GB/T 43286-2023 一次性采样管（灭活型）（正式版）

国家标准化管理委员会国家市场监督管理总局发布国家标准化管理委员会IGB/T43286—2023 Ⅲ 12规范性引用文件 1 1 2 25.1组成 2 2 35.4技术要求及参数 3 46.1外观 46.2材质 46.3采样管密封性 46.4采样液装量 56.5灭活性能 66.6核酸稳定性 6 67.1出厂检验 67.2型式检验 6 78.1标签 78.2说明书 78.3包装 8 8 8附录A(资料性)采样管示意图 9附录B(资料性)采样拭子示意图 附录C(规范性)采样液灭活性能试验方法 C.2试验条件 C.3材料与试剂 ⅡGB/T43286—2023C.4仪器与耗材 C.6试验步骤 附录D(规范性)核酸稳定性试验方法 D.2试剂与仪器 D.3样本 D.5结果计算 ⅢGB/T43286—2023本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由全国生物样本标准化技术委员会(SAC/TC559)提出并归口。本文件起草单位：中国计量科学研究院、中国科学院微生物研究所、江苏康为世纪生物科技股份有限公司、友康生物科技(北京)股份有限公司、北京元码医学检验实验室有限公司、中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心、中国食品药品检定研究院。对含病原微生物特别是病毒等的生物样本的有效采集，对于后期的核酸检测非常重要。一次性采样管(灭活型)是一种重要的采集生物样本的产品，对生物样本中病毒的有效灭活能够降低样本处理和检测过程中的生物安全风险；同时，采样管中生物样本所含核酸在一定时间内保持足够的稳定性和完整性能够提供满足核酸检测要求的生物样本。因此，为规范采样管产品，本文件对一次性采样管(灭活型)进行了标准化规范要求，目的是为生产企业和质量监管部门提供标准参考。GB/T43286—2023一次性采样管(灭活型)2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文本文件。GB/T191包装储运图示标志GB/T2828.1—2012计数抽样检验程序第1部分：按接收质量限(AQL)检索的逐批检验抽样计划GB/T9969工业产品使用说明书总则GB/T37875核酸提取纯化试剂盒质量评价技术规范GB41918—2022生物安全柜3.1用于保存所采集生物样本的管具。3.2采用一定的方法使生物样本中的微生物失去感染能力和复制能力。3.3采样管(3.1)内用于保存生物样本的溶液。3.43.5由核苷酸或脱氧核苷酸通过3',5'-磷酸二酯键连接而成的一12GB/T43286—20233.6由四种主要的脱氧核苷酸(脱氧单磷酸腺嘌呤、脱氧单磷酸鸟嘌呤、脱氧单磷酸胞嘧啶和脱氧单磷酸胸腺嘧啶)通过3',5'-磷酸二酯键连接而成的带有遗传信息的生物大分子。3.7由核苷酸通过3',5′-磷酸二酯键连接而成的多聚体。NAs);与生物调控有关的RNA有微RNA(microRNA,miRNA)、干扰小RNA(smallinterferingRNA,3.84缩略语下列缩略语适用于本文件。Ct:循环阈值(cyclethreshold)DMEM:达尔伯克(氏)必需基本培养基(dulbecco'smodifiedeaglemedium)NP-40:乙基苯基聚乙二醇(NonidetP40)PBS:磷酸缓冲盐溶液(phosphatebufferedsaline)PCR:聚合酶链反应(polymerasechainreaction)SDS:十二烷基硫酸钠(sodiumdodecylsulfate)TCID₅o:半数细胞感染量(50%tissuecultureinfectiousdose)5要求3GB/T43286—2023采样管的管盖和管体应满足一定厚度，防止静态挤压与动态撞击时，管体变形或破碎。管体宜透明，便于观察采样液及采集的生物样本。采样管材质应耐腐蚀、耐伽马射线辐照，在-80℃~-20℃的低温环境或121℃的高温环境下不发生破损、变形等损坏；宜选用符合YY/T0242要求的医疗级聚丙烯(PP)等树脂材料。5.2.3.1采样管的管盖应具有与管体相匹配的内旋或外旋螺口，并应配有密封圈，以保证管盖和管体严5.2.3.2采样管密封性应满足以下两种方法的试验要求：——重量分析法：采样管在模拟12h运输状态前后的两次质量差值不大于5mg;——真空负压法：在密封测试仪内，压力达到-90kPa后的3min内，采样管管帽周围无连续气泡5.3.2.1采样液对所保存的生物样本应具有病毒灭活特性和保持核酸稳定的特性，其中应至少含有蛋剂等能使病毒失去感染能力和复制能力的成分；还可配有缓冲剂、平衡盐、蛋白酶K、聚乙二醇、金属离子螯合剂等其他成分；采样液中不宜使用肝素类等影响PCR检测的成分。5.3.2.2采样液的溶剂应使用电阻率不小于18MΩ的超纯水；不宜使用普通纯化水或蒸馏水。5.4技术要求及参数5.4.1.1应根据采样管尺寸、采样拭子的拭子头长度和数量对应不同的采样液充装体积，即标示装量。5.4.1.2采样管内采样液的标示装量应与采样管尺寸、拭子头长度和数量相匹配。拭子头应全部浸没在采样液中，确定采样液的标示装量。不同尺寸采样管的标示装量与采样管尺寸、采样液液面高度和拭子头数量之间关系的基本要求应符合表1的规定；不同尺寸采样管示意图见图A.2。5.4.1.3采样管配套使用的采样拭子的拭子头长度应在20mm～28mm之间，拭子头部最大直径不大于5.5mm。采样时放入采样管中的拭子头数量超过5支时，应采用3cm断点的拭子；附录B给出了采样拭子的示意图。5.4.1.4采样管中采样液的实际充装量不应低于表1中规定的标示装量最低值。表1之外尺寸采样管中采样液的实际充装量应不低于产品声称的标示装量。4GB/T43286—2023采样管尺寸(长度a×外径)mm×mm标示装量采样液液面高度mm全部浸没采样液中的拭子头数量支20.5±4.512.2±0.214.0±1.025.0±5.056.0±0.544.0±8.033.0±2.040.5±3.523.5±2.5“长度为包括管盖在内的采样管的整体高度。采样液液面高度的测量方法是从采样管底部锥形的上水平面到采样液液面的垂直高度，示意图见图A.3。拭子头部最大直径应小于4.0mm。采样管中的采样液应具备灭活性能，能彻底灭活样本中的病毒，使病毒丧失感染活性和复制能力。5.4.3.1采样管所采集的生物样本，其中的核酸物质应在采样液中于4℃的条件下保持稳定48h。5.4.3.2对于采用荧光定量PCR方法进行的核酸稳定性试验，Ct值变化率应不高于5%。6试验方法在自然光下肉眼目测。按照YY/T0242的方法对采样管材质的物理机械性能、化学性能及耐辐射性能进行试验。按照以下步骤进行试验：5GB/T43286—2023a)用天平称量采样管的质量，记为质量M₁。c)根据式(1)计算两次质量之差△M。△M=M₁M₂……(1)通过对真空室抽真空，使用检验合格的密封测试仪对采样管的密封性进行试验。使浸在蒸馏水或能。步骤如下：与水面距离不应低于25mm;b)盖上真空室的密封盖，将压力调节至-90kPa,待仪器内压力达到-90kPa后，打开密封测试c)观察抽真空过程中和真空保持期间采样管的泄露情况。烘箱：温度变化范围为25℃~100℃。a)使用密度测试仪测量采样液的密度，记为p;b)用天平称量装有采样液的采样管的质量，记为m₁;d)根据式(2)和式(3)计算体积误差△V;6GB/T43286—2023式中：V₁——采样液的实际体积，单位为毫升(mL);m₁——装有采样液的采样管的质量，单位为克(g);m₂——去除采样液烘干后恒重的采样管的质量，单位为克(g);p——采样液的密度，单位为克每立方厘米(g/cm³);式中：△V——采样液标示装量的误差；V₂——采样液标注的体积，单位为毫升(mL);V₁——采样液实际的体积，单位为毫升(mL)。6.5灭活性能按照附录C对采样管内的采样液进行病毒灭活性能试验。6.6核酸稳定性按照附录D规定的方法进行核酸稳定性试验。7检验规则7.1出厂检验7.1.1出厂的每一件产品均应检验采样管外观。7.1.2出厂前应对采样管产品的密封性、标示装量和生物样本核酸稳定性项目进行抽样检验。抽取样本量按照GB/T2828.1—2012的规定执行，留存样本量与抽取样本量一致。7.1.3判定规则：出厂检验采样管产品的外观结果不合格，判定该件产品不合格；出厂检验采样管产品的密封性、标示装量和核酸稳定性项目结果中有一个项目不合格，则判定该批次产品不合格；不合格产品均不应出厂。7.2型式检验7.2.1型式检验项目为第5章要求中规定的所有项目。采样管材质和采样液成分的来源应提供有效证明材料。7.2.2型式检验每半年或每年应进行一次。当出现但不限于下列情况之一时应当进行型式检验：a)新产品或者产品转厂生产的试制鉴定时；b)产品原料来源或生产工艺有较大变化，使产品质量和性能可能受到影响时；c)停产后恢复生产时；d)出厂检验结果与上次型式检验结果有较大差异时；e)国家有关质量监督部门提出型式检验要求的情况时；f)用户提出进行型式检验的要求时。7.2.3抽取样本量按照GB/T2828.1—2012的规定执行，留存样本量与抽取样本量一致。7.2.4判定规则：有任何一个项目不符合第5章的要求，则判断该件产品不合格。型式检验结果按照GB/T2828.1—2012接收质量限(AQL)0.01进行判定。7GB/T43286—20238.1.1.2采样管所用标签标注的信息应包括但不限于以下内容：b)生产企业名称；e)有效期限；f)贮存条件；g)警示标识。8.2.2说明书的编制应符合GB/T9969的规定。8.2.4说明书宜包含以下内容：b)采样液的成分组成；c)采样液的标示装量；h)使用注意事项；i)相关标识符号和图形的说明；j)采样管使用后的安全处置；l)售后服务的联系方式；n)说明书的编制日期和修订日期。8GB/T43286—20238.3.1单支采样管的包装是提供使用的最小包装。8.3.2最小销售单元包装内应附有说明书、质量合格标识或产品合格证。8.3.3包装及封口标签无破损，包装标签的字迹在有效期内应清晰。8.3.4最小销售单元包装内可选择配置具有生物安全标识的自封袋。8.4.1在运输过程中避免阳光暴晒、重压、抛掷、雨淋、剧烈震动与撞击。运输包装件基本试验见GB/T4857(所有部分)。8.4.2应保持包装完好无损，包装箱应按照箭头标志堆放，不倒置。8.4.3产品包装储运图示标志应符合GB/T191的规定。8.5贮存明书的要求。9GB/T43286—2023(资料性)采样管示意图采样管示意图见图A.1,不同尺寸的采样管示意图见图A.2,采样管内采样液液面高度示意图见图A.3。a)带裙边采样管b)底部锥形采样管c)底部圆锥形采样管标引序号说明：4——采样液；“锥体上水平面高于裙边。b锥体上水平面与裙边齐平。图A.1采样管示意图GB/T43286—2023a)(50±5)mm×(10±1)mm尺寸采样管示意图b)(100±5)mm×(16±1)mm尺寸采样管示意图c)(100±5)mm×(25±1)mm尺寸采样管示意图d)(120±1)mm×(30±1)mm尺寸采样管示意图图A.2不同尺寸的采样管示意图a)锥底高于裙边类采样管液面高度示意图b)锥底与裙边齐平类采样管液面高度示意图GB/T43286—2023(资料性)采样拭子示意图为便于理解表1中涉及的采样试子的断点，采样拭子的组成示意图见图B.1,采样拭子由拭子杆和拭子头组成，含断点。3cm断点是本文件中所提到的采样过程中放入采样管中的采样拭子数量大于5图B.1采样拭子的组成示意图GB/T43286—2023(规范性)采样液灭活性能试验方法C.1方法原理本方法将病毒样本加入采样管，通过采样液中的灭活剂成分灭活样本中的病毒，然后用超滤法去除对细胞有毒性的灭活剂成分，再用经灭活处理的病毒样本接种细胞盲传三代，每代细胞连续3d观察细胞病变，并取样进行TCID₅o测定、噬斑试验或HIV-1病毒抗原p24试验，依据结果判定病毒是否被彻底灭活。对于囊膜病毒样本的灭活性能测定，采用甲型流感病毒标准毒株(WSN)或者人免疫缺陷病毒(HIV)作为试验样本；对于非囊膜病毒的灭活性能测定，采用肠道病毒71型或脊髓灰质炎病毒作为试验样本。C.2试验条件警示——使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验。本文件并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。流行性感冒病毒A/WS/33灭活性能检测的试验操作应在生物安全一级实验室(分子生物学实验室)中进行；肠道病毒71型和脊髓灰质炎病毒I型疫苗株病毒灭活性能检测的试验操作应在生物安全二级实验室的生物安全柜中进行；人免疫缺陷病毒灭活性能检测的试验操作应在生物安全三级实验室的生物安全柜中进行。实验室环境温度宜在15℃~30℃,相对湿度≤85%。警示——本文件使用的试验材料采取适当的贮存方式，并保证符合国家有关法规规定的条件。可选择使用以下试验材料：a)流行性感冒病毒A/WS/33(ATCCVR-825);b)肠道病毒71型(ATCCVR-1432);c)脊髓灰质炎病毒I型，疫苗株(ATCCVR-1562);d)人免疫缺陷病毒I型(HIV-1)感染性克隆(pNL4-3,NIH编号AF324493);e)非洲绿猴肾传代细胞(VERO,ATCCCCL-81);f)犬肾细胞(MDCK,ATCCCCL-34);应使用以下试验试剂：a)采样液；b)生理盐水；c)消化液：含0.03%乙二胺四乙酸及0.25%胰蛋白酶的PBS溶液或类似消化液；d)DMEM细胞培养基(高糖):含L-谷氨酸和丙酮酸钠；e)无血清DMEM培养液：含100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素；GB/T43286—2023h)2×无酚红DMEM细胞维持液：含4%胎牛血i)无酚红DMEM细胞培养基；j)PBS配制的2%低熔点琼脂；1)结晶紫：以20%乙醇(体积比)配制成1%的溶液，4℃避光保存，临用前与双蒸水(ddH₂O)按照1:1稀释使用；m)配制1mg/mL甲苯磺酰-苯丙氨酸氯甲基酮处理的胰酶(TPCK-Trypsin)储存液；n)1×PBS缓冲液(不含钙镁离子):pH7.4;o)人类免疫缺陷病毒抗原抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)(应具有国药批准号)。C.4仪器与耗材应准备以下仪器：f)水浴锅；应准备以下耗材：b)超滤管(截留分子量为100kDa);c)12孔平底细胞培养板；f)移液器吸头；h)0.22μm滤器；i)T75培养瓶。C.5样本过一年一度的常规检测(按照GB41918—2022的要求);每次试验前后应对实验室及生物安全柜内各进行1h紫外灯照射处理，物体表面需使用1000mg/L含氯消毒液进行消杀，试验产生的废弃物应经过高温高压灭菌后按照医疗废弃物进行处理。试验开始前应清除试验区域内无关物品，防止对试验或生物安全柜的气流造成干扰。手套、面屏等。个人防护用品应符合国家规定的有关技术标准。按照相应的防护级别，使用适当的个人防护装备。C.5.1灭活病毒样本制备表C.1灭活病毒样本制备方法组别操作方法试验组1mL病毒(10⁶TCIDs₀/mL～10⁷TCID₅₀/mL)加入到含3mL采样液的灭活采样管中阳性对照组1mL病毒(10⁵TCID₃/mL～10⁷TCID₅₀/mL)加入到3mL生理盐水中(体积与采样液一致)阴性对照组1mL生理盐水加入到灭活采样管中C.5.2去除灭活成分(超滤法)按照以下步骤进行：b)将按照C.5.1要求制备的0.5mL含病毒采样液加入到截留分子量为100kDa的超滤管中；d)再次加入4.5mL的生理盐水，4℃,3000g离心超滤，重复5次；f)阳性对照组和阴性对照组按照a)～e)的方法进行操作。染毒前一天T75培养瓶中的MDCK、Vero细胞或TZM-bl细胞进行1:4传代，调整细胞浓度，在12孔板每孔加入1×10⁵细胞铺板，置CO₂孵箱培养至单层细胞。C.5.3.2样本接种细胞按照以下步骤进行：a)弃去细胞培养液，用PBS缓冲液清洗细胞1次；b)取100μL已去除灭活成分的灭活病毒液，与无血清DMEM培养液按照1:2的比例稀释，将300μL病毒稀释液感染12孔板的1个细胞孔，补加无血清DMEM培养液至1mL(感染流感病毒时感染液中TPCK-Trypsin终浓度为1μg/mL);GB/T43286—2023含2%血清的DMEM维持液，继续培养72h;d)取培养基上清，4℃、3000r/min离心5min,收集上清，标记为第一代。按照以下步骤进行：a)分别从3个一代病毒液中取300μL感染12孔板的1个细胞孔，补加无血清DMEM培养液至1mL(感染流感病毒时感染液中TPCK-Trypsin终浓度为1μg/mL);b)置于37℃、5%CO₂条件下孵育1h,弃去孔中液体，补加1mL含2%血清的DMEM维持含10%血清的DMEM维持液，继续培养72h;d)重复二代操作，收获第三代病毒液。C.6试验步骤C.6.1细胞病变观察每代病毒培养时，在倒置显微镜下观察Vero细胞或MDCK细胞的病变情况。观察细胞圆缩、脱C.6.2TCID₅o测定a)用无血清DMEM培养基(感染流感病毒时稀释液中TPCK-Trypsin终浓度为1μg/mL)对待滴定病毒样本做10倍梯度稀释；b)将稀释后的病毒液加入已铺有细胞的96孔培养板中，每孔加100μL,每个稀释度8个重复，在37℃条件下，放置1h～2h,以确保病毒吸附在细胞上，同时设立阴性对照(NC);c)取出培养板，用无血清DMEM培养液清洗细胞2次～3次，更换为DMEM维持液；d)放入CO₂培养箱中(37℃,5%CO₂)培养，每隔12h在显微镜下观察细胞病变，连续观察3d,逐孔观察并记录细胞病变情况。C.6.2.2终点稀释法病毒感染滴度计算用TCID₅o表示，根据Reed-Muench氏法计算。例如，当统计细所示。相应距离比=(高于50%的病变百分数-50)/(高于50%的病变百分数一低于50%的病变百分数)=0.5;1gTCID₅₀=高于50%感染率的病毒稀释度对数+相应距离比×稀释系数的对数=6.5;TCID₅₀=10⁶-5/100μL。表C.2细胞病变统计情况示意图表编号NCA十十十十十十—B十十十十十十C十十十十十十D十十十十十十E十十十十十十——GB/T43286—2023表C.2细胞病变统计情况示意图表(续)重复试验编号NCF十十十十十十一 —一G十十十十十十—————H十十十十十十 表C.3各病毒浓度下的细胞感染比例情况列表稀释倍数病变数未病变数累计比率病变良好合计80080080080080080808080880080008000800C.6.3噬斑试验a)用无血清DMEM培养液(感染流感病毒时稀释液中TPCK-Trypsin终浓度为1μg/mL)对待滴定病毒做10倍梯度稀释；b)以1×10⁵细胞接种12孔板，置于CO₂培养箱过夜，使细胞长成单层，待单层细胞汇合度达到d)吸弃病毒液，用无血清DMEM培养液清洗细胞3次，去除残余液体；e)将加热融化的2%低熔点琼脂冷却至50℃时，与37℃预热的2×无酚红DMEM细胞维持液f)将培养板4℃冷却10min,待琼脂凝固后置于37℃细胞培养箱中倒置培养48h～72h;g)试验终点后，向每个孔中加入1mL4%多聚甲醛溶液固定30min,用自来水冲洗后加结晶紫C.6.4HIV-1病毒抗原p24试验采用人类免疫缺陷病毒抗原抗体诊断试剂盒进行HIV-1病毒抗原p24的试验，具体操作按照所选GB/T43286—2023C.7.2当试验结果同时满足以下a)和b),或者a)和c),或者a)和d)时，可判定病毒被彻底灭活。a)阳性对照组的每代病毒培养物在显微镜下观察到细胞病变；阴性对照组的每代病毒培养物在显微镜下未观察到细胞病变；试验组与阴性对照组一致。针对HIV-1病毒，阳性对照组的每验组与阴性对照组一致。b)阳性对照组的每代病毒液TCIDs。测定值大于10.67TCID₃₀/mL;阴性对照组的每代病毒液c)阳性对照组的每代病毒液空斑滴定在10-¹滴度时有明确空斑形成；阴性对照组的每代病毒液空斑滴定在10-¹滴度时未见明确空斑形成；试验组与阴性对照组一致。d)针对HIV-1病毒，阳性对照组的每代病毒液HIV病毒抗原p24的试验结果为阳性；阴性对照组的每代病毒液HIV病毒抗原p24的试验结果为阴性；试验组与阴性对照组一致。GB/T43286—2023(规范性)核酸稳定性试验方法D.1试验条件警示——使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验。本文件并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。采用DNA、RNA病毒核酸标准物质或质控品进行核酸稳定性检测的试验操作时，应在不低于生物安全一级实验室(分子生物学实验室)中进行；在进行流行性感冒病毒A/WS/33的灭活、核酸提取和稳定性检测的试验操作时，应在不低于生物安全一级实验室中进行。实验室环境温度宜在15℃~30℃,相对湿度≤85%。D.2试剂与仪器D.2.1材料应准备以下材料：a)RNA核酸标准物质，如新型冠状病毒核酸标准物质、新型冠状病毒核酸基体标准物质；b)DNA核酸标准物质，如乙肝病毒核酸标准物质、非洲猪瘟病毒核酸标准物质或核酸质控品；c)病毒，如流行性感冒病毒A/WS/33(ATCCVR-825)。应准备以下试剂：a)符合GB/T37875要求的核酸提取试剂盒；b)荧光定量PCR试剂盒，检出限不高于500copies/mL。荧光定量PCR仪。D.3样本警示——当处理病毒材料时，应使用部分或全部排风的Ⅱ级生物安全柜，所使用的生物安全柜需经过一年一度的常规检测(按照GB41918—2022的要求);每次试验前后需对实验室及生物安全柜内各进行1h紫外灯照射处理，物体表面需使用1000mg/L含氯消毒液进行消杀，试验产生的废弃物应经过高温高压灭菌后按照医疗废弃物进行处理。试验开始前清除试验区域内无关物品，防止对试验或生物安全柜的气流造成干扰。人防护用品应符合国家规定的有关技术标准。按照相应的防护级别，使用适当的个人防护装备。D.3.1样本处理应按照以下步骤处理病毒材料：a)将标定浓度≥10⁷copies/mL的已热灭活的病毒(如流感病毒)用无菌磷酸盐缓冲液(pH7.4)进行梯度稀释，制备成不同浓度梯度的病毒样本；b)分别取100μL样本溶液，添加至采样管中(1:3稀释);GB/T43286—2023c)混合均匀，制备成终浓度分别为(1×10⁴~1×10⁵)copies/mL和(5×10²~1×10³)copies/mL的两种样本。D.3.2.1RNA核酸标准物质处理酸样本，分别取100μL样本溶液，添加至采样管中(1:3稀释),混合均匀，制备成终浓度分别为1×10⁴copies/mL～1×10⁵copies/mL和5×10²copies/mL～1×10³copies/mL的两种样本。D.3.2.2DNA核酸标准物质处理样本溶液，添加至采样管中(1:3稀释),混合均匀，制备成终浓度分别为1×10⁴copies/mL～1×10⁵copies/mL和5×10²copies/mL～1×10³copies/mL的两种样本。D.3.3样本保存处理将样本分成两组，一组立即进行病毒核酸的提取，另一组在4℃放置48h后进行病毒核酸的提取。每种浓度下每组设置3个复管。D.4试验步骤D.4.1核酸提取使用核酸提取试剂盒进行核酸提取，提取步骤参照核酸提取试剂盒说明书的要求。D.4.2荧光定量检测D.4.2.2也可采用以下引物探针自行配制体系进行荧光定量PCR的检测，引物设计按照表D.1的D.4.2.3建立荧光定量PCR反应体系。RNA病毒(如新型冠状病毒、流行性感冒病毒)的荧光定量PCR反应体系应按照表D.2进行；DNA病毒(如非洲猪瘟病毒)的荧光定量PCR反应体系应按照表D.4.2.4荧光定量PCR条件按照表D.4(适用于RNA病毒)或表D.5(适用于DNA病毒)的反应条件进行设置。引物和探针序列(5'→3')工作浓度新型冠状病毒N-FN-RN-PROX-TTGCTGCTGCTTGACAGATT-TAMRAFAM-CCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATGG-BHQ1GB/T43286—2023引物和探针序列(5'→3′)工作浓度流行性感冒病毒Flu-FGACCRATCCTGTCAC