检验科低密度脂蛋白胆固醇测定标准操作规程

玉环县人民医院检验科文件编号：JYK-3-SH-027版本/修订号：C/0主题内容生化室作业指导书生效日期：20110701第5页共5页编写制定日期审核审核日期：核准执行日期李永臣2010-09-15李永臣2011-07-01章林华2011-07-01血清低密度脂蛋白胆固醇测定标准操作规程1检验申请单独检验项目申请：血清低密度脂蛋白胆固醇(缩写LDL-C)测定；组合项目申请：血脂测定。临床医生根据需要提出检验申请。2标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定1天，普通冰箱中（2～8℃）稳定7天。-20℃可保存数月；-70℃至少可保存半年；应避免标本反复冻溶。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。抽血前3天内避免高脂饮食，24小时内不饮酒，2.3.2不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。2.1.5抽血前最好停用影响血脂的药物（如调脂药、避孕药、某些降压药、激素等）数天或数周，否则应记录用药情况。2.1.6妊娠后期各项血脂都会增高，应在产后或终止哺乳后3个月查血才能反映基本血脂水平。3.方法原理1.试剂1使血清中高密度脂蛋白和极低密度脂蛋白经化学反应被去除。胆固醇酯酶胆固醇酯+H2O……………胆固醇+脂肪酸，胆固醇氧化酶胆固醇+O2………………胆淄烯酮+H2O2，过氧化氢酶H2O2……………O2+H2O，2.试剂2中的变性剂释放出低密度脂蛋白胆固醇后，对LDL进行测量。胆固醇酯酶胆固醇酯+H2O……………胆固醇+脂肪酸，胆固醇氧化酶胆固醇+O2………………胆淄烯酮+H2O2,过氧化物酶H2O2+N,N-二甲基间甲苯胺+4-氨基安替比林……………醌亚胺+4H2O，通过测定600nm处醌亚胺吸光度，计算出低密度脂蛋白胆固醇的浓度。4试剂及其他用品4.1试剂：血清低密度脂蛋白胆固醇消除法测定试剂盒，由日本协和医药株式会社出品。4.2试剂盒保存：未启封试剂盒在2～8℃保存，可储存至失效期。启封使用的试剂置仪器试剂仓冰箱内稳定30天。开盖后避免污染。当试剂变混浊，或者试剂出现明显的粉红色，或空白吸光率>0.3时，表明试剂已变质，不能继续使用。4.3试剂盒准备：液态双试剂型，使用时分别将R1、R2倒入专用试剂瓶中。4.4试剂盒主要成分：酵素液①：表面活性剂1，4-AAP0.5mmol/L,胆固醇氧化酶1.2U/ml,胆固醇酯水解酶,过氧化物酶,GOOD’S缓冲液（PH6.3）。酵素液②：界面活性剂2，DSBmT1.0mmol/L,GOOD’S缓冲液（PH6.3）。5校准品与校准模式5.1校准品：与试剂盒配套的日本协和医药株式会社校准液。5.2校准类型和校准点数目：线性模式，1个校准点。5.3校准周期：校准间隔时间不限。但在：①更换试剂或出现质控漂移时；②仪器进行全面保养后；③仪器的重要零件更换后，进行一次校准。5.4校准液重建方法：校准液为干粉，用时加入2ml生理盐水，室温放置30分钟后混匀即可使用。6质控品与室内质控规则6.1质控品采用由Beckman-Coulter公司提供的两个不同水平未定值质控血清.6.2质控液重建方法：液态质控血清，即开即用，无需特殊准备。6.3质控品测定：在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。6.4质控规则：采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。6.5如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正，并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。7适用仪器适用AEROSET和C16000全自动生化分析仪器全自动生化分析仪器。8标本检测步骤装载试剂→进行校准→进行质控→输入标本检测项目→加载标本→标本测定→结果复核→报告。主要分析参数参见说明书。10结果计算LDL-C浓度（mmol/L）==×C标准11检验结果的报告及范围11.1结果的报告11.1.1结果经审核后，确认准确无误后发出报告。11.1.2报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。11.1.3如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。11.2报告范围：0.03～11.65mmol/L，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如：系根据标本稀释后重复测定的结果。12操作性能12.1精密度：批内CV<3.8％，批间CV<5.0％；12.2灵敏度：低密度脂蛋白胆固醇为2.59mmol／L时的显色吸光度A546nm约0.18～0.2812.3线性范围：0.03～11.65mmol/L。12.4干扰：血红蛋白＜5g/L、胆红素＜20mg/dL时、甘油三酯血症<11.3mmol/L及抗坏血酸<50mg/dL无明显干扰。13参考范围及医学决定水平13.1参考范围：0.67-3.37mmol/L13.2医学决定水平我国血脂异常防治建议XE"血脂异常防治建议"提出（1997）LDL-C合适范围：≤3.37mmol/L边缘升高：3.37～3.61mmol/L升高：≥3.64mmol/L14临床意义低密度脂蛋白胆固醇升高是冠心病的主要危险因素。是动脉粥样硬化性疾病危险性的评估指标。是冠心病预防和治疗的一级指标，降低低密度脂蛋白胆固醇水平是冠心病预防和治疗的首要目标。低密度脂蛋白胆固醇水平与冠心病的发病率成明显正相关：低密度脂蛋白胆固醇水平每增加1%，冠心病的危险性增加2.38%。15结果审核以及分析与相关项目的联系15.1由资深专业人员负责检验结果的审核。15.2认真审核每一个测定结果，审核者对发出报告结果的准确性和可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。15.3相关项目：审核与血脂其他指标和与载脂蛋白等的关系，LDL-C浓度一般与apoB呈正相关，且HDL-C加LDL-C应略低于TC。如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。16威胁生命的“紧急值”及报告规定通常无威胁生命的“紧急值”。17有关引用程序与文件