PCR质量手册简要概述

PCR质量手册简要

概述

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前言

某某省某某医院临床基因扩增检验实验室建于12月。实验室的

设置、设备及人员配置均严格按照部、省临床基因诊断实验室规

范化标准结合

自身条件而建立。各项管理制度、质量保证体系以及基本操作要

求和标准操作程序均已制定。

某某省某某医院临床基因扩增检验实验室将面向全省卫生系

统，开展临床基因诊断实验和相关知识的培训工作，使被培训人员掌

握临床基因诊断基础理论知识、实验室管理和质量保证措施、规

范化操作方法以及了解基因诊断领域的进展。同时还将开展基因

（主要是遗传基因方面）的临床检测及科学研究工作，为我省临床基

因诊断事业的发展做出一份贡献。

质量方针

临床基因扩增检验实验室是严格按照部、省临床基因扩增实验

室规范化标准

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进行管理与操作，始终遵循：

以病人为中心

以质量为核心

以科学为依据

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岗位职责

1.实验室负责人岗位职责

（1）确定质量方针，编制质量手册，并组织人员学习,统一思

想。

（2）负责实验室全面质量，包括试剂盒的质量检验;操作的质

量检查;质量控制（室内室间质评）的结果检查;实验结果的核对、质

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检和签发报告;确定人员培训计划;安排日常工作，偏保及时发出质

量合格的报告。

（3）定期审核和评审质量手册的运行情况。

（4）对实验室对内外发出的报告负责,并以签名签字形式表

ZJ\o

2.技术人员岗位职责

（1）按时消毒、清洁实验室，并记录签字。

（2）检查仪器设备的维护状况，记录使用情况并签字。

（3）按质量手册规定的标准操作程序（SOP）操作试验，并填

写报告签字。

（4）按规定进行实验的自主质控工作（每次试验必须有室内

质控措施），并做好记录签字。

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人员培训及成果

1.人员组成及技术档案

本室有工作人员2人，其中1名中级/名初级。

2.培训记录及专业文章发表情况

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实验室设施环境及规章制度

1、实验室分区管理平面图:见图示1。

2、实验室基本设施：

分隔和面积:实验室严格按照标准，分隔为三个独立的工作室:

试剂准备室、样品处理室、基因扩增室。

工作流程:从试剂准备一样品处理一基因扩增，工作人员只能单

向流动。进入下一区域，必须更换工作服、手套。

通风:各室空气流通性良好。

照明:室内有良好的照明度。

环境:洁净、无菌;各室均配有紫外消毒设备。

各室的仪器、实验和文具用具以及清洁物品均属于各室专

用。

3、实验室消毒隔离及污物处理：

见实验室废弃物处理的标准操作程序。

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4、实验室规章制度：

4.1总则

4.1.1进入基因诊断实验室的任何工作人员都必须遵守实验室

规则;非工作人员未经允许不得入内,特别不得为找人而逆向误入

PCR实验室，以免造成不应有的污染。

4.1.2临床基因诊断实验室分试剂准备、样品处理、基因扩增

室三个室，各室拥有专用的仪器设备及实验物品（含加样器、试管

架、吸头、记录纸、笔、甚至清洁用品等），不得混用，须贴上不同

颜色标签予以区别;试剂准备室为白色标识、样品制备室为蓝色标

识、扩增室为绿色标识。

4.1.3临床基因诊断实验室工作人员应具备医学检验、微生

物学检验基本知识、大中专以上学历、并受过PCR实验的基本知

识和技能培训。

4.2.1进入实验室的工作人员必须遵守实验室的唯一流向的规

定，严禁反向流动。

4.2.2进入实验室,必须更换本室有颜色标识的工作服（含帽和

鞋）。勤换洗工作服。

4.2.3接收样品时应检查样品是否符合要求、贴上标签并做好

登记。

4.2.4实验室技术人员必须严格按照PCR实验标准操作程序

进行，包括实验室擦洗、台面消毒,离心管、吸头的无菌灭活准备,

仪器使用和废弃物处理等。

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4.2.5进入PCR实验室后区的物品不许带进PCR实验室前

区。

4.2.6任何实验操作包括仪器使用等情况均须做好记录。

4.2.7检测结果报告应完整（包括:检验项目、杷核酸类型及结

果等），并经专业负责人审核签字后方可发出。

4.2.8每天实验开始前，结束后均应按要求清洁、消毒地面和实

验台面。

4.2.9保持临床基因诊断实验室内空气唯一流向和空气流通。

4.2.10定期校准和维修PCR仪、离心机、水浴箱、冰箱等仪

希、I又奋。

4.2.11实验室内不得从事与实验无关事宜如聊天、饮食、吸

烟等;室内禁用电风扇。

4.2.12每天下班前处理好废弃物品，关好水、电和门窗。

4.3试剂准备室

4.3.1实验人员进入该室须穿本室专用白色工作服。实验中须

戴手套。

4.3.2每天实验开始前,清洁实验台并应打开紫外线灯消毒30

分钟。

4.3.3取出当天实验需配制和使用的试剂，其余试剂要立即收

好,放回冰箱内。

4.3.4试验中使用的离心管、吸头等应经过灭活无菌处理，（应

在消毒的有效期内）。

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4.3.5其它室的用品不得带入本室。

4.3.6每次试验均有记录;且使用本室专用的、带有本室标识

的记录本、纸笔。

4.3.7实验完毕后要整理、清洁工作台面。

4.4样品准备室

4.4.1实验人员进入该室须穿本室专用兰色工作服。实验中须

戴手套，手套需常更换。

4.4.2每天实验开始前,清洁实验室和实验台，并应打开紫外灯

消毒30分钟。

4.4.3样品的接受，登记，保存和提取按标准操作程序及试剂盒

要求进行。

4.4.4使用本室专用的,经灭菌处理的加样器和带滤心的吸

头。

4.4.5做好实验记录，并使用本室专用的记录本和笔。

4.4.6PCR扩增后区的物品不得带入本室。

4.4.7实验完毕清洁实验室和实验台,并打开紫外灯消毒。

4.5基因扩增室

4.5.1实验人员进入该室须穿本室专用绿色工作服.实验中须

戴手套，手套需常更换。

4.5.2每天实验开始前,清洁实验室和实验台，并应打开紫外灯

消毒30分钟。

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4.5.3使用本室专用的,经灭菌处理的加样器和带滤心的吸

头。

4.5.4需在此进行操作的，如巢式扩增，第一次扩增的模板必须

在本室内从反应管中取出，并加入另一只反应管中，此操作不可返回

扩增前区进行。

4.5.5非全封闭操作（即须开启反应管）应打开排风扇24小时

排气，保持室内负压状态C

4.5.6做好实验记录，且使用本室专用的记录本和笔。

4.5.7PCR扩增室的物品不得带入扩增前区。

458实验完毕清洁实验室和实验台,并打开紫外灯消毒。

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仪器设备和标准物质

1.仪器设备的配置

1.1试剂准备室内配置的设备：

紫外灯、普通高速台式离心机、旋涡振荡器、一套连续可调

式移液枪和无菌过滤咀型移液器枪头、冰箱、各种规格的无菌备

用的离心管、PCR反应管和玻璃器皿、实验台及本室专用的文

具、纸张；

本室专用的白色隔离服、一次性手套、污物桶及清洁用品。

1.2样品制备室内配置的设备：

紫外灯、台式高速冷冻离心机、旋涡振荡器、恒温水浴锅、

二套连续可调式移液枪、无菌过滤咀型移液器枪头、冰箱、各种

规格的无菌备用的离心管和玻璃器皿、实验台及本室专用的样品

登记本、文具、纸张；

本室专用的蓝色隔离服、一次性手套、污物桶及清洁用品。

1.3基因扩增室内配置的设备：

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紫外灯、PCR扩增仪、实验台及本室专用的文具、纸张；

本室专用的绿色隔离服、一次性手套、污物桶及清洁用品。

2.仪器设备的使用、维护及校准

见仪器使用、维护及校准标准操作程序。

3.仪器设备的记录和标识

所有有关基因诊断实验室仪器使用、维护及校准的操作均记

录备案。校准后的仪器贴上标识，说明校准日期和状态。

4.标准物质

阳性、阴性对照:来源于相应的检测试剂盒。

室内质控物、室间质评物:来源于卫生部和省临检中心。

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校准

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1.移液器、扩增仪、离心机等对检测结果有效性、准确性

有影响的检验设备，投入使用前必须进行校准，并每年校准1次。

2.参加卫生部组织的室间质评。

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检验方法

1.检验项目及方法

项目:乙型肝炎病毒DNA定量检测、丙型肝炎病毒RNA定量

检测

方法:TaqMan荧光定量PCR法乙型肝炎病毒DNA定量检测

TaqMan荧光定量PCR法丙型肝炎病毒RNA定量检测

2.操作手册

仪器使用、维护及校准标准操作程序

样品采集、保存及运输标准操作程序

实验过程标准操作程序（包括:试剂准备、样品制备、基因扩增

和产物检测SOP）

各检测项目标准操作程序

实验室消毒及污物处理标准操作程序

3.质量保证措施

室内质控

3.1核酸提取质控在核酸提取中，带一份弱阳性质控样本和

一份阴性质控样本（基质与待测样本相同），分别判定核酸提取的有

效性和核酸提取过程中是否发生污染。

3.2核酸扩增质控靶核酸为DNA:带一份弱阳性靶DNA质

控和一份阴性质控,以判定DNA扩增的有效性；

靶核酸为RNA：一份弱阳性cDNA质控、一份弱阳性RNA质控和

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一份阴性对照以判定转录和DNA扩增的有效性

3.3产物检测质控一份靶DNA或已稀释的扩增靶DNA阳

性质控、一份阴性质控以及一份试剂空白质控与待测的扩增样本

同步检测，以判定产物检测中核酸杂交及显色测定的有效性。

室间质控

参加由卫生部临床检验中心组织的全国临床基因扩增

项目的室间质量评价。

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样品处置

1.样本的标识:标识由三部分构成-标本采集日期、该检测

批次的标本序号和标本类型，三部分间无间隔符号，例如：Q2Q80101

上分别表示年、月、日、序号和血液标本，序号(01-99),整个标识

为8-11位；

2.样本的采集、保存和运输:见样品采集、保存及运输标准

操作程序。

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3.样本的接收、记录:样品接收后，立即贴上本室设计的样品

标识,并在接收标本记录表上按要求进行登记。

无签、迟送的样品、样品量不足、溶血的样品及其