TSATA 070-2024 水中拟柱孢藻毒素的测定酶联免疫吸附法

ICS13.060.01DeterminationofCylindrospermopsininwaterEnzymelinkedimmunosorbentassayIT/SATA070—2024前言 2规范性引用文件 3术语和定义 4方法原理 5试剂与材料 6仪器和设备 7样品 7.1样品的采集 7.2样品的保存 7.3试样的制备 7.4空白试样的制备 28分析步骤 28.1仪器参考条件 28.2校准 28.3测定 29结果计算与表示 29.1定量分析 29.2结果表示 210检出限和测定下限 211精密度和准确度 311.1精密度和准确度 311.2准确度 312质量保证和质量控制 312.1空白试验 312.2校准曲线 312.3连续校准 312.4平行样的测定 312.5基体加标 312.6阳性对照质控样品的测定 313废物处理 3T/SATA070—2024本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意拟柱孢藻毒素属有毒有机物，实验操作过程应按规定要求佩戴防护器具，避免接触皮肤和衣物。本文件由深圳市分析测试协会提出并归口。本文件起草单位：广东粤海水务检测技术有限公司、广东粤海水务股份有限公司。本文件主要起草人：路晓锋、杨颖、郭瞻宇、彭俊翔、游文丹、王庆生、何振乾、王樊、黄俊能、吴凡、黄子其、陆心卉、韦雪柠、陈桂畅、戴欢、吴金鑫、黄慧星、龙庆平、冯国仁、文金丽、郑开云、杨创涛、彭鹭、李秀虹。1T/SATA070—2024水中拟柱孢藻毒素的测定酶联免疫吸附法本文件提供了测定水中拟柱孢藻毒素的酶联免疫吸附法。本文件适用于地表水中拟柱孢藻毒素的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法HJ91.2-2022地表水环境质量监测技术规范3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4方法原理通过特异性抗体来识别检测拟柱孢藻毒素，加入底物后产生颜色反应，样品中的拟柱孢藻毒素浓度与吸收光强度成反比，于波长450nm处测量吸光度。5试剂与材料除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为符合GB/T6682标准的一级水。5.1拟柱孢藻毒素检测试剂盒。6仪器和设备6.1酶标仪：具有450nm波长模块。6.2水浴锅：可调节温度至37℃。6.3冰箱：可调节温度至-20℃。6.4实验器皿：所有操作过程中涉及的器皿应清洗干净后晾干（注：清洗过程避免使用洗衣粉洗涤，因洗衣粉可能含有荧光增白剂，对荧光实验结果会造成影响）。7样品7.1样品的采集参照HJ91.2-2022的相关规定采样，用预先洗干净并干燥的磨口玻璃瓶采集水样。7.2样品的保存采集的水样在-20℃下保存，5天内完成分析。7.3试样的制备2T/SATA070—2024取地表水样品50mL，经两次反复冻融处理，其中冷冻温度-20℃,水浴温度37℃,再从中取1mL冻融后的样品，经5000rpm离心5min，离心后取50μL样品直接检测。7.4空白试样的制备以实验用水代替样品，按照试样制备（6.3）相同操作步骤，制备空白试样。8分析步骤8.1仪器参考条件检测波长450nm,振荡时间3s。8.2校准8.2.1校准曲线的绘制配制6个浓度点的标准系列，标准系列浓度为0.05、0.10、0.25、0.50、1.00和2.00μg/L。以标准系列溶液中拟柱孢藻毒素浓度的对数值为横坐标，以仪器读取的吸光度值与空白浓度下的吸光度值的比值百分比为纵坐标，建立校准曲线。8.3测定8.3.1试样测定取待测样品（6.3），按照与绘制校准曲线相同的仪器分析条件进行测定。8.3.2空白试验按照与试样测定（7.3.1）相同的操作步骤进行空白试样（6.4）的测定。9结果计算与表示9.1定量分析样品中拟柱孢藻毒素浓度ρ按照公式（1）和公式（2）进行计算。式中：X——样品中拟柱孢藻毒素的质量浓度对数值；y——测定吸光度值与空白标准样品吸光度值比值的百分比（Bi/B0），%；a——校准曲线方法的斜率；b——校准曲线方法的截距。式中：ρ——样品中拟柱孢藻毒素的质量浓度，μg/L；x——样品中拟柱孢藻毒素的质量浓度对数值。9.2结果表示当测定结果＜1.00μg/L时，保留至小数点后2位；当测定结果≥1.00μg/L时，保留3位有效数字。10检出限和测定下限3T/SATA070—2024当样品体积为50.0μL时，本方法的检出限为0.05μg/L，测定下限为0.20μg/L。11精密度和准确度11.1精密度和准确度4家实验室对6种目标物低、中、高三个浓度水平的空白加标样品进行测定。实验室内相对标准偏差分别为4.7%～11.2%、3.5%～10.4%、3.2%～6.3%；实验室间相对标准偏差分别为2.1%、3.6%、1.0%。11.2准确度4家实验室对地表水样品进行低、中、高三个浓度水平的加标回收测定。地表水加标回收率范围分别为98.5%～102%、102%～104%、98.0%～103%。12质量保证和质量控制12.1空白试验每批样品需至少测定2个空白样品，测定空白值不得超过方法检出限。否则应查明原因，重新分析直至合格之后才能测定样品。12.2校准曲线校准曲线的相关系数应≥0.995，否则应重新绘制校准曲线。12.3连续校准每20个样品或每批次（少于20个样品/批）应分析一个曲线中间浓度点标准溶液，其测定结果与初始曲线在该点测定浓度的相对偏差应小于20%，否则应查找原因，重新绘制校准曲线。12.4平行样的测定每批样品应进行至少10%的平行样品（不少于1个）测定。平行样的相对偏差应≤20%。12.5基体加标每批样品应进行至少10%的基体加标样（不少于1个）测定，