实验四.酶的特异性

实验四.酶的特异性【实验目的】

学习酵母蔗糖酶（粗提液）和唾液淀粉酶的制备，了解酶的特异性及检测方法。【实验原理】

酶是生物催化剂，酶对所作用的底物有严格的选择性，即酶的特异性。淀粉和蔗糖都是非还原性糖，分别为唾液淀粉酶和蔗糖酶的专一底物。淀粉被唾液淀粉酶水解生成具有还原性的麦芽糖，蔗糖被蔗糖酶水解生成具有还原性的葡萄糖和果糖。

Benedict试剂（含有Cu2+）常用于检验还原糖的存在，其被还原后生成砖红色的Cu2O沉淀。【器材及试剂】（一）器材：

1.恒温水浴锅2.试管及试管架

3.离心机4.吸量管

5.烧杯、量筒、漏斗等（二）试剂：

1.2%蔗糖

2.1%淀粉（内含0.3%的NaCl）

3.唾液淀粉酶溶液

4.蔗糖酶溶液

5.Benedict试剂【实验步骤】（一）淀粉酶的特异性1.唾液淀粉酶溶液的制备：先用蒸馏水漱口，然后用洁净试管1支，取唾液（无泡沫）约2ml，蒸馏水20倍稀释，备用。2.取试管5支，标号，按下表所列的次序操作：试剂试管编号123451%淀粉溶液（ml）1.0—1.0——2%蔗糖溶液（ml）—1.0—1.0—唾液淀粉酶（ml）——1.01.01.0蒸馏水（ml）1.01.0——1.0

3.摇匀，置37℃恒温水浴保温10min，然后每管加入Benedict试剂2ml，再放沸水浴5min。观察各管颜色变化，并解释实验结果。(二)蔗糖酶的特异性1.蔗糖酶溶液的制备：取活性干酵母1.0g，置于研钵中，加少量蒸馏水及石英砂研磨提取约10min，再加蒸馏水至总体积约为20ml，过滤或离心，滤液或上清液备用。2.取试管5支，标号，按下表所列的次序操作：试剂试管编号123451%淀粉溶液（ml）1.0—1.0——2%蔗糖溶液（ml）—1.0—1.0—蔗糖酶（ml）——1.01.01.0蒸馏水（ml）1.01.0——1.03.摇匀，置37℃恒温水浴保温10min，然后每管加入Benedict试剂2ml，再放沸水浴5min。观察各管颜色变化，并解释实验结果。【注意事项】

唾液的稀释倍数因人而异，有时差别很大，稀释倍数可以是50～300倍。【思考题】1、若将淀粉酶和蔗糖酶煮沸1min，实验结果会发生什么样的变化？

2、酶作用的专一性有哪几种？移液枪的使用部分用具与试剂量程的调节

1.按照从大体积调为小体积的方法调节。2.用拇指和食指旋转取液器上的旋钮，使数字窗口出现所需容量体积的数字。注意：千万不要将旋钮旋出最大量程，否则会卡住内部机械装置或者弹簧弹出而损坏了移液枪。

微量移液器的使用方法枪头（吸液嘴）的装配

在将枪头（pipettetips）套上移液枪时，正确的方法是将移液枪（器）垂直插入枪头中，稍微用力左右微微转动即可使其紧密结合。

移液的方法

1.吸取液体时，用大拇指将按钮按下至第一停点，移液器保持竖直状态，将枪头插入液面下2－3毫米。

2.然后慢慢松开按钮回原点。3.接着将按钮按至第一停点排出液体，稍停片刻继续按按钮至第二停点吹出残余的液体。最后松开按钮。

移液器的正确放置

使用完毕，可以将其竖直挂在移液枪架上，但要小心别掉下来。当移液器枪