高通量测序技术平台流程与应用

IlluminaGenomeAnalyzer系统应用方向DNAFragment文库测序DNAMate-pair文库测序SmallRNA测序数字化表达谱测序转录组测序DNA甲基化测序ChIP-seqMeta-GenomicsDNA测序血浆微量DNA测序12021/5/9基因组DNA的随机打断↓DNA片段的末端修复↓将‘A’碱基加入到DNA片段的3′末端↓在DNA片段的末端加上特定接头↓PCR扩增连上接头的DNA片段↓文库检测↓DNA在ClusterStation的成簇扩增↓Illumina

GenomeAnalyzer上的测序↓生物信息组装/分析IlluminaDNAFragment文库测序流程

22021/5/9IlluminaMate-pair文库测序流程

基因组DNA随机打断特定大小片段（2-10kb范围可选）↓末端修复↓生物素标记↓环化↓获得来自大片段两端共计400-600bp的DNA片段↓修饰、加接头↓PCR扩增连上接头的DNA片段↓文库检测↓DNA在ClusterStation上的成簇扩增↓IlluminaGenomeAnalyzer上的测序↓生物信息组装/分析32021/5/9IlluminaSmallRNA测序流程

从总RNA中分离smallRNA↓5′接头连接和纯化↓3′接头连接纯化↓RT-PCR扩增↓SmallRNA文库的纯化↓文库的检测↓DNA在ClusterStation成簇扩增↓IlluminaGenomeAnalyzer上的测序↓生物信息学分析42021/5/9Illumina数字化表达谱测序流程

mRNA的分离和cDNA第一链的合成↓cDNA第二链的合成↓限制性内切酶NlaIII的酶切↓连接GEXNlaIIIAdapter1↓限制性内切酶MmeI的酶切↓连接GEXAdapter2↓Adapter连接cDNA产物和PCR富集↓文库的检测↓DNA在ClusterStation上的成簇扩增↓Illumina

GenomeAnalyzer上的测序↓生物信息学分析52021/5/9TotalRNA的DNaseI酶消化↓mRNA分离和随机打断↓cDNA第一链和第二链的合成↓DNA片段的末端修复↓将“A”碱基加入到DNA片段的3′末端↓在DNA片段的末端加上特定接头↓PCR扩增连上接头的DNA片段↓文库的检测↓DNA在ClusterStation上的成簇扩增↓Illumina

GenomeAnalyzer上的测序↓生物信息学分析Illumina转录组测序流程

62021/5/9基因组DNA随机打断↓DNA片段的末端修复↓将‘A’碱基加入到DNA片段的3’末端↓DNA片段末端加上特别处理的甲基化接头↓重亚硫酸盐处理↓去盐处理↓PCR扩增连上接头的DNA片段↓文库检测↓DNA在ClusterStation上的成簇扩增↓IlluminaGenomeAnalyzer上的测序↓生物信息学分析IlluminaDNA甲基化测序流程

72021/5/9染色质免疫共沉淀↓目的DNA片段↓DNA片段的末端修复↓将‘A’碱基加入到DNA片段的3‘末端↓DNA片段末端加上接头↓PCR扩增加上接头的DNA片段↓文库检测↓DNA在ClusterStation成簇扩增↓IlluminaGenomeAnalyzer上的测序↓生物信息学分析IlluminaChIP-seq测序流程

82021/5/9Meta基因组的提取↓DNA随机打断↓DNA片段末端修复↓将‘A’碱基加入到DNA片段的3′末端↓在DNA片段的末端加上接头↓纯化连接产物↓PCR扩增连上接头的DNA片段↓文库的检测↓DNA在ClusterStation的成簇扩增↓IlluminaGenomeAnalyzer上的测序↓生物信息组装/分析IlluminaMeta-GenomicsDNA测序流程

92021/5/9收集10-15ml孕妇外周血↓提取血浆中游离DNA↓Q-PCR定量总DNA含量↓构建DNA文库↓Agilent和Q-PCR检测文库浓度↓Cluster制备和GenomeAnalyzer