编制说明-粮油检验油料油脂中黄曲霉毒素B1的测定荧光定量快速检测法

《粮油检验油料油脂中黄曲霉毒素B1的测定

荧光定量快速检测法》编制说明

1．工作简况（包括任务来源、协作单位、主要工作过程、标准主要起草人

及其所做的工作等）

1.1任务来源（包括标准下达计划、标准计划项目调整、标准制修订的背景、

必要性和重要意义等）

1.1.1标准下达计划（包括标准下达计划文件、标准名称、第一起草单位等）

粮食行业标准《粮油检验油料油脂中黄曲霉毒素B1的测定荧光定量快速

检测法》的任务来源是国粮办发〔2020〕403号行业标准制修订计划。标准第一

起草单位是河南工业大学。

1.1.2标准计划项目调整（如有，请写明申请调整的具体内容、理由和依据

等）

无。

1.1.3标准制修订的背景、必要性和重要意义

黄曲霉毒素是黄曲霉和寄生曲霉等在生长繁殖过程中产生的次生有毒代谢

产物，是双呋喃环类毒素，其衍生物有约20种，主要是B1、B2、G1、G2、M1、

M2等。黄曲霉毒素被世界卫生组织癌症研究机构划定为一类天然存在的致癌物，

其中以B1的毒性最大，致癌性最强。粮食和植物油料均会受到黄曲霉毒素的污

染，尤其是花生和玉米更容易被污染。在花生油和玉米油的生产中，原料花生仁

和玉米胚中的黄曲霉毒素会转移至花生油、玉米油和花生饼粕、玉米饼粕中，对

食用油脂和饲料饼粕的质量安全造成威胁。GB2761-2017《食品安全国家标准食

品中真菌毒素限量》中对花生和玉米胚及其油脂中AFB1做出≤20µg/kg限量要

求。

GB5009.22-2016《食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G族的测

定》中列出了5种检测方法，即第一法同位素稀释液相色谱-串联质谱法，第二

法高效液相色谱-柱前衍生法，第三法高效液相色谱-柱后衍生法，第四法酶联免

疫吸附筛查法，第五法为薄层色谱法。其中的高效液相色谱法、酶联免疫吸附法

以高灵敏度、精密度和便于自动化而被应用于油脂企业。然而，高效液相色谱法

1

检测成本高，仪器价格高，维护费用高，分析时间长，前处理复杂；酶联免疫吸

附法虽然在检测成本上略好，但准确性和重现性却有待提高。

近年来，黄曲霉毒素B1快速检测方法已在油脂生产企业广泛使用，它具有

操作简单、样品用量少、测定速度快、重现性好、结果可靠等特点，尤其在油料、

油脂、饼粕的日常生产检验，特别是其高密度检测中显现更大的优势。并且，黄

曲霉毒素B1快检法也已普遍应用于粮食和饲料领域，并出台了多个行业标准和

地方标准，包括：LS/T6111-2015《粮油检验粮食中黄曲霉毒素B1测定胶体

金快速定量法》，NY/T2550-2014《饲料中黄曲霉毒素B1的测定胶体金法》，

DB36/T1024-2018《饲料中黄曲霉毒素的快速筛查胶体金快速定量法》。因此，

从生产实际出发，油料油脂领域也需要把黄曲霉毒素B1快检法提升为标准方法，

并加以推广应用，为食用植物油生产中AFB1实时检测和监控提供支持。此外，

粮食和饲料所采用的快检标准方法多为胶体金法，胶体金法只能实现定性和半定

量，而荧光定量法能够实现指标定量的快速检测，能够更精准的对黄曲霉毒素进

行监控。因此制定油料油脂生产中黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测方法是非常

必要的，对可靠监控油料油脂生产中黄曲霉毒素B1风险、实现粮油行业的高质

量发展具有重要意义。

1.2协作单位（除第一起草单位外的其他起草单位）

费县中粮油脂工业有限公司，中粮油脂专业化公司，河北玉星食品有限公司，

长寿花食品股份有限公司。

1.3主要工作过程（应包括标准起草阶段、征求意见阶段、审查阶段、报批

阶段等）

标准起草阶段：2020年10月-2021年3月，标准起草工作组就标准制定工

作制定了详细的工作计划，主要开展了以下几个方面的工作：对油料油脂中黄曲

霉毒素B1检测相关的文献资料和标准进行查阅和收集整理；对花生油、玉米油

加工企业就黄曲霉毒素B1检测的实践经验进行调研交流；在实验室对花生仁、

玉米胚及其油脂和饼粕样品中的黄曲霉毒素B1进行测定，对检测方法和检测条

件进行细化优化，通过对检测数据的统计处理分析，建立了利用荧光定量快速检

测法进行AFB1定量检测的标准方法。完成了标准文本的起草工作，同时完成了

标准的编制说明。

2

征求意见阶段：2021年4月-2021年7月，委托国内相关检测结构对检测方

法进行试验验证，在此基础上完善修改标准文本内容，将标准征求意见稿和标准

编制说明发送给武汉轻工大学、中粮油脂控股有限公司、山东金胜粮油有限公司、

河北玉星食品有限公司、山东三星玉米产业科技有限公司、河南工业大学检测中

心所等6个相关单位定向征求意见，6个单位均进行了意见回复。

在向上述6个单位征求意见时，其中在油料油脂分技术委员会任职的委员有

邓斌、张世宏、宋立里等3位委员。

标准起草组对反馈意见进行汇总分析，同时对标准文本和编制说明进行了完

善修改，之后提交给粮标委和油料油脂标准分技术委员会向社会公开征求意见。

1.4标准主要起草人及其所做的工作等

标准主要起草人有：刘玉兰，刘配莲，张刚，董迎章，马宇翔，邓斌，王月

华，王戬东，裴娅晓。标准主要起草人由科研院所专业技术人员及知名花生油和

玉米油生产企业的专业技术人员组成。科研单位专业技术人员所做的主要工作是

负责对检测方法的研究、检测数据分析及标准文本编写和征求意见汇总等。油脂

生产企业的专业技术人员所做工作主要是对检测方法的应用验证及利用此检测

方法对生产过程黄曲霉毒素进行风险监控，为标准制定提供检测数据和应用情况

的支持。

2．标准编制原则和确定标准主要内容（如技术指标、参数、公式、性能要

求、试验方法、检验规则等）的论据（包括试验、统计数据）。修订标准时，应

列出与原标准的主要差异和水平对比

2.1编制原则

本标准的结构和起草规则按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：

标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

标准编制原则是确保标准具有科学性、先进性、适用性和可操作性，对我国

花生油、玉米油生产中AFB1的准确快速定量检测起到规范的指导作用。

2.2确定行业标准主要内容

本标准主要内容包括：适用范围、规范性引用文件、原理、试剂、仪器设备

及材料、样品制备、样品测定、结果判定、重复性、检出限。

具体内容详见标准文本。

3

3．主要试验（或验证）情况的分析、综述报告，技术经济论证，预期的经

济效果

3.1主要试验和验证情况

（1）检测材料和检测仪器

试剂：甲醇

样品稀释液：由试剂盒中提供

仪器设备：荧光定量快速检测仪，型号FD-600（上海飞测生物科技有限公

司或其他）

检测卡恒温孵育器：型号FD-2200（上海飞测生物科技有限公司或其他）

粉碎机：可使试样粉碎后全部通过20目标准筛

离心机；

天平：分度值0.01g

移液器：型号20-200μl、100-1000μl

漩涡振荡器；

黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡。

（2）方法考察

①与国家标准方法的比较。应用建立的方法与现行GB5009.22-2016《食品

安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》高效液相色谱法进行比较。

应用本方法分析了来自不同粮油产区的油料和油脂中的AFB1，并与国标方法进

行比较，参考行业标准LS/T6402-2017《粮油检验设备和方法标准适用性验证

及结果评价一般原则》进行配对T检验，结果显示不存在显著差异。

附表1与现行国家标准高效液相色谱法进行比较

样品编号国标方法本方法差值d1样品编号国标方法本方法差值d1

花生仁12.452.190.26花生油227.85625.4122.444

花生仁210.629.850.77花生油345.23647.125-1.889

玉米油125.12324.1560.967玉米胚芽粕111.579.142.43

玉米油22.893.12-0.23玉米胚芽粕249.21545.2363.979

玉米油35.164.550.61花生粕135.26332.1453.118

花生油14.655.1-0.45花生粕238.25934.5233.736

②方法的验证

4

本方法已在北京市农林科学研究院、北京市粮油食品检验所、河南口岸食品

检测中心、广西粮油食品质量监督检测中心、河南省粮油饲料产品质量监督检验

中心、北京国粮局、中储粮等行业内外7家实验室验证。验证样品包括空白玉米

油、花生油样品和有证基体标准物质等，其中空白样品用于加标，加标浓度水平

为0.5倍限量浓度、1倍限量浓度、2倍限量浓度三个水平。对7个实验室返回

的检测结果根据国标GB/T6379.2-2004《测量方法与结果的准确度第2部分：

确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法》，采用柯克伦检验和格拉布斯检

验剔除离群值。重复性的变异系数小于10%，再现性变异系数小于15%，HorRat

在2之内，均符合《食品法典委员会程序手册》（第二十版）中关于联合验证的

要求。说明本方法在各实验室验证均有很好的重复性和再现性。此外，基于本方

法的产品于2017年3月顺利通过了局标准质量中心组织的设备和方法标准适用

性验证。

附表2实验室间联合验证统计结果

样品玉米油花生油

浓度低浓度中浓度高浓度有证标物低浓度中浓度高浓度有证标物

参加实验室

77777777

的数目

样品的数量2020202020202020

去除离群值

后的测试实77777777

验室数量

所有可接受

2020202020202020

结果的数量

平均值/

5.9610.5520.5215.125.0410.120.618.52

（μg/kg）

重复性的标

准偏差，Sr/0.484.223.731.3240.570.442.651.58

（μg/kg）

重复性的变

9.578.185.161.807.598.357.026.90

异系数/%

重复性限值，

3.075.664.682.720.042.574.283.47

r/（μg/kg）

再现性标准

偏差，SR/4.90.033.932.510.350.91.250.36

（μg/kg）

再现性的变

9.400.057.557.627.917.846.024.59

异系数/%

再现性限值，3.054.43.376.32.112.735.687.56

5

R/（μg/kg）

HorRat值0.380.451.450.950.630.850.80.75

回收率/%99.59102.73104.18-105.7399.05102.98-

（3）样品检出限和定量限

方法检出限和定量限参考行业标准LS/T6402-2017《粮油检验设备和方法

标准适用性验证及结果评价一般原则》进行评价。检出限（LOD）：采用20个

阴性样品检测值的均值，加上3倍标准偏差计算；定量限（LOQ）：采用20个

阴性样品检测值的均值，加上10倍标准偏差计算；检测结果见表3；测试结果

表明，黄曲霉毒素B1阴性样品的检测限（LOD）为0.7μg/kg，定量限（LOQ）

为2.1μg/kg。

附表3AFB1方法检出限和定量限（单位：ug/kg）

测定次数测定值平均值标准偏差检出限定量限

10

20

30

40

50.327

60

70.114

80.745

90

100

0.0840.2020.72.1

110

120

130

140

150

160

170

180

190

200.492

（4）实验室间考查

按照行业标准编制的实施进度，在确立方法后，积极开展了本行业标准的联

合验证工作。为了使方法科学合理，起草组制备验证实验样品及空白样品，委托

5家验证单位（河南工业大学试验检测中心、中粮营养健康研究院、河北玉星集

6

团有限公司研发中心、河北省粮食和物资储备局、山东三星玉米产业科技有限公

司）对5个验证样品进行实验室间协同验证，测试结果和数据分析按GB/T

6379.1-2004《测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定

义》和GB/T6379.2-2004《测量方法与结果的准确度第2部分：确定标准测量方

法重复性与再现性的基本方法》进行统计，分析数据见附表4。

表4实验室间联合验证结果

样品12345

实验室数目55555

参加统计实验室数目55555

离群实验室数目00000

平均值/(μg/kg)5.2610.0615.1824.4129.83

重复性标准偏差，Sr0.4370.3070.2740.4301.609

重复性限，r1.2240.8600.7661.2054.507

重复性变异系数/%8.553.071.821.775.45

再现性标准偏差，SR0.2570.0880.1740.1901.260

再现性限，R0.7200.2460.4880.5323.528

再现性变异系数/%4.89%0.87%1.15%0.78%4.22%

3.2技术经济论证及预期的社会经济效果

近年我国食用植物油年消费量超过4700万吨，其中花生油和玉米油产量分

别超过322万吨和150万吨，花生和玉米胚压榨制油生产量在国产油料加工中占

有相当大的比例。作为食用植物油原料的植物油料尤其是花生和玉米胚更容易受

到黄曲霉毒素的污染，对植物油料原料和加工产品中黄曲霉毒素进行快速检测，

并以此实现对生产中黄曲霉毒素的实时监控对保证花生油和玉米油品质安全及

其饲用饼粕安全都是非常重要的。该标准的制定和颁布实施将助力于油料油脂加

工过程对黄曲霉毒素污染物的快速检测，提升对污染物控制的能力，在油料油脂

加工业产生显著的经济社会效益。

4．与国际、国外对比情况（采用国际标准和国外先进标准的程度，以及与

国际、国外同类标准水平的对比情况，或与测试的国外样品、样机的有关数据的

对比情况等）

未查阅到国外有关植物油料和油脂中黄曲霉毒素快速定量检测方法。

5．与有关的现行法律、法规和强制性国家标准的关系（简要说明标准与法

7

律、法规、标准的协调性）

GB5009.22-2016《食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G族的测

定》列出了5种检测方法，即第一法同位素稀释液相色谱-串联质谱法，第二法

高效液相色谱-柱前衍生法，第三法高效液相色谱-柱后衍生法，第四法酶联免疫

吸附筛查法，第五法为薄层色谱法。

LS/T6111-2015《粮油检验粮食中黄曲霉毒素B1测定胶体金快速定量法》，

LS/T6108-2014《粮油检验谷物中黄曲霉毒素B1的快速测定免疫层析法》，

T/CCOA31-2020《植物油脂中黄曲霉毒素B1的快速筛查胶体金试纸法》。

与上述标准相比，该标准方法是一种快速定量检测的方法。该标准符合有关

的法律法规，是强制性国家标准检测方法的一种补充，填补了油料油脂加工过程

对黄曲霉毒素进行快速定量检测的空白。

6．重大分歧意见的处理经过和依据（主要适用于矛盾、分歧较大的意见，

处理结果与处理依据的说明；如没有，写“无”）

无。

7．标准作为推荐性标准的建议

建议本标准定为行业推荐标准，试行1年后，根据实施情况对本标准进行补

充完善，可依据情况升级为国家标准。

8．贯彻标准的要求和措施建议（包括组织措施、技术措施、过渡办法等）

应在实施前保证文本的充足供应，让使用者能及时得到文本。这是保证新标

准贯彻实施的基础。发布后、实施前应将信息在媒体上广为宣传。实施的过渡期

宜定为6个月。

9．废止现行有关标准的建议（修订时，应说明新旧标准的替代关系；如制

定，写“无”）

因本标准是首次制定，无废止现行有关标准的问题。

10．其他应予说明的事项（陈述是否涉及专利及有关说明、本标准编制阶段

与原计划有差异情况说明及原因等）

本标准技术内容未涉及专利。本标准编制阶段与原计划无差异。

11．附录（如没有，写“无”）

无

8

《粮油检验油料油脂中黄曲霉毒素B1的测定荧光定量快速检测法》

2022年10月20日

9

《粮油检验油料油脂中黄曲霉毒素B1的测定

荧光定量快速检测法》编制说明

1．工作简况（包括任务来源、协作单位、主要工作过程、标准主要起草人

及其所做的工作等）

1.1任务来源（包括标准下达计划、标准计划项目调整、标准制修订的背景、

必要性和重要意义等）

1.1.1标准下达计划（包括标准下达计划文件、标准名称、第一起草单位等）

粮食行业标准《粮油检验油料油脂中黄曲霉毒素B1的测定荧光定量快速

检测法》的任务来源是国粮办发〔2020〕403号行业标准制修订计划。标准第一

起草单位是河南工业大学。

1.1.2标准计划项目调整（如有，请写明申请调整的具体内容、理由和依据

等）

无。

1.1.3标准制修订的背景、必要性和重要意义

黄曲霉毒素是黄曲霉和寄生曲霉等在生长繁殖过程中产生的次生有毒代谢

产物，是双呋喃环类毒素，其衍生物有约20种，主要是B1、B2、G1、G2、M1、

M2等。黄曲霉毒素被世界卫生组织癌症研究机构划定为一类天然存在的致癌物，

其中以B1的毒性最大，致癌性最强。粮食和植物油料均会受到黄曲霉毒素的污

染，尤其是花生和玉米更容易被污染。在花生油和玉米油的生产中，原料花生仁

和玉米胚中的黄曲霉毒素会转移至花生油、玉米油和花生饼粕、玉米饼粕中，对

食用油脂和饲料饼粕的质量安全造成威胁。GB2761-2017《食品安全国家标准食

品中真菌毒素限量》中对花生和玉米胚及其油脂中AFB1做出≤20µg/kg限量要

求。

GB5009.22-2016《食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G族的测

定》中列出了5种检测方法，即第一法同位素稀释液相色谱-串联质谱法，第二

法高效液相色谱-柱前衍生法，第三法高效液相色谱-柱后衍生法，第四法酶联免

疫吸附筛查法，第五法为薄层色谱法。其中的高效液相色谱法、酶联免疫吸附法

以高灵敏度、精密度和便于自动化而被应用于油脂企业。然而，高效液相色谱法

1

检测成本高，仪器价格高，维护费用高，分析时间长，前处理复杂；酶联免疫吸

附法虽然在检测成本上略好，但准确性和重现性却有待提高。

近年来，黄曲霉毒素B1快速检测方法已在油脂生产企业广泛使用，它具有

操作简单、样品用量少、测定速度快、重现性好、结果可靠等特点，尤其在油料、

油脂、饼粕的日常生产检验，特别是其高密度检测中显现更大的优势。并且，黄

曲霉毒素B1快检法也已普遍应用于粮食和饲料领域，并出台了多个行业标准和

地方标准，包括：LS/T6111-2015《粮油检验粮食中黄曲霉毒素B1测定胶体

金快速定量法》，NY/T2550-2014《饲料中黄曲霉毒素B1的测定胶体金法》，

DB36/T1024-2018《饲料中黄曲霉毒素的快速筛查胶体金快速定量法》。因此，

从生产实际出发，油料油脂领域也需要把黄曲霉毒素B1快检法提升为标准方法，

并加以推广应用，为食用植物油生产中AFB1实时检测和监控提供支持。此外，

粮食和饲料所采用的快检标准方法多为胶体金法，胶体金法只能实现定性和半定

量，而荧光定量法能够实现指标定量的快速检测，能够更精准的对黄曲霉毒素进

行监控。因此制定油料油脂生产中黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测方法是非常

必要的，对可靠监控油料油脂生产中黄曲霉毒素B1风险、实现粮油行业的高质

量发展具有重要意义。

1.2协作单位（除第一起草单位外的其他起草单位）

费县中粮油脂工业有限公司，中粮油脂专业化公司，河北玉星食品有限公司，

长寿花食品股份有限公司。

1.3主要工作过程（应包括标准起草阶段、征求意见阶段、审查阶段、报批

阶段等）

标准起草阶段：2020年10月-2021年3月，标准起草工作组就标准制