实验四：液相色谱法用于不易挥发有机化合物混合物的定性分析

实验四：液相色谱法用于不易挥发有机化合物混合物的定性分析学生姓名：请叫我红领巾一、实验目的：学习利用高效液相色谱仪分离化合物和检测化合物的含量的方法通过对样品的定量测定，初步掌握获得高效液相色谱图和数据的一般操作程序与技术学习谱图和数据的处理方法二、实验原理：高效液相色谱分离是利用试样中各组分在色谱柱中的流动相和固定相间的分配系数不同，当试样随流动相进入色谱柱后，组分就在两相间进行反复多次（103~106）的分配，由于固定相对各种组分的吸附能力不同，各组分在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定柱长后彼此分离，依次从色谱柱流出，通过检测器时样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。三、实验仪器与试剂：仪器：岛津液相色谱仪，SPD-20A检测器，LC-20AT泵，微量进样器，C18色谱柱试剂：苯（水杨酸甲酯）浓度为1000ppm，甲苯（烟酸乙酯）浓度为1000ppm，3个不同比例的苯和甲苯（水杨酸甲酯-烟酸乙酯混合液），甲醇（AR），超纯水样品的配制：苯和甲苯浓度为1000ppm的配置：用移液管分别量取0.5mL的苯和甲苯用甲醇定容在5mL的容量瓶中（105ppm），然后用移液管量取1mL刚定容的溶液再用甲醇定容在10mL的容量瓶后（104ppm）并用移液管量取1mL刚定容的溶液再用甲醇稀定容在10mL的容量瓶中，这样就配制成浓度为1000ppm，用0.45µm滤膜过滤。苯-甲苯混合液：用苯和甲苯的浓度为1000ppm按体积不同体积比定容至10mL四、实验步骤：1、准备1.1准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。（这里用的是流动相是甲醇(B)和超纯水(A)，分别用有机相系和水相系的0.45µm滤膜过滤，超声脱气20min。）1.2根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。1.3配制样品浓度为1000ppm（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。（苯和甲苯浓度为1000ppm的配置：用移液管分别量取0.5mL的苯和甲苯用甲醇定容在5mL的容量瓶中（105ppm），然后用移液管量取1mL刚定容的溶液再用甲醇定容在10mL的容量瓶后（104ppm）并用移液管量取1mL刚定容的溶液再用甲醇稀定容在10mL的容量瓶中，这样就配制成浓度为1000ppm，用0.45µm滤膜过滤。苯-甲苯混合液：用苯和甲苯的浓度为1000ppm按体积不同体积比定容至10mL）

1.4检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。2、开机接通电源，依次开启不间断电源、B泵、A泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站（即电脑桌面上的CS-LightRealTimeAnalysis）。3、参数设定3.1波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按[func]键接着按[Enter]键，用数字键输入所需波长值254nm，按[Enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕。,w43.2流速设定：在A泵显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需的流速（柱在线时流速一般不超过1ml/min），按[Enter]键确认。按[CE]键退出。3.3流动相比例设定：在A泵显示初始屏幕时，按[conc]键，用数字键输入流动相B的浓度百分数(80%)，按[Enter]键确认。按[CE]键退出。4、更换流动相并排气泡4.1将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；图4，混合样2表3.混合样2峰号组分名保留时间面积面积%拖尾因子分离度1苯5.943299653.523.83511.222--2甲苯7.467957540.676.16491.1645.372图5.数据比较（红色是混合样2色谱图，黑色是甲苯色谱图）

数据分析:根据对图一甲苯色谱图的分析，我们可以得出，在流动相为80%甲苯、20%水的条件下，甲苯的保留时间约为6.890min.在图二混合样1的数据分析与图三的数据比较中，我们可以看出，2号峰的保留时间为6.857min，接近6.890min,所得色谱峰基本与图一的甲苯色谱峰重合.因此，可判断2号峰为甲苯峰。并根据实验二数据以及网上数据查询可知，1号峰应为苯峰。在图三混合样2的数据分析与图四的数据比较中，我们发现混合样2的色谱数据与前面的实验数据出现很大误差，色谱峰的保留时间延迟了许多。对此，我作出以下猜测：流动相的改变。由于我们发现图三的色谱图中，不仅是甲苯的出峰时间延迟，连苯的出峰时间也出现了延迟。两峰的保留时间同时变化，因此可猜测是流动相的极性出现了问题。因为实验中途第一瓶流动液用完用，换用了第二瓶，虽然比例也是80%乙醇、20%水，但不排除