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PCR技术简介

分子生物学技术的迅速发展，为PCR技术的发现提供了坚实的基础，同时也为这一技术的发展和应用提供了宽广的舞台。PCR技术的发明1985年Mullis青年遗传学领域1995年诺贝尔化学奖灵感PCR技术的发明1971年Korana最早提出核酸体外扩增的设想：“经过DNA变性、与合适的引物杂交、用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可克隆tRNA基因”。PCR原理示意图PCR的扩增效率：循环数. 扩增子数(靶序列拷贝数)1 22 43 84 165 326 6420 1,048,576301,073,741,824(10亿)3、PCR条件的优化

模板引物(0.2-1umol/L)

缓冲液(Tris-HCl10mmol/LKCl50mmol/LpH8.3-9.3)

镁离子(0.5-5.0mmol/L)dNTP

耐热DNA聚合酶温度循环参数

PCR的改进与完善Mullis最初使用DNA聚合酶I的Klenow片段不耐高温37°C下反应PCR技术的改进与完善1984年Keohanog改用T4DNA聚合酶1988年Saiki等从温泉中分离的一株嗜热杆菌（thermusaquaticus)中提取到一种耐热DNA聚合酶TaqDNA聚合酶耐热性忠实性扩增长度平台期PCR技术的发展高保真PCR长片段PCRRT－PCR定量PCR原位PCRssPCR反向PCRPCR技术的发展武断引物PCR多重PCR标记PCR重组PCR免疫PCRPCR－ELISAddPCRPCR技术的应用•分子生物学克隆重组突变体构建突变分析SNP序列分析PCR技术的应用•医学研究基因表达水平与疾病的相关性基因变异与疾病的相关性基因与表型的关联基因之间的相互关系寻找未知基因研究基因功能PCR技术的应用•临床医学遗传学（各种遗传病）肿瘤学（K-ras、p53、微卫星、端粒酶、p16、BCR/ABL等）传染病学（病毒、细菌、寄生虫等）其他•法医学亲子鉴定刑事侦破物证身份确认PCR技术的发展趋势简便快速封闭集成（高通量）定量广泛预测疾病（上工治未病）指导治疗（个

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