临床检验中心PCR实验室标准操作程序

****医院

临床检验中心

临床基因扩增实验室

管理程序

标准操作程序（SOP）

起草人：

批准人：

生效日期：年月日

目录

临床基因扩增实验室的设置..............................................4

临床基因扩增实验室内部管理规章.......................................11

临床基因扩增实验室人员管理、配置及培训...............................15

临床基因扩增实验室的设施和环境.......................................18

临床基因扩增实验室清洁制度规章.......................................19

临床基因扩增实验室仪器设备管理规章...................................21

Roche480n实时荧光定量PCR仪操作规程、维护方法、校准(SOP-1)未修改26

Finnpipette可调式移液器的使用与维护标准操作(SOP-2)........................................34

Finnpipette可调式移液器校准标准管理程序(SOP-3)................................................38

温度计及湿温度计的校正标准管理程序(SOP-4).........................................................39

离心机使用与维护标准操作程序(SOP-5)....................................................................40

超净工作台使用与维护标准操作程序(SOP-6)............................................................44

恒温水浴箱使用、维护与校正(SOP-7)...................................................................45

旋涡振荡器使用与维护标准操作程序(SOP-8).......................................................48

冰箱的使用与维护标准操作程序(SOP-9)...............................................................49

可移动紫外灯标准操作程序(SOP-10)......................................................................51

仪器故障时标记、放置标准操作程序(SOP-11)......................................................52

仪器设备发生故障时的应急处理程序(SOP-12)......................................................53

临床标本的收集管理标准操作程序(SOP-13)..........................................................56

检验标本的验收和保存标准操作程序(SOP-14)......................................................57

样本编号的标准操作程序(SOP-15)...............................................................................62

PCR标本管理标准操作程序(S0P-16)...................................................................64

标本前处理标准操作程序(SOP-17)........................................................................66

核酸扩增及产物分析检测标准操作程序(SOP-18)................................................67

乙型肝炎病毒基因扩增检测标准操作程序(SOP-19)..............................................69

基因扩增检测实验结果分析标准操作程序(SOP-20).................................................74

实验结果有效性判断标准操作程序(SOP-21)........................................................77

室内质量控制标准操作程序(SOP-22).........................................................................78

实验室试剂耗材购买、验收和贮存的标准操作程序(SOP-23)............................84

试剂质检标准操作程序(SOP-24)............................................................................90

实验室耗材质检标准操作程序(SOP-25)................................................................93

手套使用及左右手分开的原则(SOP-26)................................................................96

实验室化学试剂贮存使用、废弃物处理及生物防护(SOP-27)............................97

抱怨的处理程序(SOP-28)........................................................................................100

实验室记录管理规章标准操作程序(SOP-29)........................................................104

检验报告单管理标准操作程序(SOP-30)................................................................107

实验室台面摆放顺序程序(SOP-31)........................................................................111

实验室常用溶液配置标准操作程序(SOP-32).........................................................112

临床基因扩增实验室的设置

1目的：依照实验室设置规范实现核酸扩增荧光检测实验室配置合理，以保证

实验工作健康有序及实验结果的可靠性

2范围：临床基因扩增实验室及相关工作人员，并明确各项规章制度

3操作人：****

4实验室设置规章：

4.1依据：

本实验室按《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》（卫医发[2002]10

号）中临床基因扩增检验实验室基本设置标准结合本实验室的条件进行设

置，并严格按照《临床基因扩增检验实验室工作规范》（卫检字2002第8

号）的要求开展临床基因扩增工作（拟开展基因扩增检验项目见附表1）

4.2实验室设置：

4.2.1实验室主要由试剂储存和准备区（PCR-I）、标本制备区（PCR-H）、PCR

扩增及产物分析区（PCRTH）三个工作室组成。这三区各自独立，每个区设有

缓冲间。其布局见实验室平面图（见附图1）。

4.2.2设立各区的门牌，分别是：“试剂储存和准备区（PCR-I）”、“标本制备

区（PCR-H）”、“PCR扩增及产物分析区（PCR-III）”，并在各区门上贴有“非

本室工作人员不得进入”标记。

4.2.3建立实验室内务管理，并放在进入实验室的明显位置（如置于缓冲区的

墙上；内务管理应有进入实验的工作流程、进入实验室的要求、实验前的准

备及清洁等）。

4.2.4三个工作区各配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办

公用品、专用工作服，并有明显的区分标识：试剂准备区一蓝色，标本制备

区一紫色，PCR扩增及产物分析区一黑色。各区的实验物品不得混用（实验

室主要设备一览表见表3）。

4.2.5进入各区的工作流程为：试剂储存和准备区一标本制备区一PCR扩增及产

物分析区。

4.2.6进入实验室必须更换有本室标识的工作服及清洁鞋套，工作人员离开某

一工作区时，该区物品不得带出本区（包括工作服等）。

4.3各区实验设备及用品配置：

4.3.1试剂储存和准备区：

冰箱（2~8℃和-15℃）、可调式移液器（覆盖0.5~1000ul）、紫外消毒

车、固定紫外线灯，混匀器，专用工作服，一次性用品（手套、带滤心的吸

头、鞋套、吸水纸、耐高压处理的离心管），专用实验记录本及记号笔等。

4.3.2标本制备区：

冰箱（2〜8℃和-15℃）、台式高速离心机、水浴锅、净化工作台、混匀

器、可调式移液器（覆盖1〜lOOOul）、紫外消毒车、固定紫外线灯，专用工

作服，一次性用品（手套、带滤心的吸头、鞋套、吸水纸、耐高压处理的离

心管），专用实验记录本及记号笔等。

4.3.3PCR扩增及产物分析区：

Line-Gene全自动荧光定量PCR核酸扩增仪、紫外消毒车、固定紫外线

灯，专用工作服，一次性用品（手套、鞋套、吸水纸等），专用实验记录本及

记号笔等。

4.4实验室人员设置：

实验室人员配置：我院PCR实验室配备有3名工作人员，其中1人具检

验师职称，2人具主管检验师职称。已全部经过安徽省临床检验中心培训，

并取得培训合格证（实验室工作人员一览表见表2）。

起草人批准人生效日期

年月日

附表1拟开展临床基因扩增检验项目一览表

项目方法备注

HBVDNAPCR荧光实时扩增Line-Gene扩增仪

表2临床基因扩增检验实验室工作人员一览表

一

备

性

序年学所学毕业从事本培训合

注

别

号姓名职务职称

龄历专业时间专业时间格证号

中

1XXX//OC主管检验82.7422002000**

专

中

2XXX//专8主管检验81.7442003000**

中

3XXX//f检验师检验95.7312003000**

专

表3临床基因扩增检验实验室仪器设备一览表

接

放

接

受

仪

器

置

收

序

备

人

设备

地

状

号生产厂家仪器型号仪器序号接收日期启用日期

名

签

称

点

态注

字

试

剂

紫

外

江阴市光

准

线

消全

1电仪器有ZXCI类B型2003-4-182002-5-9

备

毒

车-新

限公司区

试

剂

美菱XX美菱

全准

2电冰股份有限BCD-109624172003-4-192003-4-19

新备

箱公司区

试

剂

调

可

上海雷勃全

移

准

式

3分析仪器4500120Y557772003-4-19新2003-5-9

液

备

有限公司区

试

剂

可调上海雷勃

准

式

移全

4分析仪器4500020Y500412003-4-192003-5-9

液

备

器

，新

有限公司区

试

剂

可调上海雷勃

全准

5式移分析仪器4500100Y458492003-4-192003-5-9

新备

液器有限公司区

试

剂

调

可

上海雷勃全

移

准

式

6分析仪器4500090Y567342003-4-19新2003-5-9

备

液

有限公司区

试

剂

调

湘仪天平准

7TG3282003-5-8拨2003-5-8

仪器厂备

天平区

样

菌

无

本

化

净

浙江大学全

准

作

新

8工净化设备GEM-SHGEM-SH-012003-4-162003-5-9

备

台

厂区

样

本

紫外江阴市光

消

准

线电仪器有全

9一ZXCI类B型2003-4-182003-5-9

毒

备

车限公司械新

r区

接

放

接

受

仪

器

置

收

备

人

序设备

地

生产厂家仪器型号仪器序号接收日期状启用日期

名

签

称

点

号态注

字

样

本

高

速

上海安亭全

心

准

离

10科学仪器TGL-16B172003-3-1新2003-3-19

机

备

r区

样

本

美菱XX美菱

全准

11电冰股份有限BCD-109624222003-4-192003-4-19

新备

箱公司区

样

用

三

热

本

电

上海跃进

温

准

恒全

12S.HH.W21.420010062003-2-152003-3-30

浴医疗器械

备

水新

区

箱r

样

本

微型

上海医科全

匀

准

混

13大学仪器XW-80AQ/DAALC-20002003-2-15新2003-3-30

器

2备

厂区

样

本

调

可上海雷勃

移

准

式全

14分析仪器4500020Y500402003-4-192003-5-9

梃

新备

有限公司区

样

本

可调

上海雷勃全

准

移

式

15分析仪器4500100Y458502003-4-19新2003-5-9

备

由

液

器

有限公司区

样

本

可

调

上海雷勃全

准

式

移

16分析仪器4500090Y567332003-4-19新2003-5-9

备

液

器Y

有限公司区

样

本

调

可上海雷勃

移

准

式全

17分析仪器4500050F599682003-4-192003-5-9

备

梃新

有限公司区

K

杭州JahePCR

全

Thermo-扩

18FGD-33ABYQ6079-2442003-4-16新2003-5-9

Magnetic增

仪

有限公司区

R

江阴市光PC

紫外扩

电仪器有全

19线消ZXCI类B型2003-4-192003-5-9增

限公司械新区

毒车

厂

图1基因扩增实验室平面图

****医院临床基因扩增实验室

临床基因扩增实验室内部管理规章

1目的：依照实验室管理规范实现全面质量管理，实现核酸扩增荧光检测实验

室有专人负责，以保证实验工作健康有序及实验结果的可靠性

2范围：临床基因扩增实验室及相关工作人员，并明确了各项规章制度

3操作人：**

4规章：

4.1实验室内务管理规章：

4.1.1标本的接收设在三个区以外的区域（与生化专用标本接收区合用），在标

本接收时同时进行以下记录：在标本与化验单上同时进行标本的唯一性编

号，在标本接收登记本上记录患者的姓名、年龄，标本接收日期，标本的特

性、状态，接收者签名。经验收合格后接收的标本直接运送至标本制备区。

4.1.2实验过程中须严格遵守实验的工作流程：试剂准备区一标本制备区一扩

增及产物分析区的唯一流向制度。

4.1.3开启实验区前逐一打开设在缓冲区外墙上的紫外线灯开关（控制实验区

的固定紫外灯），照射30分钟。

4.1.4工作开始前，在缓冲区换好本实验区工作衣，戴上一次性口罩、帽子，

套上一次鞋套，关闭紫外灯。打开缓冲的排风装置，开启实验区门锁，工作

时反锁隔离门。

4.1.5进行测定前的准备和工作记录（实验前的准备和工作记录见表4）：

a）记录冰箱温度、紫外线消毒时间；

b）消毒液、清洁液、75%酒精配制；

c）查看加样器、扩增仪、离心机、灭菌的吸头等是否在有效期限内；

d）校正水浴锅温度；

e）试剂准备：试剂是否在有效期范围内，根据标本量确定准备模板的数量及

阴阳性对照数量；

4.1.6实验过程的记录（见S0P文件）。

4.1.7检测结果的记录（见SOP文件）。

4.1.8实验完成后实验室清洁消毒处理及记录：实验台面、加样器、离心机、

超净工作台、振荡器、扩增仪、实验室空间、实验室地面等（详见实验室清洁

制度）。

4.1.9工作结束，内务整理完毕，关闭排风装置及实验区，加锁。

4.1.10唯一流向制度同样运用于实验室物流管理及内务管理。

4.2质量控制规章：

4.2.1制定各种SOP文件并严格执行。

4.2.2参加室间质评。

4.2.3开展室内质控工作。

4.3人员行为规章：

4.3.1要有强烈的时间观念，按时上下班，不迟到、早退。

4.3.2实验室人员须保持仪表整洁。

4.3.3严格遵守实验操作规范，不得随意更改操作步骤。

4.3.4实验室技术人员必须严格按照PCR实验室操作程序进行，包括实验室擦

洗、台面消毒，离心管、吸头的无菌灭活准备，仪器使用和废弃物的处理等。

4.3.5进入实验室工作人员必须遵守实验室唯一流向制度，无必要尽量减少进入

实验室的次数。

4.3.6实验室内严禁饮食、吸烟。

4.3.7非本室工作人员未经允许不得进入实验室。

4.3.8语言有礼貌、举止讲文明，对待来访病人或电话应和蔼礼貌，解释明确耐

心，不得推脱或生硬回绝。

4.3.9晚上下班要关门、窗，检查空调和仪器的电源是否关闭。

4.4仪器管理规章：

4.4.1实验人员必须熟悉仪器性能方允许操作，严格遵守操作规程。

4.4.2所有仪器（如PCR扩增仪）须有专人负责，有使用维修记录。

4.4.3仪器使用前必须检查是否完好，一旦发现问题，及时向负责人反映，不

得擅自拆装。

4.4.4注意保持仪器卫生整洁，严禁在室内抽烟，吃零食，非仪器操作员应尽

量少入。

4.4.5每天了解仪器运转情况，负责仪器的整洁，安全，检查电源，水龙头。

4.4.6定期校正和维护PCR仪、离心机、水浴箱、冰箱等仪器、设备，并建立

仪器质量认证档案。

4.5试剂管理规章：

4.5.1实验室根据需要，定期提交试剂申购单，并做到及时盘存清点，入库做

到心中有数。

4.5.2所购试剂一律按试剂和耗材的SOP进行，并做到来源渠道正规，质量保

证。

4.5.3实验室对试剂库存定期检查，不使用过期变质的试剂。

4.5.4自配试剂须经严格校正后方可使用。

4.5.5试剂的保存应严格按照规定存放，确保有效期内能有效使用，杜绝浪费

现象。

4.5.6易燃易爆试剂应分开存放，远离火源和电源。

4.5.7试剂外借一律须经负责人同意方可。

5.本制度的变动程序：本制度的变动，可由任一使用该文件的工作人员向主管

负责人提出，主管负责人则召集与本制度相关的所有人员进行讨论，根据讨论

结果是否通过，如通过则公布实施。

起草人批准人生效日期

年月日

表4实验前的准备及工作记录日期：年月日

条目工作记录责任人（签名）

缓冲区处在排风状态□

冰箱温度记录____n_________

实验室紫外线照射30分钟n

更换新配制的消毒液□

清洁液配制___□________

□10%84液擦洗

实验台面的消毒

□75%乙醇清洁

加样器□在有效期内

扩增仪口在有效期内

离心机n在有效期内

灭菌的吸头□在有效期内

水浴锅温度校正口在有效期内

试剂：在有效期内

□所用模板数量

n所用阳性对照

□所用阴性对照

表4实验前的准备及工作记录日期：年月日

条目工作记录责任人（签名）

缓冲区处在排风状态□

冰箱温度记录

_________n___________________

实验室紫外线照射30分钟n

更换新配制的消毒液□

清洁液配制

□10%84液擦洗

实验台面的消毒

□75%乙醇清洁

加样器□在有效期内

扩增仪口在有效期内

离心机n在有效期内

灭菌的吸头□在有效期内

水浴锅温度校正口在有效期内

试剂：n在有效期内

□所用模板数量

n所用阳性对照

□所用阴性对照

临床基因扩增实验室人员管理、配置及培训

1.目的：保证实验室具备开展该项实验的能力。

2.适用范围：临床核酸扩增荧光检测实验人员。

3.负责人：**

4.内容：

4.1人员要求：

4.1.1由于PCR检测干扰因素较多，结果分析复杂。因此，PCR实验室工作人员