根据曲线图可知，与菌株A比较，菌株B的增殖速度快，单细胞蛋白产量高，有利于实现污染物资源化。而且其降解脂肪能力强，则净化效果好，因此应选择菌株B进行后续相关研究。（一2022杨浦二模）4.在植物的生存环境中，存在着各种各样的微生物。有资料显示，一些植物内生微生物与宿主发生关联时，可明显增强宿主的抗病性。以下为从菠菜叶中分离出内生细菌，随后筛选出对菠菜枯萎病菌有拮抗作用的菌株的过程。（1）依据所学知识，将内生细菌（用①表示）和酵母菌（用②表示）的比较结果填在表虚线方框内（填“有”或“无”)DNA细胞核细胞膜核糖体①②（2）取0．1g菠菜叶，经70%酒精和0．2%升汞进行消毒后，接种于培养基上。培养48h后，没有观察到菌落。这说明。A.菠菜叶表面微生物已被杀死 B.菠菜叶内在微生物已被杀死C.菠菜叶内不存在内在细菌 D.菠菜叶细胞已被全部杀死（3）欲分离内生细菌，将上述0．1g菠菜叶放入无菌研钵中，研磨成匀浆，此过程中应加入A.纯净水 B.无菌水 C.自来水 D.蒸馏水用上述方法制备不同品种菠菜的研磨液，然后用圆纸片吸附不同品种菠菜研磨液置于培养基上，比较它们对菠菜枯萎病菌的作用。在30°C黑暗条件下培养48h，随后进行筛选和鉴定（如图)。（4）据题干信息分析，图中的菌液a应是。A.菠菜研磨液 B.内生细菌C.通用培养基 D.菠菜枯萎病菌（5）图中①与②周围透明圈的大小不同，合理的解释是。A.圆纸片大小不同 B.菠菜研磨液来源不同C.菠菜枯萎病菌浓度不同 D.菠菜内生菌抗菌能力不同【答案】（1）DNA细胞核细胞膜核糖体①有无有有②有有有有

（2）A（3）B（4）D（5）D【解析】【分析】1、原核细胞与真核细胞的区别有：原核细胞体积小，无核膜、核仁，DNA上无蛋白质，除核糖体外，无其他细胞器。真核细胞体积较大，有核膜、核仁DNA与蛋白质形成染色质（染色体），细胞器的种类多，结构复杂。其中最主要的区别是：有无核膜包围的细胞核。2、选择培养基：根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选率。【小问1详解】内生细菌是原核生物，酵母菌是真核生物，所以二者不同点和相同点如下：DNA细胞核细胞膜核糖体内生细菌有无有有酵母菌有有有有

【小问2详解】根据题意可知培养48h后，没有观察到菌落，说明经70%酒精和0.2%升汞进行消毒后，菠菜叶表面微生物已被杀死了。故选A。【小问3详解】在分离过程中，为了控制无菌条件，应该用无菌水。故选B。【小问4详解】实验的目的是比较不同品种菠菜的研磨液对菠菜枯萎病菌的作用，所以菌液a是菠菜枯萎病菌。故选D。【小问5详解】圆纸片上吸附不同品种菠菜研磨液，如果对菠菜枯萎病菌有抑制作用，则会形成透明圈，如果抑制作用不同，则形成的透明圈大小不同。透明圈的大小不同的原因是菠菜内生菌抗菌能力不同。故选D。【点睛】本题考查微生物的实验室培养，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系，形成知识网络结构的能力；能运用所学知识，准确判断问题的能力。（一2022宝山中学线上测试）5.谷氨酰胺转胺酶（TG酶）作为一种新型食品添加剂广泛应用于食品加工领域，如千叶豆腐、肉丸、肠类、碎肉重组等加工过程，能显著改善凝胶强度，使产品更有弹性。茂原链霉菌（放线菌）是食品行业中常见的TG酶生产菌株，其培养基（高氏一号）的组成成分如表所示。淀粉KNO3KHPO4MgSO4·7H2ONaClFeSO4·7H2O琼脂水pH20g1g05g0.5g0.5g001g20g1000mL（1）表中为茂原链霉菌提供碳源的物质是___________，该物质在茂原链霉菌生长代谢过程中的主要作用是___________。在茂原链霉菌的生产过程中存在菌株产量较低的问题，使得其生产成本居高不下。为了提高TG酶生产菌株的产量，需借助一定的育种方法不断的优化菌种。常见的TG酶生产工艺如图所示。（2）图中育种方法的原理是利用紫外线照射直接改变菌株的___________。A.DNA B.mRNA C.蛋白质 D.核糖体（3）图中，TG酶生产工艺中步骤①②③④的设计目的是___________。（4）发酵培养基中碳源和氮源浓度对微生物的生长影响较大，并直接影响TG酶的产量。为进一步确定碳氮浓度的最佳组合，设计了如下方案，然后比较TG酶的产量。其中最科学的是____________。A.选择最适浓度碳源和最适浓度氮源组合B.选择最适浓度碳源和各种浓度氮源组合C.选择最适浓度氮源和各种浓度碳源组合D.选择各种浓度氮源和各种浓度碳源组合（5）日常生活中，存在着谈“食品添加剂”色变的现象。根据题目信息，判断在食品加工过程中合理适量的使用TG酶是否对人体有危害，并分析原因：____________。【答案】（1）①.淀粉②.提供能量（2）A（3）通过紫外照射，提高突变频率，不断筛选纯合得到TG酶高产菌株（4）D（5）合理适量的使用TG酶对人体没有危害。会被消化道降解，变成氨基酸被吸收。【解析】【分析】1、培养基一般可为微生物的生长提供碳源、氮源、水、无机盐。分析表中数据，其中可溶性淀粉提供碳源、硝酸钾提供氮源。2、对培养基常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。【小问1详解】淀粉是含碳有机物，微生物可以利用，可以为茂原链霉菌提供碳源；茂原链霉菌可以将淀粉水解成葡萄糖，葡萄糖是呼吸的底物，为微生物生长提供能量。【小问2详解】紫外线照射可以直接改变菌种的DNA，提高基因突变的频率，从而达到培育新品种的目的。故选A。【小问3详解】①是为了提高菌株突变的频率，②是将单菌落分别接种到液体培养基中进行扩大培养，③是在液体培养基中进行高通量初筛，获得需要的菌种；④为纯化，进一步筛选得到性状优良的菌种，所以①②③④的设计目的是通过紫外照射，提高突变频率，不断筛选纯合得到TG酶高产菌株。【小问4详解】由于不知道碳氮浓度的比值，因此选择各种浓度氮源和各种浓度碳源组合最佳，从中挑选最适的碳氮比，故选D。【小问5详解】没有危害。TG酶是蛋白质，添加在食品中随着食品一起被摄入，在消化道被蛋白酶降解，因此对人体无害。【点睛】本题主要考查微生物的分离与纯化，要求学生有一定的理解分析能力。（2022闵行二模）6.采后的葡萄在运输、贮藏等过程中，易受黑曲霉感染而腐烂引起"黑粉病"，食用价值下降。为解决这一问题，研究人员从葡萄园土壤中分离、纯化和筛选出对黑曲霉有较强抑制作用的拮抗细菌，具体流程如图。（1）黑曲霉与拮抗细菌都具有的结构或物质是____________。①质膜②核膜③核酸④核糖体⑤线粒体（2）步骤1采用的接种方法是____________。（3）下列关于步骤Ⅳ的说法正确的有____________。A.拮抗细菌与黑曲霉竞争营养与生存空间B.拮抗细菌可能产生了某种物质抑制黑曲霉的生长繁殖C.黑曲霉可能产生了某种抗生素抑制拮抗细菌的生长繁殖D.拮抗细菌对黑曲霉抑制作用越大，则其周围的透明圈越大（4）科学家从分离出的60株细菌中筛选出了14株对黑曲霉有抑菌效果的拮抗细菌。以下属于菌株鉴定的依据有____________。A.菌落特征 B.细菌形态 C.基因组测序 D.有无菌丝（5）为进一步研究拮抗细菌对葡萄中黑曲霉的抑制效果，研究人员进行了下图实验，其中施加的处理①是____________、②是____________。【答案】（1）①③④

（2）涂布分离法

（3）ABD（4）ABC（5）①.黑曲霉②.黑曲霉和拮抗细菌【解析】【分析】涂布分离法：先将培养的菌液稀释，通常稀释到105～107之间，然后取0.1ml不同稀释度的稀释菌液放在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上进行培养，在适当的稀释度下，可产生相互分开的菌落。【小问1详解】黑曲霉是真核生物，拮抗细菌是原核生物，二者都具有①质膜、③核酸（DNA和RNA）、④核糖体，而②核膜、⑤线粒体是真核生物特有结构，故选①③④。【小问2详解】结合平板上菌落的分布（分别较均匀），可知步骤1采用的接种方法是涂布分离法。【小问3详解】结合步骤Ⅲ和Ⅳ可知，在拮抗细菌的中间接种了黑曲霉，最后拮抗细菌周围出现透明圈，而黑曲霉的菌落消失。A、黑曲霉与拮抗细菌都接种在同一块平板上，最终黑曲霉没有生长而拮抗细菌生长较好，可能是由于拮抗细菌与黑曲霉竞争营养与生存空间，且拮抗细菌的竞争能力更强，A正确；B、拮抗细菌可能产生了某种物质抑制黑曲霉的生长繁殖，使得黑曲霉不能生长，B正确；C、若黑曲霉可能产生了某种抗生素抑制拮抗细菌的生长繁殖，则结果应为有黑曲霉的菌落而无拮抗细菌的菌落，与图示结果不符，C错误；D、透明圈内黑曲霉均无法生长，拮抗细菌对黑曲霉抑制作用越大，则其周围的透明圈越大，D正确。故选ABD。【小问4详解】A、不同种类的细菌所形成的菌落，在大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面具有一定的特征，因此菌落特性可作为鉴定依据，A正确；B、不同种类的细菌形态有差异，细菌形态可以作为菌种鉴定的依据，B正确；C、不同的细菌基因组成不同，基因组测序可以作为菌株鉴定的依据，C正确；D、细菌没有菌丝，真菌才有，不可作为细菌的鉴定依据，D错误。故选ABC。【小问5详解】①发生腐烂，应该加的是黑曲霉；②未发生腐烂，根据前面的结果可知，拮抗细菌有抑制黑曲霉的作用，因此②加入的是拮抗细菌和黑曲霉。【点睛】本题主要考查菌种的分离与鉴定，要求学生有一定的理解分析能力。（2022长宁二模）7.土霉素被广泛用于畜禽饲料中预防疾病，这导致了其在环境中有大量残留，并抑制了土壤微生物生长。研究人员试图通过生物方法降解在环境中残留的土霉素。下图是土霉素化学结构式。（1）想从长期受土霉素污染的土壤中获得土霉素降解菌，应选用的培养基类型为__________。（2）实验中配置培养基时不能添加的营养成分包括___________。①NaH2PO4②葡萄糖③蒸馏水④土霉素⑤氨基酸⑥蔗糖研究人员筛选出了三种能降解土霉素的菌株。在培养基中分别接种这三种菌株，一段时间后测定培养基中的土霉素含量（如图）。（3）根据图可选择____________菌株为目标菌株。为确定目标菌株的微生物类型，可采用的方法有（）A.使用不同抗生素观察目标菌株的抗性B.观察目标菌株菌落特征C.显微镜观察目标菌株细胞结构D.将目标菌株的基因序列与微生物基因库中的序列进行比对将土霉素污染严重的土壤随机均分为四组，混入不同浓度的目标菌株，一段时间后土壤中的微生物情况如图所示（不同几何形状代表不同种类的微生物菌落）。（4）上述实验中微生物接种的方法为_____________。（5）治理土霉素污染土壤的适宜菌株浓度为_____________，请从物种多样性的角度分析原因：_____________。【答案】（1）选择培养基（2）②⑤⑥（3）BCD（4）稀释涂布法##涂布法（5）①.浓度Ⅲ②.浓度Ⅲ下土壤微生物的种类和分布均匀度最高，说明这一浓度的目标菌株降解土霉素的效果最好，土壤中的土霉素含量下降最快，各类微生物生长受到抑制作用最弱，因此使用浓度Ⅲ的目标菌株治理土霉素污染最合适。【解析】【分析】1、选择性培养基：一类根据某微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基，具有使混合菌样中的劣势菌变成优势菌的功能，广泛用于菌种筛选等领域。2、微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作为营养要素成分时并不是起单一方面的作用。3、稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。【小问1详解】利用选择性培养基，可使混合菌群中的某种（类）微生物变成优势种群，从而提高该种（类）微生物的筛选效率，因此想从长期受土霉素污染的土壤中获得土霉素降解菌，应选用的培养基类型为选择培养基。【小问2详解】微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。据题意可知，该培养基是要获得土霉素降解菌，应该以土霉素为唯一碳源和氮源的培养基，因此培养基中不能添加②葡萄糖、⑤氨基酸、⑥蔗糖。【小问3详解】据图可知，加入Y1菌株的培养基中土霉素的含量最少，说明土霉素被降解最多，降解土霉素的能力最强，因此可选择Y1菌株为目标菌株。菌落是菌种鉴别上的一个重要特征，菌落形态包括菌落的大小、形状、边缘、光泽、质地、颜色和透明程度等，不同种或同种在不同的培养条件下,菌落特征是不同的，因此为确定目标菌株的微生物类型观察目标菌株菌落特征，显微镜观察目标菌株细胞结构，将目标菌株的基因序列与微生物基因库中的序列进行比对，抗生素杀菌时没有特异性，都所有细菌对起作用，因此可采用的方法有BCD，BCD正确，A错误。故选BCD。【小问4详解】稀释涂布平板法是将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。据图可知，上述实验中微生物接种的方法为稀释涂布平板法。【小问5详解】浓度Ⅲ下土壤微生物的种类和分布均匀度最高，说明这一浓度的目标菌株降解土霉素的效果最好，土壤中的土霉素含量下降最快，各类微生物生长受到抑制作用最弱，因此使用浓度Ⅲ的目标菌株治理土霉素污染最合适。【点睛】本题考查微生物培养的相关知识，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系，形成知识网络结构的能力；能运用所学知识，准确判断问题的能力，属于考纲识记和理解层次的考查。（2022奉贤二模）8.黄曲霉是常见的真菌，多见于发霉的粮食、粮制品及其它霉腐的有机物上。黄曲霉素是由黄曲霉产生的代谢产物，具有极强的毒性和致癌性。科研人员用黄曲霉素Bl（AFB1）的结构类似物——香豆素（C9H6O2）筛选出能高效降解AFB1的菌株，具体过程如图所示，其中序号代表过程。（1）步骤①②③中需要无菌操作的是____________。（2）为了筛选到AFB1降解菌，最优的采样处是____________。A.细菌含量较多的土壤 B.霉烂的花生或玉米C.细菌含量较少的土壤 D.发霉的墙壁或玻璃（3）筛选AFB1降解菌实验时，图中1号培养基的碳源是____________（填文字），过程③所需要的工具有____________。A．无菌接种环B．无菌玻璃刮铲C．无菌滴管D．无菌的圆纸片（4）菌体对有机物的降解途径有胞外分泌物降解和菌体吸附降解两种。实验小组对降解菌的发酵液进行离心，发现菌沉淀液中AFB1的残留率明显低于上清液的。可推测，菌体降解AFB1的途径主要是____________。（5）经检测发现菌沉淀液存在多种蛋白质，为验证蛋白质K是降解AFB1的有效成分，科研小组设计了实验过程，如表，试管____________中有蛋白质K，试管甲是作为____________组。如果验证成功，则④与⑤的大小比较关系是：④____________⑤（填“大于/小于/等于”）。不同处理或测定试管甲试管乙培养过降解菌的沉淀液++蛋白质K水解酶+一段时间后，分别加入含AFB1的培养基测定培养基中AFB1含量④⑤表中“＋”表示添加，“－”表示不添加，甲乙试管所加物质的量均相同【答案】（1）①②③（2）B（3）①香豆素②.BC（4）菌体吸附降解（5）①.乙②.对照③.大于【解析】【分析】筛选目的菌株时应根据菌株的自身特点在特定范围（条件）进行筛选。【小问1详解】步骤①②③分别为样品稀释、选择培养、稀释涂布，为了保证不受其他杂菌的污染，三步均需在无菌条件下进行操作。【小问2详解】根据题意，黄曲霉是常见的真菌，多见于发霉的粮食、粮制品及其它霉腐的有机物上，应优先考虑在霉烂的粮食（花生或玉米）进行筛选，B正确，ACD错误。故选B。【小问3详解】图中Ι号培养基为选择培养基，根据题意，科研人员用黄曲霉素Bl（AFB1）的结构类似物——香豆素（C9H6O2）筛选出能高效降解AFB1的菌株，故选择培养基中的碳源为香豆素。过程③是稀释涂布平板，需要的工具为无菌玻璃刮铲（涂布）和无菌滴管（取稀释液）。BC正确，AD错误。故选BC。【小问4详解】若菌体降解途径为胞外分泌物降解，分泌物平均分布在溶液中，则上清液和沉淀液中AFB1的残留量应基本相同；若菌体降解途径为菌体吸附降解，则菌体所在的沉淀液中AFB1的残留率应明显低于上清液。【小问5详解】根据表中数据可知，试管甲中蛋白质K被水解，故乙中有蛋白质K。该实验的自变量为有无蛋白质K，所以甲组作为对照组，乙组为实验组。若实验成功，由于甲中无蛋白质K，导致AFB1未被降解，所以④大于⑤。（一2022黄浦二模微生物）9.枯草芽孢杆菌能分泌蛋白酶，后者在生物医药和日用化工等生产领域具有重要的经济价值，且已大规模产业化应用。（1）枯草芽孢杆菌属于原核生物，该类生物细胞的主要特征是___________。（2）在培养包括枯草芽孢杆菌在内的异养型微生物时，培养基营养成分应包括___________（选填序号组合）。①葡萄糖②蛋白质③生长因子④无机盐⑤水为筛选枯草芽孢杆菌的蛋白酶高产株，将分别浸过不同菌株（a~e）的分泌物提取液的无菌圆纸片置于含某种高浓度蛋白质的平板培养基表面，在37℃恒温箱中放置2~3天，结果如图。（3）为使实验数据更加可信，相关实验操作中还应增设浸过___________的圆纸片进行对照实验。图7中，菌株b提取物周围没有形成明显清晰区的可能原因有___________。（4）据图分析，大规模产业化首选的菌株是___________。为进一步提高该菌株产酶的能力，可采用射线辐照进行___________育种。下图显示枯草芽孢杆菌蛋白酶和其它酶的热稳定性数据，即酶在不同温度下保温足够长的时间，再在酶活性最高的温度下测其酶活性。（5）据图分析，为大幅度降低发酵液中其他酶的活性，从而将蛋白酶与其他酶的活性相区分，在工业化生产过程中，最好将枯草芽孢杆菌发酵液在___________保温一定时间，再制备酶制剂。A.30~40℃ B.50~60℃ C.60~70℃ D.70~80℃（6）枯草芽孢杆菌蛋白酶制备的合理工艺步骤应为___________（选择序号并排序）。①过滤②干燥③破碎④浓缩【答案】（1）无成形细胞核（2）①②③④⑤（3）①.无菌水②.①不能合成蛋白酶或合成的蛋白酶量不足：②合成的蛋白酶不分泌或分泌量不足；③分泌的蛋白酶活性低（4）①.a②.诱变（5）C（6）①④②【解析】【分析】原核细胞的主要特征是没有被核膜包被的成形的细胞核，没有核膜、核仁和染色体，原核细胞只有核糖体一种细胞器，但原核生物含有细胞膜、细胞质等结构，也含有核酸和蛋白质等物质。【小问1详解】原核生物细胞的主要特征是无成形细胞核。【小问2详解】在培养包括枯草芽孢杆菌在内的异养型微生物时，培养基营养成分应包括①葡萄糖（提供碳源）②蛋白质（提供氮源）③生长因子④无机盐⑤水。【小问3详解】实验的自变量是菌株的种类，为使实验数据更加可信，相关实验操作中还应增设浸过无菌水的圆纸片，作为对照。将分别浸过不同菌株（a~e）的分泌物提取液的无菌圆纸片置于含某种高浓度蛋白质的平板培养基表面，如果菌株周围出现清晰区，说明菌株产生的蛋白酶把培养基中的蛋白质分解了，而菌株b提取物周围没有形成明显清晰区，说明蛋白质分解能力弱，原因可能是不能合成蛋白酶或合成的蛋白酶量不足，或合成的蛋白酶不分泌或分泌量不足，或分泌的蛋白酶活性低。【小问4详解】蛋白酶的分解能力越强，菌株周围出现的清晰区越大，由图可知，a菌株周围出现的清晰区最大，因此大规模产业化首选的菌株是a。射线辐照可诱导菌株发生基因突变，属于诱变育种。【小问5详解】由图可知，枯草芽孢杆菌的蛋白酶在60~70°C活性较大，而其他酶的活性较小，两者的酶活性差值较大，有利于将蛋白酶与其他酶的活性相区分。【小问6详解】因为蛋白酶在分泌物中，无须破碎细胞，先过滤去除细菌等杂质，然后浓缩，最后干燥，即枯草芽孢杆菌蛋白酶制备的合理工艺步骤应为①④②。（三2022普陀二模）10.微生物横沙岛是上海的柑橘生产基地，柑橘果实采后贮藏期间极易受病原菌侵染而腐烂，造成重大经济损失，目前主要通过使用化学杀菌剂来控制采后病害。桔梅奇酵母是分离自柑橘果园叶片的新种酵母，可有效控制柑橘果实的腐烂，研究人员按照下图所示流程从柑橘叶片上分离得到一定浓度的桔梅奇酵母菌液，用于实验研究。（1）图1中乙培养基比甲培养基多一种成分是__________，④所使用的接种方法是__________。（2）实验过程中需要用高压灭菌法进行灭菌的是（）（多选）A.培养基 B.柑橘叶片 C.接种环 D.培养皿研究人员以桔梅奇酵母为研究对象，制备以桔梅奇酵母为主要活性成分的液体制剂即桔梅奇酵母菌悬液，并探究其对柑橘果实采后主要病害的控制效果。（3）从简单易操作的角度看，实验中所需病原菌如何获取？（4）与化学杀菌剂相比，将桔梅奇酵母菌悬液应用于柑橘防腐保鲜有哪些优缺点？________________________________________________________________________________。为了验证桔梅奇酵母菌悬液和活体桔梅奇酵母菌有一样的抑制柑橘果实腐烂的效果，科研人员在若干个柑橘果实中部等距离刺三个相同大小和深度的孔，并在孔内进行实验，实验过程如下表。不同处理或测定孔A孔B孔C活病原菌①②③桔梅奇酵母悬液+⑤活桔梅奇酵母菌+④一段时间后测定测定柑橘果实发病率⑥⑦⑧（5）表中①②③分别表示__________（用“+”或“”表示），④和⑤分别表示__________，（用“+”或“”表示）。（6）如果实验成功，则⑥⑦⑧大小比较关系是__________（用编号和“=”或“>”或“<”表示）。【答案】（1）①.琼脂②.稀释涂布法（2）AD（3）腐烂的柑橘（4）优点：桔梅奇酵母菌悬液不会使病原菌产生抗性，且易降解，同时对人体和环境不会造成危害缺点：成本高，生产工艺复杂，生物制剂保质期短，效果稳定性不高。（5）①.+++②.（6）⑥=⑦<⑧【解析】【小问1详解】乙培养基上形成了菌落，为固体培养基，甲培养基是用来扩大培养的，因此为液体培养基，固体培养基比液体培养基中多加了琼脂。乙培养基上形成的菌落分布均匀，因此④所使用的接种方法是稀释涂布平板法。【小问2详解】培养基和培养皿可采用高压灭菌法进行灭菌，而接种环采用灼烧灭菌，柑橘叶片采用消毒的方法，故AD正确。【小问3详解】柑橘果实采后贮藏期间极易受病原菌侵染而腐烂，因此可从腐烂的柑橘中获取病原体。【小问4详解】与化学杀菌剂相比，将桔梅奇酵母菌悬液应用于柑橘防腐保鲜的优点有：桔梅奇酵母菌悬液不会使病原菌产生抗性，且易降解，同时对人体和环境不会造成危害；缺点：成本高，生产工艺复杂，生物制剂保质期短，效果稳定性不高。【小问5详解】本实验是为了验证桔梅奇酵母菌悬液和活体桔梅奇酵母菌有一样的抑制柑橘果实腐烂的效果，因此自变量为酵母菌悬液的种类，因变量为柑橘果实发病率，其它无关变量各组应相同且适宜，且实验中应遵循单一变量原则，故各组都应该加入活病原菌，因此①②③分别表示+++，④和⑤分别表示。【小问6详解】若实验成功，即桔梅奇酵母菌悬液和活体桔梅奇酵母菌有一样的抑制柑橘果实腐烂的效果，则⑥⑦组的柑橘果实发病率相同，且发病率小于对照组，即小于⑧。（2022杨浦三模）11.石油污染是重大的全球环境问题。石油的主要成分为烃类和芳香族碳氢化合物，因而受其污染的环境中碳氢化合物浓度过高，导致氮源相对不足。生物治理是消除该类污染的可持续方案，其关键是石油降解菌的筛选及高性能培育。（1）无菌技术是所有微生物培养的关键技术。过滤除菌是一种无菌技术，其关键装置是孔径小于最小细胞直径的滤网（如图1）。下列生物可以通过滤网的是____________。A.大肠杆菌 B.新冠病毒 C.酵母菌 D.噬菌体（2）将来自石油污染环境的土壤样品接种到INF培养基中，能生存和繁殖的微生物应该具备的性能包括____________。INF培养基配方（单位g/L）：Na2HPO42.2；MgSO4·7H2O0.2；FeSO4·7H2O0.01；CaCl2·2H2O0.01；K2HPO40.98；KH2PO40.98；酵母提取物0.02；原油10.0A.固氮 B.降解烃类碳氢化合物C.耐高温 D.降解芳香族碳氢化合物（3）为了确保无菌操作，需对实验所涉及的物品选用合适的方法进行灭菌/除菌。试判断下表中的物品（或样品）所对应的灭菌/除菌方法______（选中请在表中打“√”）。待灭菌物品培养皿接种环培养基①②③注：表中①表示“高压灭菌”；②表示“灼烧灭菌”；③表示“过滤除菌”（4）研究人员采用图2所示的“板孔扩散法”快速测试微生物的石油降解能力（已知原油不溶于水，而其降解产物溶于水）。其中，待测的微生物应分布于___________。A.① B.② C.③ D.②③（5）经上述“板孔扩散法”筛选和分离出五种细菌，它们的主要性能列在表中。据此判断用于石油污染地区生物治理的最佳菌种名称应为___________，并说明理由___________。细菌名称BaBsPaPrSp烃类物质降解率（%）76.281.161.386.055.0芳香族降解率（%）49.955.539.458.639.0固氮酶相对活性（%）22.287.352.612.742.5注：降解率=已降解物质量/初始物质总量×100%【答案】（1）BD（2）ABD（3）待灭菌物品培养皿接种环培养基高压灭菌√√灼烧灭菌√过滤除菌√（4）A（5）①.Bs②.石油污染地区碳氢化合物浓度过高，氮源相对不足。Bs菌株降解烃类和芳香族碳氢化合物能力较强，且固氮酶活性最高，据表中数据综合分析可知，在石油污染地区能生存且能较好分解降解石油污染物。【解析】【分析】培养基对微生物具有选择作用。配置培养基时根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求，加入某些物质或出去某些营养物质，一直其他微生物的生长，也可以根据某些微生物对一些物理、化学因素的抗性，在培养基中加入某种化学物质，从而筛选出待定的微生物。这种培养基叫做选择培养基。【小问1详解】原核生物的直径或宽度在0.52.0um，真核细胞的直径或宽度达到2200um，病毒是无细胞结构的生物，体积更小，A大肠杆菌是原生生物，B新冠病毒和D噬菌体都是病毒，C酵母菌是真核生物，因此可以通过滤网的是体积最小的新冠病毒和噬菌体，即BD。【小问2详解】石油的主要成分为烃类和芳香族碳氢化合物，该培养基配方中含有原油成分，因此该培养基中能降解烃类碳氢化合物和降解芳香族碳氢化合物，该培养基中氮源相对不足，因此固氮类微生物可以在该培养基上生长和繁殖，因此能生存和繁殖的微生物应该具备的性能包括固氮、降解烃类碳氢化合物和降解芳香族碳氢化合物，ABD正确，C错误。故选ABD。【小问3详解】常用灭菌方法：灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌法。高压蒸汽灭菌适用于对一般培养基和玻璃器皿的灭菌，干热灭菌适用于空玻璃器皿的灭菌，微生物接种时的金属接种工具和试管口可以用灼烧灭菌。因此培养皿常用干热灭菌或者高压灭菌，接种环可以灼烧灭菌，培养基可以高压灭菌，培养基中可能有杂菌污染，也可以过滤除菌。【小问4详解】原油不溶于水，而其降解产物溶于水，培养基中含有大量的水分，因此石油降解菌如果能将降解原油，就会出现透明圈，且降解能力越强，透明圈越大，因此待测的微生物应分布于①，A正确，BCD错误。故选A。【小问5详解】石油污染地区碳氢化合物浓度过高，氮源相对不足。Bs菌株降解烃类和芳香族碳氢化合物能力较强，且固氮酶活性最高，据表中数据综合分析可知，Bs在石油污染地区能生存且能较好分解降解石油污染物。（一2022徐汇三模）12.花生贮藏不当易感染黄曲霉菌而发霉，黄曲霉菌分泌的黄曲霉素具有强毒性和强致癌性。科研人员利用黄曲霉素的结构类似物香豆素（C9H6O2）筛选出能高效降解黄曲霉素的细菌菌株，其分泌的解毒酶可降解黄曲霉素为低毒或无毒的物质，进而制成生物菌剂添加在动物饲料中。筛选过程示意图如图。（1）下列生物中，其结构与黄曲霉菌的细胞结构最相似的是______A.酵母菌 B.大肠杆菌 C.噬菌体 D.乳酸菌（2）过程③和④培养目的不同，因此两者培养基成分主要差异是______，但两者培养基中都会添加______作为唯一碳源来筛选目的菌。（3）过程④纯化培养时接种的方法一般可以是______，目的是得到______。A．单个黄曲霉菌菌落B．大量黄曲霉菌C．单个目的菌菌落D．大量目的菌（4）通过纯化培养，发现了样品中含有多种黄曲霉素降解菌，过程⑤是为了筛选出降解能力更强的菌株。现有等量的不同种类的目的菌株和含一定浓度的黄曲霉素的培养液（或者平板培养基），请写出筛选方案：________________________________________________。【答案】（1）A（2）①.是否添加琼脂（凝固剂）②.香豆素（3）①.平板涂布法（划线法）②.C（4）将不同菌落的菌株分别接种到含等量且浓度相同黄曲霉素（或香豆素）的培养液中，在相同且适宜的条件下培养一段时间后，分别测定各组培养液中黄曲霉素（或香豆素）的剩余量【解析】【分析】1、微生物培养基的基本成分包括水、无机盐、碳源、氮源及特殊生长因子。2、无菌操作包括灭菌和消毒两种方式，消毒的方法有巴氏消毒法、酒精消毒、煮沸消毒法；灭菌的方法有干热灭菌、灼烧灭菌和湿热灭菌。3、微生物的接种：微生物接种的方法很多，最常用的是平板涂布法和划线法。【小问1详解】黄曲霉菌是真菌，真核生物，酵母菌也是真菌，故两者结构最相似；大肠杆菌和乳酸菌是细菌为原核生物，噬菌体为病毒。【小问2详解】富集培养的培养基是液体培养基；而纯化培养的培养基是固体培养基，故两者的主要差异是有无琼脂。本实验是为了筛选出能高效降解黄曲霉素的细菌菌株，两者培养基中都会添加香豆素作为唯一碳源来筛选目的菌。【小问3详解】菌种可用平板涂布法或划线法接种，纯化的目的是获得单个菌落，即单个目的菌菌落，故选C。【小问4详解】为了筛选出降解能力更强的菌株，将不同菌落的菌株分别接种到含等量且浓度相同黄曲霉素（或香豆素）的培养液中，在相同且适宜的条件下培养一段时间后，分别测定各组培养液中黄曲霉素（或香豆素）的剩余量，也可比较分解圈与菌落直径的大小，比值越大，分解能力越强。（一2022崇明二模）13.尾孢菌分泌的尾孢菌素会引发叶片病斑。实验室欲改良发酵条件提高尾孢菌素产量，用于研发药物。（1）左图为温度对尾孢菌素产量的影响，为探究这一现象，请结合已有知识提出一条合理的假设：______________。（2）尾孢菌生长培养基（S7）中含葡萄糖1g/L+果糖3g/L+蔗糖6g/L。根据右图显示的不同碳源对尾孢菌素产量的影响推断，下列碳源优化万案最佳的是_______________。A.葡萄糖6g/L+果糖4g/L B.葡萄糖6g/L+果糖3g/L+蔗糖1g/LC.葡萄糖4g/L+蔗糖6g/L D.葡萄糖10g/L研究者希望构建“细菌尾孢菌”共培养发酵体系以提高尾孢菌素产量。共培养通常通过模拟自然环境来提高代谢物的产生，故研究者选取了带有病斑的叶片。（3）为筛选“共培养”的细菌，在下列操作中选取并排序_______________。（填写编号）①对病叶进行高温高压处理②用无菌水清洗病叶③切取病斑附近组织接种于固体培养基④将实验材料转移至超净工作台⑤挑取培养病斑附近组织的培养基中生长的菌落进行划线接种（4）图为细菌B04与尾孢菌共培养时培养基中部分物质的变化。下列分析合理的是______________。A.低浓度葡萄糖可促进尾孢菌素的生产 B.B04产尾孢菌素的能力比尾孢菌强C.尾孢菌素的生产需要消耗大量能量 D.B04促进了尾孢菌对糖的利用（5）结合已有知识，提出除上述两种途径以外的提高尾孢菌素产量的方法：______________。【答案】（1）温度影响了尾孢菌素相关酶的活性（2）D（3）④②③⑤（4）CD（5）通过人工诱变的方法获得突变菌株，从中筛选尾孢菌素高产菌株；通过转基因技术导入一种有利于尾孢菌素高产的基因【解析】【分析】培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。【小问1详解】图1为温度对尾孢菌素产量的影响，温度为自变量，可以影响酶的活性，进而影响细胞代谢活动，故提出假设：温度影响了尾孢菌素相关酶的活性。【小问2详解】ABCD、根据图2显示，以葡萄糖为碳源时，尾孢菌素产量最大，故推断碳源优化方案最佳的是葡萄糖10g/L，ABC错误，D正确。故选D。【小问3详解】为筛选“共培养”的细菌，应将实验材料转移至超净工作台，用无菌水清洗病叶，然后切取病斑附近组织接种于固体培养基，最后挑取培养病斑附近组织的培养基中生长的菌落进行划线接种，即④②③⑤。【小问4详解】ABCD、图3为细菌B04与尾孢菌共培养时培养基中部分物质的变化，根据曲线分析，随培养时间延长，尾孢菌素产量逐渐增大然后保持稳定，尾孢菌+B04产尾孢菌素的量比尾孢菌多；葡萄糖浓度逐渐减小，尾孢菌+B04消耗葡萄糖的量比尾孢菌多，AB错误，CD正确。故选CD。【小问5详解】提高尾孢菌素产量，还可以通过人工诱变的方法获得突变菌株，从中筛选尾孢菌素高产菌株；或通过转基因技术导入一种有利于尾孢菌素高产的基因。（2022虹口二模）14.人误食被金黄色葡萄球菌污染的食物后，可能出现腹泻、呕吐等症状。研究者尝试用蜻蜓肠道共生菌的代谢产物开发新型抑菌药物，部分实验步骤如图所示，图中数字编号代表实验步骤。（1）金黄色葡萄球菌可通过被污染的食物进入人体，这种传播方式属于___________。A.空气传播 B.媒介物传播 C.病媒传播 D.接触传播（2）培养蜻蜓肠道共生菌的培养基配方如表所示。据表中信息和所学知识判断，马铃薯为共生菌生长提供的营养成分包括___________。马铃薯葡萄糖琼脂水200.0g20.0g20.0g1000mLA.碳源 B.氮源 C.无机盐 D.生长因子（3）为避免杂菌污染，图中实验操作应采用的正确方法是___________。A.步骤①用自来水浸泡蜻蜓 B.步骤②在超净工作台上操作C.步骤③加入蒸馏水研磨蜻蜓肠道 D.实验器材需要高压灭菌（4）接种培养一段时间，培养基上共出现42种蜻蜓肠道共生菌。简述从个体水平和分子水平区分这些菌株的方法______________________________。研究者分离出蜻蜓肠道菌株A，提取其代谢产物并用丙酮定容制成“药液”。欲比较“药液”与庆大霉素（用无菌水配制的抗菌素溶液）对金黄色葡萄球菌的抑菌效果，请在下列横线处填写简要的实验步骤，完成实验方案（所有实验均在无菌环境操作）。（5）实验主要步骤如下：①将______________均匀涂布在图中所示的平板培养基上；②用无菌镊子将分别浸过A、B、C液和无菌水的圆纸片沥干后均匀置于上述培养基表面。A、B、C液分别为______________；③在恒温培养箱培养一段时间后，检测“因变量”的方法是______________；④为使实验结果更准确的做法是______________。【答案】（1）B（2）ABCD（3）BD（4）个体水平可用肉眼进行形态学鉴定，观察菌落的形状、大小、颜色、边缘、表面状况等（或制成临时装片，在显微镜下观察细菌的形态），以区分鉴定菌株；分子水平提取菌体的DNA进行测序，来鉴定菌株。（5）①.稀释的金黄色葡萄球菌“菌液”②.丙酮溶液、相同浓度的药液和庆大霉素③.用直尺测量每个圆纸片周围清晰区的宽度，并记录④.重复上述实验步骤多次，并对各组测量的数据求平均值【解析】【分析】1、接触传播是指病原体通过手、媒介物直接或间接接触导致的传播。2、空气传播指病原体从传染源排出后，通过空气侵入新的易感宿主所经历的全部过程。3、病媒传播一般专指通过生物如鼠、虫、鸟来传播的疾病，如禽流感。4、病原体通过无生命的媒介物传播属于媒介传播。【小问1详解】病原体通过无生命的媒介物传播属于媒介传播，因此金黄色葡萄球菌可通过被污染的食物进入人体，这种传播方式属于媒介物传播。故选B。【小问2详解】马铃薯中含有糖类、蛋白质、少量脂肪和矿物质等物质，如表所示的培养基中，马铃薯可为共生菌生长提供碳源、氮源、无机盐、生长因子。【小问3详解】A、自然水中有杂菌，步骤①应该用无菌水浸泡蜻蜓，A错误；B、超净工作台是一种提供局部无尘无菌工作环境的单向流型空气净化设备，为防止杂菌污染，步骤②在超净工作台上操作，B正确；C、步骤③加入无菌水研磨蜻蜓肠道，C错误；D、为防止杂菌污染，实验器材需要高压灭菌，D正确。故选BD。【小问4详解】在个体水平上，不同菌落的形状、大小、颜色、边缘、表面状况等不同，可用肉眼进行形态学鉴定，观察菌落的形状、大小、颜色、边缘、表面状况等（或制成临时装片，在显微镜下观察细菌的形态），以区分鉴定菌株；在分子水平上，不同菌株的遗传信息不同，可提取菌体的DNA进行测序，来鉴定菌株。【小问5详解】欲比较“药液”与庆大霉素（用无菌水配制的抗菌素溶液）对金黄色葡萄球菌的抑菌效果，则实验的自变量为抑菌液的种类，因变量为抑菌效果，具体的实验步骤为：将稀释的金黄色葡萄球菌“菌液”均匀涂布在图中所示的平板培养基上；用无菌镊子将分别浸过丙酮溶液、相同浓度的药液和庆大霉素和无菌水的圆纸片沥干后均匀置于上述培养基表面；因变量为抑菌效果，金黄色葡萄球菌若受到抑菌液的抑制，则圆纸片周围会出现清晰区，因此可用直尺测量每个圆纸片周围清晰区的宽度，并记录，从而检测因变量；为使实验结果更准确，应遵循实验的平行重复原则，重复上述实验步骤多次，并对各组测量的数据求平均值。（一2022青浦二模）15.微生物土壤中重金属Cr6+污染对植物的影响较大，并可通过食物链富集进入人和动物体内，危害人畜健康。科研人员期望通过实验筛选出对重金属铬具有耐受性和修复能力的细菌，实验流程如图。（1）优质的菜田土富含有机质、矿物质和水分，其中有机质为微生物的生长提供了_____和