RBT 151-2016 食品微生物定量检测的测量不确定度评估指南

中华人民共和国认证认可行业标准食品微生物定量检测的测量不确定度评估指南(ISO/TS19036:2006MicrobiologyofGuidelinesfortheestimationofmeasurementuncertaintyforquantitativedetermi国家认证认可监督管理委员会发布工1GB/T27025—2008检测和校ISO16140:2003食品和动物饲料微生物学替代方法验证协议(Microbiologyoffoodandanimalfeedingstuffs—Protocolforthevalidationofalternativemethods)ISO/IECGuide98-3:2008测量的不确定度第3部分：测量中不确定度的表示指南(GUM:1995,Guidetotheexpressionofuncertaintyinmeasurement)2U扩展不确定度U是由合成标准不确定度u.(y)(3.3)和包k结果的期望值与可接受的参考值之间的差异。4原理本标准采用整体法评估测量不确定度。它是以影响测试结果分析程序的总变量为基础进行评估3设备设备试剂基质随机误差结果次级取样是指从分析样品中取出测试的部分，细菌计数技术中的初始悬液的制备属于次级取样。4第一种情况最为主要在5.4中列出了估算再现性标准偏差的基本原则。以上三种情况将在第6章～第8章中详细说明。5.3扩展不确定度按照ISO/IECGuide98-3:2008,扩展不确定度U为合成标准不确定度u.(y)(3.3)和包含因子k(3.5)的乘积，本标准中k值为2(大约对应95%的置信水平),按式(1)计算：式中：ue(y)——合成标准不确定度；SR——再现性标准偏差。5.4估算再现性标准偏差的基本原则本标准引用的黑匣子理念，其实就是提倡要尽可能多地考虑图1中不确定度来源。特别是实验室要了解测试的基质里的微生物分布，并将其考虑到测算不确定度的次级取样分量中(4.1)。再现性标准偏差要针对每种目标微生物(或与目标微生物一致的群体),针对每种基质(或与基质一致的群体),通过一个获得常规测试结果的指定的实验室方法进行估算。按照GB/T27025—2008的准则，确定来自方法或实验室方面的可能影响测量结果的关键因素，如培养基或其他试剂的来源、种类、计算方法(大工或自动)、操作者等，并证明这些关键因素受到有效控制。为了保证估算能反映实际情况，测试结果能得到有效控制，对测量不确定度的估算工作要进行必要的过程监控。以上任何关键因素发生变化时，测量不确定度都需要重新估算。6实验室内再现性标准偏差6.1概述实验室内再现性标准偏差，是获取测量不确定度的首选。实验室可以据此在检测报告中给出测量不确定度值。此方法的理论缺陷是无法考虑到偏倚。在食品微生物学中，基质对测量不确定度的影响是不可避免的，因此实验方案需要考虑从样品(如测试的食物样品)中选取测试部分所进行的次级取样对测量不确定度的影响。对于每一种目标微生物(或与目标微生物一致的群体)和一种指定的基质，实验方案(6.2)的实施要在同样基质中至少10个样品上进行。为了尽可能覆盖不同时间所引起的操作条件的变化，重复实验需在不同的日期进行，这样就可获得一段时间内累积的数据。检测的基质种类数取决于实验室常规分析的基质的多样性。选定的基质要在对不确定度值的影响方面以及以往实验室分析所用基质类型方面都具有一定的代表性，还要适合于所测试的微生物。附录A通过列举大量具有国际水准实验室的实验结果为我们提供了基质选择指南。其目的是评价来自实验室样品测试部分的次级取样和准备初始悬浮液相关的测量不确定度分量。更多的指导信息请按照ISO16140:2003中附录B。5实验方案的描述如图2所示。分析分析常规测验(如进行一系列10倍梯度稀释，每个稀释度接种到1~2个平皿)进行。相对稳定(这种情况在食品微生物学中比较少见),情况A和情况B要包含不同的分析日期。6试剂6.4计算SR——再现性标准偏差；n——给定基质样品数量；表1中列举了混合家禽肉中好氧嗜中温菌群的示例。7i1234567898设备设备试剂样品取样结果 9展不确定度U等于2sr。——y±2sr(log₁0);——y·log₁₀[y-2sR·y+2sr];——xCFU/g或xCFU/mL[10x-2sR,1——5.0log₁o±0.3log₁o; A11A12A21A221～pB11B12B21说明：初始悬液(A)、初始悬液(B)分别制备的两组初始悬液，两组悬浮液的情况尽可能不同(如不同的操作员、不同的平衡程度、不同的稀释液批次等);条件(1)、条件(2)——两组尽量不同的条件(不同的操作员、不同批次的培养基、不同的培养箱等);编号A11、A12等在重复条件下的两次操作(例如，每一种条件下，对初始悬浮液的两组稀释)。注：图2(6.2)的实验方案为图A.1的简化版，在图2中只列举出了图A.1中的Al1和B21。脂等);总标准偏差中大约贡献0.1log₁₀单位(见6.3中注)。而在后两类A.2.3详细结果表A.1~表A.5给出了从94个可用的数据文件中得出的每个目标微生物的详细结果。所有的标准偏差用log₁o(CFU/g)或log₁食品1d2b3d4d7即食熟肉Ready-to-eatcookedd8Vacuum-packedmincedbb表A.1(续)食品CDehydratedonionpobddcdddd机械分割火鸡肉b机械分割鸡肉bdd火腿片dd碎胡萝卜cd表A.1(续)食品鲜猪肉db奶粉(环境)aac06a水ab混合家禽肉b1db食品1d3d6鲜牛肉dCddd机械分割鸡肉bddd鲜肉da生奶油b食品9dd家禽肉(去皮)ddddddd香肠肉bbc最大可能数Mostprobablenumber。食品1dddcdd9dddd食品Dehydratedonionpoac家禽肉(去皮)d机械分割火鸡肉b机械分割鸡肉b表A.5(续)食品dcac鲜肉d碎火鸡肉bd玉米片c鲜鸡肉dbCaa(sr)²≈(sis)²+(Scond)²x—n次试验结果的平均值；n——试验次数；相对真值和估计值之间的差称为残差(或者剩余量),所有估计值的残差平方的和叫做残差平方和n——试验次数；A.3使用依据本标准的框架，以上试验的结果，即A.2.2中解释的4种主要类别和A.2.3physicalsciencesandtechnol[4]ISO5725-2,Accuracy(truenessandprecision)ofmeasurementmethodsand2:Basicmethodforthedeterminationofrepeatabilityandreproducibilityofa[5]ISO5752-3,Accuracy(truenessandprecision)ofmeasurementmethodsand3:intermediatemeasuresoftheprecisionofastandardmeasurem[6]ISO6887-1,Microbiol[7]ISO6888-1,Microbiologyoffoodandanimalfeedingstufenumerationofcoagulase-positTechniqueusingBaird—Parkeragarmedium[8]ISO6888-2,Microbiologyoffoodandanimalfeedingstufenumerationofcoagulase-positivestaphymerationofClostridiumperfringens—Colony-counttechnique[12]ISO11290-2,MicrobiologyoffdetectionandenumerationofListeriamonocytogenes—Part2:tionofaltermativemethods[14]ISO/TS21748,Guidancefortheuseofrepeatability,reproducibilityand[15]GUM:1995,Guidetotheexpressionofuncertaintyinmeasurement,BIPM/I[16]EURACHEM/CITACGuiQUAM:2000,availableat:http://www.wurac