SNT 1961.13-2013 出口食品过敏原成分检测 第13部分：实时荧光PCR方法检测小麦成分_第1页
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中华人民共和国出入境检验检疫行业标准出口食品过敏原成分检测第13部分：实时荧光PCR方法检测小麦成分I 本部分为SN/T1961的第13部分。本部分规定了食品中过敏原小麦成分的实时荧光本部分适用于食品及其原料中过敏原小麦成分的定性检测。本部分所规定方法的最低检出限(LOD)为0.01%(质量分数)。GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测2名称序列(5”-3')目的基因内参照5’端引物内参照3’端引物内参照探针AATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCFAM-CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGA真核生物18SrRNA基因小麦3'端引物小麦探针FAM-TTCCCGCAGCCCCAACAACCGC小麦GAG56D基因小麦探针FAM-CAAGGCGGCCGAAATAAGTTGCC小麦Wx012基因用10%盐酸调pH至8.0,121℃,高压灭菌20min,备用。5.4蛋白酶K:20mg/μL。5.1070%乙醇。6.4冰箱：2℃~8℃,-20℃。37.1.4弃去上清液，用预热至65℃的TE缓冲液溶解DNA;7.2DNA浓度和纯度的测定c=A₂6o×N×50……………N——核酸稀释倍数。7.3实时荧光PCR检测7.3.1实时荧光PCR反应体系反应体系总体积为25pL,其中含：样品DNA(10pg/mL～100μg/mL)2μL,小麦正反向引物7.3.2实时荧光PCR反应参数50℃/2min,95℃/10min;45个循环为95℃/15s,58℃/1min。4c)如35.0<Ct值<40.0,则重复一次。如再次扩增后Ct值仍为<40.0,则判定被检样品阳性；d)在5.1的两对引物与探针中，若其中一对引物与探针检测结果为阳性，即可判定被检样品9.2.1结果为阳性者，表述为“检出过敏原小麦成分”。9.2.2结果为阴性者，表述为“未检出过敏原小麦成分”。检测过程中防止交叉污染的措施按照GB/T27403中的规定CAACAA

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