-试验用试剂和培养基配方

第第页**试验用试剂和培育基配方**试验用试剂和培育基配方1.磷酸盐缓冲液（PBS，0.03mol/L，pH7.2）无水磷酸氢二钠2.83g磷酸二氢钾1.36g蒸馏水加至1000ml将各成分加入到1000ml蒸馏水中，待完全溶解后，调pH至7.2～7.4，于121℃压力蒸气**20min备用。2.革兰染色液第1液：结晶紫溶液结晶紫乙醇饱和溶液100ml结晶紫4g～8g95%乙醇100ml1%草酸胺溶液第2液：卢戈碘液碘化钾2g碘1g蒸馏水200ml第3液：脱色剂（1）95%乙醇（2）丙酮乙醇溶液100ml95%乙醇70ml丙酮30ml第4液：稀释石炭酸复红液碱性复红乙醇饱和溶液10ml碱性复红5g～10g5%石炭酸溶液90ml蒸馏水900ml3.孔雀绿与沙黄芽孢染色液第1液5.0%孔雀绿水溶液第2液0.5%沙黄水溶液4.无菌检验用洗脱液吐温—801g蛋白胨10g氯化钠8.5g蒸馏水1000ml将各成分加入到1000ml0.03mol/LPBS液中，加热溶解后调pH至7.2～7.4，于121℃压力蒸汽**20min备用。5.标准硬水（硬度342mg/L）氯化钙（CaCl2）0.034g氯化镁（MgCl2·6H2O）0.139g蒸馏水加至1000ml。6.有机干扰物牛血清白蛋白30g蒸馏水1000ml溶解后用微孔滤膜（孔径为0.45μm）滤过**，冰葙保存备用。7.营养琼脂培育基蛋白胨10g牛肉膏5g氯化钠5g琼脂15g蒸馏水1000ml除琼脂外其他成份溶解于蒸馏水中，调pH至7.2～7.4，加入琼脂，加热溶解，分装，于121℃压力蒸汽**20min备用。8.营养肉汤培育基蛋白胨10g牛肉膏5g氯化钠5g蒸馏水1000ml将各成分溶解于蒸馏水中，调pH至7.2～7.4，分装，于121℃压力蒸汽**20min备用。9.稀释液：胰蛋白胨生理盐水溶液（TPS）。胰蛋白胨1.0g氯化钠8.5g先用900ml以上蒸馏水溶解，并调整pH值在7.0±0.2，*终用蒸馏水加至1000ml，分装后，经121℃压力蒸汽**后使用。10.胰蛋白胨大豆肉汤培育基（TSB）胰蛋白胨1.5%大豆蛋白胨0.5%氯化钠0.5%用蒸馏水配制而成，调整pH为7.2±0.2，经121℃压力蒸汽**后使用。11.胰蛋白胨大豆琼脂培育基（TSA）胰蛋白胨1.5%大豆蛋白胨0.5%氯化钠0.5%琼脂1.6%用蒸馏水配制而成，调整pH为7.2±0.2，经121℃压力蒸汽**后使用。12.品红亚硫酸钠培育基蛋白胨10g酵母浸膏5g牛肉膏5g乳糖10g琼脂15g～20g磷酸氢二钾3.5g无水亚硫酸钠5g5%碱性品红乙醇溶液20ml蒸馏水1000mg以上各成分蒸馏水溶解，调pH至7.2～7.4，装瓶，经121℃压力蒸汽**后使用。13.溴甲酚紫蛋白胨培育液蛋白胨10g葡萄糖5g可溶性淀粉1g溴甲酚紫乙醇溶液10ml蒸馏水1000ml将蛋白胨、葡萄糖溶解于蒸馏水中，调pH至7.0～7.2，加入2%溴甲酚紫酒精溶液，摇匀后，分装（每管5ml），并放入一个小倒管，于115℃压力蒸汽**30min。置4℃冰箱备用。14.嗜热脂肪杆菌恢复琼脂培育基蛋白胨10g牛肉膏3g可溶性淀粉1g葡萄糖1g琼脂20g蒸馏水1000ml以上各成分蒸馏水溶解，调pH至7.0～7.2，装瓶，经115℃压力蒸汽**30min后使用。15.需氧—***琼脂培育基酪胨（胰酶水解）15g牛肉膏3g葡萄糖5g氯化钠2.5gL—胱氨酸0.5g硫乙醇酸钠0.5g酵母浸出粉5g新鲜配制的0.1%刃天青溶液1.0ml（或新配制的0.2%亚甲蓝溶液0.5ml琼脂0.5g～0.7g蒸馏水1000ml除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成份加入蒸馏水中，微温溶解后，调pH至弱碱性，煮沸、滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调pH至6.9～7.3，分装于115℃压力蒸汽**30min。16.沙堡琼脂培育基葡萄糖40g蛋白胨10g琼脂20g蒸馏水1000ml将上述成分混合后，加热至完全溶解，调pH至5.6±0.2，于115℃压力蒸汽**30min备用。17.沙堡液体培育基葡萄糖40g蛋白胨10g蒸馏水1000ml将上述成分混合后，加热至完全溶解，调pH至5.6±0.2，于115℃压力蒸汽**30min备用。18.无菌试验用**培育基磷酸二氢钾（KH2PO4）1g硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.5g蛋白胨5g葡萄糖10g蒸馏水1000ml除葡萄糖外，上述各成分加入蒸馏水内，微温溶解后，调整pH约6.8，煮沸，加葡萄糖溶解后，摇匀滤清，调pH使**后为6.4±0.2，分装，115℃压力蒸汽**20min备用。19.人**细胞维持培育基1640干粉培育基10×10.4gL谷氨酰胺2.93g丙酮酸钠1.004g盘尼西林80万单位链霉素100万单位碳酸氢钠20.0gHepes23.9g去离子水加至10000ml除盘尼西林、链霉素外，其余各成分溶于蒸馏水中，调pH至7.0～7.2，115℃压力蒸汽**20min备用。临用前加入无菌盘尼西林、链霉素溶液。20.人**细胞完全培育基在人**细胞维持培育基中加入10%无菌小牛血清。21.血琼脂培育基营养琼脂100ml脱纤维羊血（或兔血）10ml将营养琼脂加热熔化待冷至50℃左右，以无菌操作将10ml脱纤维血加入后摇匀，倒平皿置冰箱备用。22.霉菌培育基胨5g葡萄糖10g磷酸二氢钾1g氯化钠5.0g硫酸镁0.5g蒸馏水1000ml除葡萄糖外，取上述成份加入蒸馏水中，微温溶解后，调pH至6.0，煮沸，加入葡萄糖溶液后，摇匀，滤清，调pH至5.6～6.0，分装于115℃压力蒸汽**30min。23.SCDLP液体培育基酪蛋白胨17g大豆蛋白胨3g葡萄糖2.5g氯化钠5g磷酸氢二钾2.5g卵磷脂1g吐温807g蒸馏水1000ml将各种成份混合（如无酪蛋白胨和大豆蛋白胨可用日本多胨代替），加热溶解后，调pH至7.2～7.3，分装于121℃压力蒸汽**20min，摇匀，冷至25℃使用。24.伊红亚甲蓝培育基蛋白胨10g乳糖10g磷酸二氢钾2g2%伊红溶液2ml0.65%亚甲蓝溶液1ml琼脂17g蒸馏水1000ml将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，调pH至7.1，分装于121℃压力蒸汽**20min。临用时，以无菌操作加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至50℃时，加入伊红和亚甲蓝溶液摇匀，倒平皿置４℃冰箱备用。25.0.5%葡萄糖肉汤培育基胨10g氯化钠5g葡萄糖5g肉浸液1000ml取胨与氯化钠加入肉浸液内，微温溶解后，调pH至弱碱性，煮沸、加入葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调pH至7.0～7.4，分装，于115℃压力蒸汽**30min。26.甘露醇培育基蛋白胨10g牛肉膏5g氯化钠5g甘露醇10g0.2%溴麝香草酚蓝溶液12ml蒸馏水1000ml将蛋白胨、氯化钠、牛肉膏加入蒸馏水中，加热溶解，调pH至7.4，加入甘露醇和溴麝香草酚蓝混匀后，分装，于115℃压力蒸汽**20min。27.乳糖胆盐发酵管蛋白胨20g猪胆盐（或牛，羊胆盐）5g乳糖10g0.04%溴甲酚紫水溶液25ml蒸馏水1000ml将蛋白胨、胆盐及乳糖溶解于蒸馏水中，调pH至7.4，加入0.04%溴甲酚紫水溶液，分装（每管10ml），并放入一个小倒管，于115℃压力蒸汽**15min。28.乳糖发酵管蛋白胨20g乳糖10g0.04%溴甲酚紫水溶液25ml蒸馏水1000ml将蛋白胨及乳糖溶解于蒸馏水中，调pH至7.4，加入0.04%溴甲酚紫水溶液，分装（每管10ml），并放入一个小倒管，于115℃压力蒸汽**15min。29．1%苋菜红苋菜红1%西曲溴胺0.05%30．MEA培育基麦芽浸膏30g大豆蛋白胨3g琼脂15g双蒸水加至1000ml将上述成份制成溶液于121℃下**15mln，**后无菌调pH至5.6±0.2备用。31．MEB肉汤麦芽浸膏20g双蒸水加至1000ml将上述成份制成溶液于121℃下**15mln，**后无菌调pH至6.9