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DB41DB41/T1590—2018饲料中阪崎肠杆菌的检测EMA-PCR法2018-04-17发布2018-07-17实施河南省质量技术监督局发布I1GB4789.40食品安全国家标准食品微生物学检验克罗诺杆菌属）：a）上游引物：5＇-CTGCTCTGCTGACGAGTGG-3';2培养24h±2h。如果试样量不足25g，试样质量与增菌液的体积比应为1∶9。上，卤素灯照射下曝光1min，然后水浴煮沸10min，再将离心管转移至冰浴中使其快速冷却。涡旋混匀称取1.2g琼脂糖（4.6）加入100mL1×TAE电泳缓冲液（4.9）中，加热使其充分熔化，冷至65℃左右，加入5μL溴化乙锭（4.12），充分混匀，根据需要在模板内放入合适的梳子，倒入凝胶3与1μL6×上样缓冲液（4.10）混合后加入到上样孔内，取Mar恒压下电泳20min～30min。如果阪崎肠杆菌阳性对照的PCR产物在932bp处出现条带（参见附录B同时阴性对照PCR产物于932bp处未出现条带，则检测结果成立；否则样品的PCR产物电泳后在932bp处出现条带，则为疑似阳性样品，此时需按GB4789.40进行确证，样品的PCR产物电泳后在932bp处未出现条带，判定25g样品中未检出阪崎肠杆菌。4培养基和试剂A.1.1成分10.0g5.0g1.5g9.0g水1000mLA.1.2制法A.2改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万A.2.1改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨（mLSTA.2.1.1成分34.0g20.0g5.0g2.75g2.75g0.1g水1000mLA.2.1.2制法加热搅拌至溶解，调节至pH6.8±0.2。分装每管10mL，121℃高压灭菌15min。A.2.2万古霉素溶液A.2.2.1成分万古霉素10.0mgA.2.2.2制法10.0mg万古霉素溶解于10.0mL水中，过滤除菌。万古霉素溶液可以在0℃~5℃保存15d。5A.2.3改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-A.3.1成分242.0g37.2g57.1mL942.9mLA.3.2制法调节至pH8.3，定容至1L后，室温保存。使用时稀释50倍即为A.4.1成分0.5g0.5g0.5mol/L乙二胺四乙酸（EDTA，pH8.0）0.06mL360mL640mLA.4.2制法0.5mol/LEDTA（pH8.0）溶于500mL灭菌水中，加入溴酚蓝和二甲苯氰FF溶解，与甘油混合，定容至1000mL，分装后4℃保存。A.5.1成分叠氮溴化乙锭5mg灭菌水25.0mLA.5.2制法5mg叠氮溴化乙锭溶于5mL

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