2025届河南省名校高考生物押题试卷含解析

2025届河南省名校高考生物押题试卷注意事项：1．答卷前，考生务必将自己的姓名、准考证号填写在答题卡上。2．回答选择题时，选出每小题答案后，用铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑，如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其它答案标号。回答非选择题时，将答案写在答题卡上，写在本试卷上无效。3．考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。每小题只有一个选项符合题目要求）1．某种大型肉食动物迁入一新的生态系统后，大型肉食动物对当地的小型肉食动物和某些植食性动物有捕食和驱赶作用。一段时间内，下列情况不会发生的是（）A．增加物种丰富度导致营养结构更加复杂B．某些生产者的个体数量增加后保持稳定C．使植食性动物之间的竟争优势发生改变D．生态系统各营养级生物同化能量均减少2．某高等植物细胞呼吸过程中主要物质变化如图，①~③为相关生理过程。下列叙述正确的是（）A．若该植物为玉米，则③只发生在玉米胚细胞的细胞质基质中B．该植物②过程产生ATP的场所是线粒体基质和线粒体内膜C．等量的葡萄糖在有氧呼吸和无氧呼吸过程中产生丙酮酸的量不同D．只给根部细胞提供同位素标记的H218O，在O2和CO2中能同时检测到18O3．下图是中枢神经系统中神经元之间常见的一种联系方式，相关叙述正确的是A．图中共有3个神经元构成2个突触B．神经纤维兴奋是Na+大量外流的结果C．刺激b处后，a、c处均能检测到电位变化D．这种联系有利于神经元兴奋的延续或终止4．B淋巴细胞合成抗体移到质膜上作抗原受体。下列关于该过程的叙述，正确的是（）A．氨基酸在游离核糖体中通过脱水缩合形成肽链B．完整的肽链被膜泡包裹后进入内质网囊腔加工C．内质网向外与质膜相连直接将抗体移到质膜上D．将抗体移到质膜上的过程需要ATP提供能量5．胃癌是我国发病率很高的一种恶性疾病，制备抑制癌细胞增殖的单克隆抗体对治疗胃癌具有重要意义。抗胃癌单克隆抗体的制备过程如图所示，以下说法正确的是（）A．单克隆抗体的制备过程中需加入血清或血浆B．将人的胃癌细胞反复注射到小鼠体内，产生的血清抗体为单克隆抗体C．在乙、丙及骨髓瘤细胞中，乙、丙经培养后，均可获得大量的抗胃癌单克隆抗体D．诱导骨髓瘤细胞与甲融合，可用的诱导因素是只有灭活的病毒6．某生物黑色素的产生需要如下图所示的三对独立遗传的基因控制，三对基因均表现为完全显性。由图可知，下列说法正确的是A．基因与性状是一一对应的关系，一个基因控制一个性状B．基因可通过控制蛋白质的结构来直接控制生物的性状C．若某生物的基因型为AaBbCc，该生物可以合成黑色素D．若某生物的基因型为AaBbCc，该生物自交产生的子代中含物质乙的占3/16二、综合题：本大题共4小题7．（9分）对小鼠的研究表明，夜晚小鼠脑内肾上腺素神经元能合成较多去甲肾上腺素并将其储存于突触小泡，当兴奋传导过来时突触小体中的去甲肾上腺素分泌到突触间隙中。白天小鼠合成、分泌的去甲肾上腺素较少；去甲肾上腺素可阻止T细胞和B细胞从淋巴结释放到血液。人类这一过程刚好与小鼠相反，回答下列问题：（1）T细胞和B细胞均起源于_______；在体液免疫中T细胞的作用是_______。B细胞分化成的浆细胞能产生抗体，而B细胞不能产生抗体的原因是_______。（2）小鼠脑内肾上腺素神经元受刺激分泌去甲肾上腺素时，发生的信号转化是_______，其发挥作用后即被灭活的意义是_______。（3）研究表明人体肾上腺髓质细胞也能分泌去甲肾上腺素，其作用的特点有_______（写两点）。（4）试推测：与小鼠相比，人类夜晚血液中T细胞和B细胞的数量会比白天_______（填“多”或“少”），原因是_______。8．（10分）肾上腺糖皮质激素是由肾上腺皮质分泌的一种激素，在生物体的生命活动调节中起重要作用。如图是肾上腺糖皮质激素的分泌调节示意图，请回答下列问题。（1）图中“CRH”的中文名称是__________，其分泌受到图中__________物质的调节。（2）从应激刺激到糖皮质激素的分泌过程属于__________调节，腺垂体能接受CRH的调节是因为__________。（3）氢化可地松是糖皮质类激素，具有快速、强大而非特异性的抗炎作用。异体蛋白注射到大鼠足跖内，可在短时间内引起组织的急性炎症，炎症部位明显肿胀，体积增大。现有可供小鼠注射的生理盐水、一定浓度的氢化可地松溶液、蛋清等试剂，为验证氢化可地松的抗炎作用，请写出实验思路并预期实验结果____________________。9．（10分）肠出血性大肠杆菌是能导致人体患病的为数不多的几种大肠杆菌中的一种，人体感染该种大肠杆菌后的主要症状是出血性腹泻，感染严重者可出现溶血性尿毒综合征（HUS），危及生命。该大肠杆菌在血平板（培养基中添加适量血液）上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色，从而形成透明圈。下图为从被肠出血性大肠杆菌污染的食物中分离和提纯该大肠杆菌的操作流程示意图。请回答下列相关问题：（1）肉汤培养基可为培养的微生物提供的营养成分包括________________________。（2）以上操作中在血平板上的接种方法是________________；第一次接种操作前和整个接种操作结束后均需要对接种工具进行灼烧灭菌，其目的分别是________和________。（3）为了进一步研究该大肠杆菌的抗原性，常利用________法分离其蛋白质，若甲蛋白质比乙蛋白质后洗脱出来，则相对分子质量较大的是________。在装填凝胶柱时，不得有气泡产生，是因为________________。10．（10分）萝卜的蛋白A具有广泛的抗植物病菌作用，而且对人体没有影响。我国科学家欲获得高效表达蛋白A的转基因大肠杆菌作为微生物农药，做了相关研究。（1）研究者用相同的_________酶处理蛋白A基因和pET质粒，得到重组质粒，再将重组质粒置于经_________处理的大肠杆菌细胞悬液中，获得转基因大肠杆菌。（2）检测发现，转入的蛋白A基因在大肠杆菌细胞中表达效率很低，研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好，因而设计了与蛋白A基因结合的两对引物（引物B和C中都替换了一个碱基），并按图2方式依次进行4次PCR扩增，以得到新的蛋白A基因。①这是一种定点的_________技术。②图2所示的4次PCR应该分别如何选择图1中所示的引物？请填写以下表格（若选用该引物划“√”，若不选用该引物则划“×”）。_____引物A引物B引物C引物DPCR1PCR2PCR3PCR4（3）研究者进一步将含有新蛋白A基因的重组质粒和_________分别导入大肠杆菌，提取培养液中的蛋白质，用_________方法检测并比较三组受体菌蛋白A的表达产物，判断新蛋白A基因表达效率是否提高。为检测表达产物的生物活性，研究者将上述各组表达产物加入到长满了植物病菌的培养基上，培养一段时间后，比较_________的大小，以确定表达产物的生物活性大小。（4）作为微生物农药，使用时常喷洒蛋白A基因的发酵产物而不是转蛋白A基因的大肠杆菌，其优点是_________。11．（15分）有研究者拟从中药渣肥堆的样本中筛选高产纤维素酶菌株，为纤维素酶制剂的硏制提供原料。请回答下列问题：（3）从中药渣肥堆中能分离出纤维素分解菌的原因是_________________。（5）纤维素分解菌能产生纤维素酶，该酶至少包括三种组分，其中___________酶能将纤维二糖分解成葡萄糖。（3）从中药渣肥堆中取样后，需要进行选择培养，其目的是_________________。（4若将纤维素分解菌内的酶提取出来，进行固定，一般不采用______法，原因是_______________________。（5）经筛选获得高产纤维素酶菌株3株，分别命名为Z-3、Z-5和Z-3。在适宜条件下培养相同时间后，测得3种菌株的菌落直径与产生的透明圈直径结果如下表。菌标编码菌码直径（d）cm透明圈直径（D）cmZ-33．435．43Z-53．834．86Z-35．354．88要使纤维素分解菌菌落周围出现透明圈，需要向培养基中添加________进行鏊别。透明圈的大小与纤维素酶的量和_________有关。你认为表中最适合用于制备纤维素酶制剂的菌株是___________。（填菌株编码）

参考答案一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。每小题只有一个选项符合题目要求）1、D【解析】

一个完整的生态系统包括生物部分和非生物部分，非生物部分包括阳光、空气、水、温度等，生物部分由生产者、消费者和分解者组成。生态系统的能量流动和物质循环都是通过食物链和食物网的渠道实现的，物质是能量的载体，使能量沿着食物链(网)流动，而能量又作为动力，使物质能够不断地在生态系统和无机环境之间循环往复。【详解】A、某种大型肉食动物迁入一新生态系统后，对当地的小型肉食动物和植食性动物有捕食和驱赶作用，使物种丰富度增加、营养结构更加复杂，与题意不符，A错误；B、植食性动物数量减少，对植物的捕食减弱，会导致某些生产者的个体数量增加后保持稳定，与题意不符，B错误；C、根据题意可知，某种大型肉食性动物迁入到一个新的生态系统时，对低营养级肉食性动物与植食性动物有捕食和驱赶作用，故某种植食性动物可能在竞争中失去原有竞争优势，与题意不符，C错误；D、某种大型肉食动物迁入一新生态系统后，改变了植食性动物竞争优势状况，但生态系统各营养级同化能量变化不能确定，不可能出现各个营养级生物同化量都减少的情况，D正确。故选D。2、B【解析】

高等植物的细胞呼吸可以分为有氧呼吸和无氧呼吸两类，有氧呼吸分为三个阶段，分别为葡萄糖在细胞质基质分解为丙酮酸和[H]，丙酮酸在线粒体基质分解为二氧化碳和[H]，氧气和[H]在线粒体内膜上生成水三个过程。而无氧呼吸是在没有氧气的条件下，第一阶段产生的丙酮酸在细胞质基质被分解为酒精和二氧化碳。【详解】A、玉米的胚细胞进行无氧呼吸的产物为乳酸，不是酒精和二氧化碳，A错误；B、②过程主要是指有氧呼吸的第二阶段和第三阶段，场所分别为线粒体基质和线粒体内膜，都会产生ATP，B正确；C、有氧呼吸第一阶段和无氧呼吸第一阶段反应完全相同，会产生等量的丙酮酸，C错误；D、根部细胞没有叶绿体，不会进行光合作用，所以给根部细胞提供同位素标记的H218O，只能在CO2中先检测到18O，D错误；故选B。3、D【解析】

图中共有3个神经元构成3个突触，A错误；神经纤维兴奋是Na+大量内流的结果，B错误；由于兴奋在突触间的传递是单向的，因此刺激b，兴奋只能从b的右侧向下传递到c，再传递到b，而不能从b的左侧传递到a，只有c处能检测到电位变化，C错误；据图可知，刺激b时，兴奋可沿着b→c→b的方向顺时针持续传递，同时，又不能传递到a，因此这种联系有利于神经元兴奋的延续或终止，D正确。【点睛】本题考查突触结构、兴奋传导以及膜电位变化的相关知识，意在考查学生的识图能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题的能力。4、D【解析】

成熟的B淋巴细胞的受体分子在合成后便移到细胞膜上。成熟的B淋巴细胞在血液中循环流动。当它的受体分子两臂遇到相应的抗原并将它锁定在结合位点后，这个B淋巴细胞便被致敏了，并准备开始分裂。分泌蛋白合成与分泌过程:核糖体合成蛋白质内质网进行粗加工内质网“出芽”形成囊泡高尔基体进行再加工形成成熟的蛋白质高尔基体“出芽”形成囊泡细胞膜。【详解】A、核糖体无膜结构，故氨基酸在游离核糖体上通过脱水缩合形成肽链，A错误；B、完整的肽链在核糖体上合成后直接进入内质网囊腔加工，B错误；C、内质网向外与质膜相连，向内与核外膜相连，抗体的合成和分泌过程经过了核糖体的合成，内质网的初加工和高尔基体的再加工，然后以囊泡的形式将抗体运输到质膜上，C错误；D、将抗体移到质膜上的过程需要消耗ATP提供的能量，D正确。故选D。5、A【解析】

1、单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。2、据图分析，甲表示B淋巴细胞，乙为杂种细胞，表示杂交瘤细胞，丙表示能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。【详解】A、单克隆抗体的制备过程中需加入血清或血浆，A正确；B、将人的胃癌细胞反复注射到小鼠体内，产生的血清抗体不是单克隆抗体，B错误；C、在乙、丙及骨髓瘤细胞中，乙、丙经培养后，由于基因的选择性表达，不一定获得大量的抗胃癌单克隆抗体，C错误；D、诱导骨髓瘤细胞与甲B淋巴细胞融合，可用的诱导因素处理灭活的病毒，还有聚乙二醇等，D错误。故选A。6、D【解析】由图可知，黑色素合成的过程中，受到a、B、C三个基因的控制，所以基因与性状并不是一一对应的关系，A错误；图中的a、B、C三个基因都是通过控制酶的合成从而控制性状的，B错误；若某生物的基因型为AaBbCc时，a基因不能表达，酶①无法合成，所以无法合成黑色素，C错误；若某生物的基因型为AaBbCc，该生物自交子代中含物质乙的基因型是aaB_的比例是(1/4)╳(3/4)=3/16，D正确，所以选D。二、综合题：本大题共4小题7、骨髓识别抗原；分泌淋巴因子，以促进B细胞的增殖分化控制抗体的基因只在浆细胞中表达（或基因的选择性表达）电信号→化学信号维持内环境稳定微量高效；通过体液运输；作用于靶器官和靶细胞；发挥作用后即被灭活等多人类去甲肾上腺紧的分泌规律与小鼠相反，夜晚分泌量较少，而去甲肾上腺素会阻止T细胞、B细胞释放到血液，因此人类夜晚血液中T细胞和B细胞较多【解析】

特异性免疫包括体液免疫和细胞免疫。

体液免疫过程为：（1）除少数抗原可以直接刺激B细胞外，大多数抗原被吞噬细胞摄取和处理，并暴露出其抗原决定簇；吞噬细胞将抗原呈递给T细胞，再由T细胞呈递给B细胞；（2）B细胞接受抗原刺激后，开始进行一系列的增殖、分化，形成记忆细胞和浆细胞；（3）浆细胞分泌抗体与相应的抗原特异性结合，发挥免疫效应。

细胞免疫过程为：（1）吞噬细胞摄取和处理抗原，并暴露出其抗原决定簇，然后将抗原呈递给T细胞；（2）T细胞接受抗原刺激后增殖、分化形成记忆细胞和效应T细胞，同时T细胞能合成并分泌淋巴因子，增强免疫功能。（3）效应T细胞发挥效应。【详解】（1）T细胞和B细胞均起源于骨髓，都是由造血干细胞分裂分化而来；在体液免疫中T细胞识别吞噬细胞呈递的抗原，在抗原的刺激下产生淋巴因子，以促进B细胞的增殖分化。虽然B细胞和浆细胞都存在抗体基因，但是由于基因的选择性表达，使抗体基因只在浆细胞中表达。（2）通过题干信息可知，夜晚小鼠脑内肾上腺素神经元能合成较多去甲肾上腺素并将其储存于突触小泡，当兴奋传导过来时突触小体中的去甲肾上腺素分泌到突触间隙中，故其发生的信号转化是电信号→化学信号，神经递质发挥作用后即被灭活可维持内环境稳定。（3）肾上腺髓质细胞，属于内分泌腺细胞，分泌的去甲肾上腺素属于一种激素，那么激素作用的特点有微量高效；通过体液运输；作用于靶器官和靶细胞；发挥作用后即被灭活等。（4）由于人类去甲肾上腺紧的分泌规律与小鼠相反，夜晚分泌量较少，而去甲肾上腺素会阻止T细胞、B细胞释放到血液，因此人类夜晚血液中T细胞和B细胞较多。【点睛】此题主要考查人体免疫系统在维持稳态中的作用，意在考查学生对基础知识的理解掌握，难度适中。8、促糖皮质激素释放激素ACTH、糖皮质激素(神经递质)神经—体液腺垂体细胞表面存在与CRH结合的特异性受体实验思路：选取两组大小与生理状况一致的小鼠，分别注射等量的生理盐水和一定浓度的氢化可地松溶液，一段时间后，向两组小鼠的足跖内注射等量的蛋清溶液，随后观察两组小鼠足跖的肿胀情况。实验结果：注射一定浓度的氢化可地松溶液的小鼠足跖肿胀情况小于注射生理盐水的小鼠【解析】

据图分析：下丘脑是内分泌调节的枢纽。下丘脑可以分泌相关的促激素释放激素作用于垂体，促进垂体相关的促激素作用于相应的内分泌腺，促进内分泌腺分泌相应的激素。同时内分泌腺分泌的激素可以负反馈作用于下丘脑和垂体，影响二者分泌促激素释放激素和促激素。【详解】（1）由肾上腺糖皮质激素的分泌调节示意图可知，肾上腺糖皮质激素的分泌属于分级调节，其分泌受下丘脑、垂体的调控，故可判断下丘脑分泌的CRH是促糖皮质激素释放激素，作用于垂体，促进垂体分泌促糖皮质激素，促糖皮质激素最终促进肾上腺皮质分泌糖皮质激素。图中信息提示糖皮质激素可通过长反馈来调节下丘脑的分泌，ACTH可通过短反馈来调节下丘脑的分泌。所以CRH的分泌受到图中ACTH、糖皮质激素(神经递质)等物质的调节。（2）应激刺激产生的兴奋通过反射弧传到下丘脑，下丘脑分泌相关激素(CRH)调控垂体的分泌，垂体分泌的激素调控肾上腺皮质的分泌，这一过程为神经—体液调节。下丘脑分泌的CRH可作用于腺垂体，是因为腺垂体细胞的表面有与CRH结合的特异性受体。（3）该实验属于验证性实验，需明确实验的原理：氢化可地松是糖皮质类激素，具有快速、强大而非特异性的抗炎作用；异体蛋白属于抗原，可引起机体短时间内发生急性炎症，炎症部位明显肿胀。非特异性免疫在抗原入侵时发挥作用，故应在注射抗原前注射氢化可地松溶液，使实验鼠获得非特异性的抗炎能力，在此基础上再注射异体蛋白，观察比较不同组别炎症部位的肿胀情况，所以实验思路为：取两组大小与生理状况一致的小鼠，分别注射等量的生理盐水和一定浓度的氢化可地松溶液，一段时间后，向两组小鼠的足跖内注射等量的蛋清溶液，随后观察两组小鼠足跖的肿胀情况。实验结果：注射一定浓度的氢化可地松溶液的小鼠足跖肿胀情况小于注射生理盐水的小鼠。【点睛】本题考查了激素的分级调节、免疫等相关知识，意在考查考生理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。9、碳源、氮源、水、无机盐等平板划线法杀死接种环上的微生物，避免污染培养基（灭菌）避免污染环境和感染操作者凝胶色谱乙蛋白质气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱顺序降低分离效果【解析】

凝胶色谱法（分配色谱法）：①原理：分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。②凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。③分离过程：混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子，洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。④作用：分离蛋白质，测定生物大分子分子量，蛋白质的脱盐等。【详解】（1）肉汤培养基是天然培养基，可为培养的微生物提供的营养成分包括碳源、氮源、水、无机盐等。（2）图示中用到了接种环从液体培养基中接种到固体培养基中，因此在血平板上的接种方法是平板划线法。第一次接种操作前对接种工具进行灼烧灭菌，其目的是杀死接种环上的微生物，避免污染培养基（灭菌），整个接种操作结束后对接种工具进行灼烧灭菌，其目的是避免污染环境和感染操作者。（3）为了进一步研究该大肠杆菌的抗原性，常利用凝胶色谱法分离其蛋白质。分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快，若甲蛋白质比乙蛋白质后洗脱出来，则相对分子质量较大的是乙蛋白质。在装填凝胶柱时有气泡产生，就会在色谱柱内形成无效的空隙，使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过，搅乱洗脱液的流动次序，影响分离的效果。【点睛】本题重在考查微生物的培养基本步骤以及蛋白质的分离纯化，重在考查学生对基本概念的掌握以及基本操作过程的原理的理解。10、限制酶和DNA连接CaCl2基因突变引物A引物B引物C引物DPCR1√√××PCR2××√√PCR3××××PCR4√××√含有蛋白A基因的重组质粒、空质粒（pET质粒）抗原-抗体杂交抑菌圈对人、畜、农作物和自然环境安全；不会造成基因污染；有效成分纯度较高【解析】

（一）基因工程的基本工具1、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。2、“分子缝合针”——DNA连接酶（1）两种DNA连接酶（E•coliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较：①相同点：都缝合磷酸二酯键。②区别：E•coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶来源于T4噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率较低。（2）与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键．DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。3、“分子运输车”——载体（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。（2）最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。（3）其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒。（二）基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的获取1、目的基因是指：编码蛋白质的结构基因。2、原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成．人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。3、PCR技术扩增目的基因（1）原理：DNA双链复制（2）过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链；第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。第二步：基因表达载体的构建1、目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。2、组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因（1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。（2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。（3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来．常用的标记基因是抗生素抗性基因。第三步：将目的基因导入受体细胞1、转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。2、常用的转化方法：将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌转化法，其次还有基因枪法和花粉管通道法等。将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术．此方法的受体细胞多是受精卵。将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，最常用的原核细胞是大肠杆菌，其转化方法是：先用Ca2+处理细胞，使其成为感受态细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。3、重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。第四步：目的基因的检测和表达1、首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子杂交技术。2、其次还要检测目的基因是否转录出了mRNA，方法是采用用标记的目的基因作探针与mRNA杂交。3、最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原——抗体杂交。4、有时还需进行个体生物学水平的鉴定，如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。【详解】（1）在基因工程中，利用相同的限制酶和DNA连接酶处理蛋白A基因和pET质粒，得到重组质粒；大肠杆菌作为受体细胞，需要用氯化钙处理，以便重组质粒的导入。（2）①根据题意和图示分析，经过4次PCR技术后获得了新的基因，这是一种定点的基因突变技术。②与研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好，因而设计了与蛋白A基因结合的两对引物（引物B和C中都替换了一个碱基），因此