检验科血清总胆汁酸测定标准操作规程

玉环县人民医院检验科文件编号：JYK-3-SH-015版本/修订号：C/0主题内容生化室作业指导书生效日期：20110701第2页共4页编写制定日期审核审核日期：核准执行日期李永臣2010-09-15李永臣2011-07-01章林华2011-07-01血清总胆汁酸测定（循环酶法）标准操作规程1检验申请单独检验项目申请：血清总胆汁酸测定(缩写TBA)；组合项目申请：血生化中肝功能测定加选本项目。临床医生根据需要提出检验申请。2标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定一周，在冰箱中（2～82.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。2.3.2不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。3方法原理循环酶法。胆汁酸被3a-羟基类固醇脱氢酶（3a-HSDH）及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）氧化，生成3酮类固醇及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NAD）。生成的3酮类固醇在3a-羟基类固醇脱氢酶及β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NAD）存在下，生成胆汁酸及β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）。如此进行循环反应，最后测定生成的β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NAD）的吸光度，求得胆汁酸浓度值。4试剂及其他用品4.1试剂：酶循环法测定总胆汁酸试剂盒，北京利德曼公司出品。4.2试剂盒保存：保存2～8℃4.3试剂盒准备：液态双试剂型，即开即用，无特殊准备。4.4试剂盒主要成分：试剂Ⅰ：Thio-NAD952.9mｇ/L，Tris缓冲液120mmol/L；试剂Ⅱ：3α-HSD125000mmol/L，NADH6.1mｇ/L。5校准品与校准模式5.1校准品：与试剂盒配套的标准液。5.2校准类型和数目：线性模式，1个校准点。5.3校准周期：校准间隔时间不限。但在：①更换试剂或出现质控漂移时；②当仪器进行全面保养后；③重要零件更换后；均须进行一次校准。5.4校准液重建方法：即开即用，无需特殊准备。6质控品与室内质控规则6.1质控品采用由Beckman-Coulter公司提供的两个不同水平未定值质控血清。6.2质控液重建方法：即开即用，无需特殊准备。6.3质控品测定：在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。6.4质控规则：采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。6.5如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正，并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。7适用仪器适用AEROSET和C16000全自动生化分析仪器。8标本检测步骤装载试剂→进行校准→进行质控→输入标本检测项目→加载标本→标本测定→结果复核→报告。主要分析参数参见说明书。10结果计算计算公式：胆汁酸浓度（μmol/L）＝ΔA测定管/min/ΔA校准管/min）×校准液TBA浓度（μmol/L）仪器根据此公式自动给出每个标本测定结果。11检验结果的报告及范围11.1结果的报告11.1.1结果经审核后，确认准确无误后发出报告。11.1.2报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。11.1.3如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。11.2报告范围：0～180μmol/L。超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如：系根据标本稀释后重复测定的结果。12操作性能12.1精密度：批内CV<3.0%，总CV<5.0%。12.2线性范围：0-180mol/L。12.3方法的有限性及干扰因素：胆红素<850μmol/L，血红蛋白<5g/L，抗坏血酸<2.84mmol/L，乳酸<24mmol/L，乳酸脱氢酶<10000U/L时，偏差均<±5%。13参考范围及医学决定水平参考范围：0-20umol/L14临床意义14.1血清胆汁酸水平是反映肝实质损伤的一个重要指标。餐后TBA测定对检出轻度肝脏病变的灵敏度优于所有其他肝功能试验。对检测酒精或工业化学品引起的肝细胞损伤的灵敏度优于其它肝功能试验。14.2急性肝炎时血清TBA可达参考值上限的10～100倍，急性肝炎恢复时TBA与ALT同时下降至正常水平，如持续不降有可能转为慢性。14.3血清TBA对慢性肝炎的鉴别以及预后的判断有意义。慢性肝炎患者如空腹TBA>20μmol/L可能处于活动期。14.4肝硬化患者的空腹TBA和餐后TBA均增高，其异常率高于所有其他肝功能试验。14.5TBA测定对肝外胆管阻塞和肝内胆汁淤积的诊断有较高的灵敏度。15结果审核以及分析与相关项目的联系15.1由资深专业人员负责检验结果的审核。15.2认真审核每一个测定结果，审核者对发出报告结果的准确性和可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。15.3相关项目：审核与丙氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、谷胺酰转移酶及胆红素的关系，如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。16威胁生命的“紧急值”及报告规定（此项不作规定）17有关引用程序与文件17.1Abbott自动生化分析仪仪器标准操作规程