饲料化验员检测方法手册-14版-7

常规项目检测指导书质量监控中心PAGE2PAGE1常规方法检测指导书饲料常规检测方法指导书(内部资料)质量安全检测中心编制2017-5-31

目录一饲料中水分和其他挥发性物质含量的测定 4二饲料中粗灰分的测定 7三饲料中粗蛋白的测定 8四饲料中钙的测定 12五饲料中水溶性氯化物的测定 15六饲料中粗脂肪的测定 17七饲料中粗纤维的含量测定 18八中性洗涤纤维的测定 20九饲用玉米脂肪酸值的测定 22十乳清粉中乳糖的测定 错误！未定义书签。十一饲料中磷含量的检测 23十二饲料中磷酸氢钙含量的检测 25十三磷酸氢钙中总磷、水溶性磷、枸溶性磷含量的检测 27十四磷酸氢钙中总钙的测定 30十五石粉中钙与镁的测定 31十六油脂检测 33十七挥发性盐基氮的测定 40十八大豆制品中尿素酶活性的两种快速检测法 42酚红法 42pH-增值法 43十九KOH溶解度的测定方法 44二十颗粒饲料中淀粉糊化度的测定方法 45二十一混合均匀度的测定 47二十二DDGS中水溶性物质含量的测定 50二十三沸石粉吸氨值的测定 51二十四新陈小麦对比方法 51二十五黄曲霉毒素测定 53二十六赤酶烯酮毒素测定 57二十七DON毒素测定 62二十八T-2毒素测定 66二十九赭曲霉毒素测定 70三十伏马毒素测定 75三十一饲料中真蛋白的测定 79三十二面粉中湿面筋的测定 80三十三鱼粉的测定 82三十四锅炉水的测定 84三十五滴定分析（容量分析）用标准溶液的制备 79三十六试验方法中所用制剂及制品的制备 96附表：市售酸碱试剂的浓度及比重 99乳糖测定附表 99附录：安全操作规程 109一饲料中水分和其他挥发性物质含量的测定1适用范围本方法适用于动物饲料，但以下情况除外：1.1奶制品；1.2矿物质；1.3含有相当数量的奶制品和矿物质的混合物，如代乳品；1.4含有保湿剂（如丙二醇）的动物饲料；1.5下列单一动物饲料：1.5.1动植物油脂；1.5.2油料籽实；1.5.3油料籽实饼粕；1.5.4谷物，不包括玉米及谷类产品；1.5.5玉米。2原理根据样品性质的不同，在特定条件下对样品进行干燥所损失的质量在试样中所占的比例。3仪器设备3.1分析天平：感量1mg。3.2称量瓶：由耐腐蚀金属或玻璃制成，带盖。其表面积能使样品铺开约0.3g/cm2。

3.3电热鼓风干燥箱：温度可控制在103℃±2℃。3.4干燥器：具有干燥剂。3.5电热真空干燥箱：温度可控制在80℃±2℃，真空度可达13kPa。应备有通入干燥空气导入装置或以氧化钙（CaO）为干燥剂的装置。（20个样品需300g氧化钙）。4测定步骤4.1试样准备将称量瓶放入103℃干燥箱中干燥30min±1min后取出，放在干燥器中冷却至室温。称量其质量，准确至1mg。4.2配合饲料、浓缩饲料、饲料原料的水分测定称取2-3g（精确到0.0002g）试样于称量瓶中，准确至1mg，并摊匀（样品铺盖在称量瓶底的厚度要低于4mm）。将称量瓶盖放在下面或边上与称量瓶一同放入105℃干燥箱中。当干燥箱温度达103℃后，干燥4h±0.1h。将盖盖上，从干燥箱中取出，在干燥器中冷却至室温。称量，准确至1mg。4.3油脂、糖蜜（含脂肪量高或者含糖量高的原料）的水分测定4.3.1真空干燥法称取2g样品（精确到0.0002g）与称量瓶中。将称量瓶盖放在下面或边上与称量瓶一同放入80℃的真空干燥箱中，减压至13kPa以下。通入干燥空气或放置干燥剂干燥试样。在放置干燥剂的情况下，当达到设定的压力后断开真空泵。在干燥过程中保持所设定的压力。当干燥箱温度达到80℃后，加热4h±0.1h。小心地将干燥箱恢复至常压。打开干燥箱，立即将称量瓶盖盖上，从干燥箱中取出，放入干燥器中冷却至室温称量（精确到0.0002g）。将试样再次放入80℃的真空干燥箱中干燥30min±1min，直至连续两次干燥质量变化之差小于其质量的0.2％。4.3.2快速法（适合于油脂）称取1-2g（精确到0.0002g）试样于称量瓶中，准确至1mg，并摊匀（样品铺盖在称量瓶底的厚度要低于4mm）。将称量瓶盖放在下面或边上与称量瓶一同放入103℃干燥箱中。当干燥箱温度达103℃后，干燥75min。将盖盖上，从干燥箱中取出，在干燥器中冷却至室温。称量，准确至1mg。4.4测定次数同一试样进行两个平行测定。5测定结果的计算和表述数值以％计，按式（1）计算：……………(1)式中：m0——称量瓶（包括盖）的质量，如使用砂和玻璃棒，也包括砂和玻璃棒的质量，单位为克（g）；m1——称量瓶（包括盖）和干燥后试样的质量，单位为克（g）m2——试样的质量，单位为克（g）。6重复性两个平行样的测定值相差不得超过0.2%。否则重做。7注意事项7.1称量时要保证称量皿冷却至室温，防止称量误差并损害天平。7.2从烘箱中拿称量皿时要戴厚棉手套，防止烫伤。7.3每次实验完成后应马上将称样皿清洗干净。放在烘箱中烘干，置于干燥器内保存，待用。7.4称量的量为距称量皿底面积1mm的高度（铺满瓶底）为宜，约2—3g，据测定样品的容重不同样品要铺匀。7.5粉碎后的玉米在130±2℃烘箱内烘4h冷却后称重（GB∕T10362—89），测的玉米水份为标准用以较正水份测定仪。7.6快速法测定水分：130±2℃40min8结果准确度的保证8.1天平必须经过校正。8.2控温要准，烘箱温度要以温度计的温度为准。8.3快速法必须以国标法进行比对，结果在允许偏差之内时方可使用。8.4玻璃干燥器中的硅胶需要经常更换，使之保持为蓝色。8.5统一在鼓风状态下，置于烘箱内温度计周围烘网上，间隙均匀；利于散热。烘箱里不能放大量有碍箱内空气流动的物品。8.6称取样时戴手套。8.7称量瓶要洗干净，放入烘箱时要敞开盖，离开烘箱立即用匹配的称量皿盖盖住。8.8称样前要混合均匀，以确保平行样分析结果在国标允许的0.2%的范围内。二饲料中粗灰分的测定1适用范围本方法适用于动物饲料中粗灰分的测定。2原理试样中的有机质经灼烧分解，对所得的灰分称量。3仪器与设备3.1实验室用样品粉碎机或研钵；3.2高温炉：电加热，可控制温度，带高温计。在550℃时温差不超过20℃；3.3分析天平感量为0.0001g；3.4干燥箱：温度控制在（103±2）℃；3.5电炉3.6坩埚，可耐600℃以上高温；3.7干燥器：盛有有效的干燥剂。4测定步骤将坩埚放入高温炉中，于550℃下灼烧至少30min。移入干燥器冷却至室温，称量（精确至0.0002g）。称取约2-3g试样（精确至0.0002g）于坩埚中。将盛有试样的坩埚放在电炉上小心加热炭化至无烟，转入预先加热到550℃的高温炉中灼烧4h，至样品呈白色。灼烧完毕，待炉温降至200℃以下，移入干燥器内冷却，称重，准确至0.001g。对同一试样取两份试料进行平行测定。5分析结果计算和表述粗灰分含量（％）按式（2）计算：……………………（2）式中：m0──为恒质空坩埚质量，g；m1──为坩埚加试料的质量，g；m2──为灰化后坩埚加灰分的质量，g。所得结果应表示至0.01%。6重复性和再现性粗灰分含量在5%以上，允许相对偏差为1%；粗灰分含量在5%以下，允许相对偏差为5%。7注意事项7.1马弗炉高温，放取坩埚时用坩埚钳。7.2样品碳化时要在通风橱中进行。7.3含糖量较高的样品灰化时要加几滴豆油或棕榈油，防止样品膨胀溢出坩埚。7.4试样放置时，要放置到温度感应器覆盖的区域。7.5茂福炉关闭冷却时，炉门应轻轻打开，角度小于30度，逐渐让炉温冷却到200℃下，再取样。8准确度的保证8.1保证整个实验过程中的仪器准确度。马弗炉的温度要保证550℃±20℃之间8.2若灼烧后发现坩埚内仍有碳粒，冷却后将坩埚内样品小心用蒸馏水或双氧水润湿，在干燥箱中干燥蒸发至干，再放置高温炉内灼烧1h。冷却后，称重。8.3每次做完实验坩埚洗净后，先放入烘箱中将水分烘干，再放入550℃的马弗炉灼烧30分钟，放入干燥器内保存，以备待用。坩埚长久未用应重新恒重。8.4干燥器内干燥剂要经常更换、烘干。8.5试样必须先碳化，不能直接放入高温马弗炉中。三饲料中粗蛋白的测定1适用范围本方法适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料中粗蛋白含量的测定。2原理凯氏定氮法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用浓硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。3试剂3.1硫酸（GB625-77）：化学纯3.2硫酸铜（GB665-78）：化学纯3.3硫酸钾（HG3-920-76）或硫酸钠（HG3-908-76）：化学纯3.4氢氧化钠（GB628-78）：分析纯，40g溶于100ml水中配成40%水溶液3.5硼酸（GB628-78）：分析纯，20g溶于100ml水中配成2%溶液3.6混合指示剂：甲基红（HG3-958-76）0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿（HG3-1200-79）0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合3.70.1mol/l盐酸标准溶液3.8硫酸铵（GB1396-28）：分析纯3.9蔗糖（HG3-1001-76）：分析纯4仪器设备4.1实验室用样品粉碎机或研钵；4.2分样筛：孔径0.45mm(40目)；4.3分析天平：感量0.0001g；4.4消煮炉或电炉；4.5滴定管：酸式，10、25mL；4.6凯氏烧瓶：250mL；4.7凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式；4.8锥形瓶：150、250mL；4.9容量瓶：100mL；4.10消煮管：250mL；4.11定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动，全自动蛋白质测定仪。5分析步骤5.1半微量法5.1.1试样的消煮称取试样0.2-0.3g（玉米、小麦称0.7-1.0g；豆粕称0.4g；鱼粉羽毛粉称0.2g；精确至0.0002g），放入凯氏烧瓶中，加入6.4g(硒：硫酸铜：无水硫酸钠=0.02:1:15混合研磨至均匀)混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360～410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热40min，消化全过程至少2h。5.1.2氨的蒸馏（半微量法）将试样消煮液冷却，加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液。将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10～20mL注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加氢氧化钠密封，防止漏气。蒸馏4min降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。5.1.3滴定用上述蒸馏法蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。5.2推荐法(全量法)5.2.1试样的消煮称取试样0.2～0.5g（玉米、小麦称0.7-1.0g；豆粕称0.4g；鱼粉羽毛粉称0.3g；精确至0.0002g），放入消化管中，加2片消化片（硒粉和硫酸钾混合物市场上有成品）或6.4g混合催化剂(硒：硫酸铜：无水硫酸钠=0.02:1:15混合研磨至均匀)，12--15mL硫酸，于420-450℃下在消化炉上消化2.5h，取出冷却后加入20mL蒸馏水，摇匀。5.2.2氨的蒸馏将带消化液的消化管插在蒸馏装置上，以25mL2%硼酸为吸收液，加入2滴混合指示剂，蒸馏装置的冷凝管末端要浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消化管中加入氢氧化钠溶液进行蒸馏。吸收液体积达到150mL时，降下锥形瓶，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内。5.2.3滴定用0.1mol/L的标准盐酸溶液滴定吸收液，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。6空白测定称取蔗糖0.5g，代替试样，进行空白测定，消耗0.1mol/L盐酸标准溶液的体积不得超过0.2mL。7分析结果的计算和表述计算见下式（3）：（V2-V1）*C*0.014*6.25粗蛋白质（%）=*100…………（3）m式中：V2──滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL；V1──滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL；c──盐酸标准溶液浓度，mol/L；m──试样质量，g；0.0140──与1.00mL盐酸标准液[c(HCl)=1.000mol/L]相当的、以克表示的氮的质量。6.25──氮换算成蛋白质的平均系数。8重复性当粗蛋白质含量在25%以上时，允许相对偏差为1%。当粗蛋白质含量在10%～25%之间时，允许相对偏差为2%。当粗蛋白质含量在10%以下时，允许相对偏差为3%。9注意事项9.1半微量法测定注意事项9.1.1消化时凯氏烧瓶应置于通风橱处进行。9.1.2蒸馏时蒸馏烧瓶中要加入几颗玻璃珠防止爆沸。9.1.3蒸馏时蒸馏烧瓶的口上要插入一根玻璃管，玻璃管的下端要伸入蒸馏水的液面以下。9.1.4加碱时完要立即用玻璃塞塞好，且在入口处加氢氧化钠密封。9.1.5半微量蒸馏装置在使用之前要检查是否漏气。9.2推荐法注意事项9.2.1消化要在通风橱中进行。9.2.2定氮仪不能漏气。10结果准确度的保证和评价10.1结果准确度的保证10.1.1如果是新的可调节电炉可适当调节其温度，消化时间据实际情况而定。10.1.2每次做空白试验较正装置。10.1.3定期做测定回收率实验具体方法：精确称取0.2g硫酸铵，代替试样，选半微量法或推荐法“氨的蒸馏”中的步骤进行操作，测得硫酸铵含氮量为21.19±0.2%，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。10.1.4蒸馏后的液体不能放置太长时间，要及时滴定。10.1.5消化温度应控制在420℃～450℃内。消化器控温器应良好，电阻丝应使用专用配套电阻丝，拉伸应均匀，使炉内温度均匀。10.1.6蒸馏完毕应先取下接收瓶，然后在关闭电源，以免酸液倒流。10.1.7每天的粗蛋白测定必须至少一组做平行样。10.2准确度的评价10.2.1测定回收率加硫酸铵检测回收率，如果合格，说明蒸馏装置不漏气和盐酸标准溶液溶液标定正确。具体方法见10.1.3定期测回收率实验。用已知含氮量的样品标准物（如含氮量在1.30%～1.40%之间的玉米粉）用半微量法或推荐法测定其含氮量，和标准物质含氮量进行比对，要求测定结果在要求范围之内。此方法可以评价整个过程的准确度。10.2.2实验室比对和国家认证的实验进行同样品实验数据比对。此方法可以评价整个过程的准确度。分公司对饲料中粗蛋白数据可疑样品应送集团质检中心复测。四饲料中钙的测定原理高温将试样中有机物破坏，钙变成溶于水的离子，用三乙醇胺、乙二胺、盐酸羟胺和淀粉溶液消除干扰离子的影响，在碱性溶液中以钙黄绿素为指示剂，用乙二胺四乙酸二钠标准溶液络合滴定钙，可快速测定钙的含量。2试剂和溶液2.1盐酸羟铵2.2盐酸：1+1（v1+v2）2.3浓硝酸2.4氢氧化钾溶液：200g/l2.5三乙醇胺水溶液：1+1（v1+v2）2.6乙二胺水溶液：1+1（v1+v2）2.7淀粉溶液：10g/l，称取1g可溶性淀粉放入200ml烧杯中，加5ml水润湿，加95ml沸水搅拌，煮沸，冷却备用2.8孔雀石绿水溶液：1g/L2.9钙黄绿素-甲基百里香酚蓝指示剂：0.1g钙黄绿素与0.13g甲基百里香酚蓝，5g氯化钾研细，贮于磨口瓶中备用2.10钙红指示剂：0.1g钙羧酸盐+5g硫酸钾或氯化钾或氯化钠或硫酸钠2.11基准氧化锌标准溶液2.12乙二胺四乙酸钠标准滴定溶液（EDTA），C=0.01mol/L盐酸羟胺；3仪器和设备3.1实验室用样品粉碎机或研钵；3.2分样筛：孔径0.42mm（40目）；3.3分析天平：感量0.0001g；3.4高温炉：电加热，可控温度在（550±20）℃；3.5坩埚：瓷质；3.6容量瓶：100mL；3.7滴定管：酸式，25mL或50mL；3.8玻璃漏斗：6cm直径；3.9定量滤纸：中速，7cm～9cm；3.10移液管：10，20mL；3.11烧杯：200mL；3.12凯氏烧瓶：250mL或500mL；4测定步骤试样分解干法（推荐法）用测定灰分后的试样加入1:1盐酸溶液10ml及浓硝酸数6滴，小心煮沸，冷却，转入100ml容量瓶中，冷却，定容，摇匀为试样分解液.5测定方法5.1钙黄绿素法：准确移取试样的分解液10ml,加水50ml，加淀粉溶液10ml,三乙醇胺2mL、乙二胺1ml、孔雀石绿1滴，滴加氢氧化钾溶液至无色，再过量加10ml左右，加0.1g盐酸羟胺（每加一种试剂都必须摇匀），加钙黄绿素少许，在黑色背景下立即用EDTA标准溶液滴定至绿色荧光消失呈现紫红色为滴定终点。同时做空白试验。5.2钙红法：准确移取试样的分解液10ml，加水50ml，三乙醇胺5ml，孔雀石绿1滴，滴加氢氧化钾溶液至无色，再过量加5-10ml左右，加0.1g盐酸羟胺（每加一种试剂都必须边加边摇），溶解后钙红指示剂少许，立即用EDTA标准溶液滴定至粉红色消失。同时做空白试验。40.08*V*C结果计算：Ca%=m式中:C—EDTA标准溶液的浓度V消耗EDTA标液的体积m试样质量6允许差含钙量在10%以上，允许相对偏差2%；含钙量在5%～10%时，允许相对偏差3%；含钙量1%～5%时，允许相对偏差5%；含钙量1%以下，允许相对偏差10%。7注意事项7.1三乙醇胺、乙二胺、氢氧化钾能腐蚀皮肤刺激眼睛，使用的时候要避免接触皮肤，如果接触皮肤则应该先用湿抹布擦干净，然后在用大量的水冲洗接触处。7.2煮沸时必须要在通风橱处进行。8结果准确度的保证和评价8.1结果准确度的保证8.1.1掩蔽剂（如乙二胺、三乙醇胺等）是在一定条件下才能起到它的掩蔽作用，要按固定的操作流程顺序进行操作，三乙醇胺掩蔽Fe3+；乙二胺掩蔽Cu2+、Mn3+、Zn2+。8.1.2配制备用的淀粉溶液不可超过一周，室温高时淀粉溶液呈混浊或有异味时不可使用，需重新配制。可以再配置时每升淀粉溶液加3g硼酸。8.1.3定期配置一次钙标液对EDTA标定。8.1.4钙黄绿素指示剂加入要适量。8.1.5本实验所有仪器都不能用清洗粉洗刷。8.1.6络合反应速度慢，所以滴定时要慢慢滴用力摇，以防滴定结果偏高。8.1.7加入钙黄绿素指示剂或钙红指示剂后要立即滴定。8.2标准溶液的配置和标定8.2.1C=0.01g/mlEDTA标准滴定溶液的配置：称取3.8gEDTA二钠放入200ml烧杯中加200ml水，加热溶解冷却后用水转移到1000ml容量瓶中，稀释至刻度。8.2.2氧化锌标准溶液的配置：准确称取800℃灼烧至恒重的基准氧化锌0.2g，加入20%盐酸溶解，定容至250ml,摇匀。8.2.3EDTA标准溶液的标定：准确吸取25ml基准氧化锌溶液，加入70ml水，2滴0.1%甲基红指示剂，用10%氨水调节PH值到7-8，加入10mlPH=10的氨-氯化铵缓冲液，5滴0.5%铬黑T指示剂，用配置好的EDTA标液滴定至紫色变为蓝色，同时做空白试验。8.2.4计算m*(25/250)CEDTA=*1000（V-V0）*MM氧化锌的物质量m氧化锌质量V消耗EDTA标准溶液的体积V0—空白消耗的EDTA标准溶液的体积五饲料中水溶性氯化物的测定1适用范围本方法适用于各种配合饲料、浓缩饲料和单一饲料，以及部分原料（乳清粉，鱼粉等）。2方法原理样品经灰化完全后用水洗出氯离子（或经稀释后），取部分滤液用硝酸银溶液直接滴定，用铬酸钾作指示剂。反应式为：CL-+Ag+→AgCl↓（白色沉淀）2Ag+CrO42-→Ag2CrO4↓（砖红色沉淀）3试剂3.110%铬酸钾指示剂：称取10g铬酸钾溶于100ml3.2氯化钠（GB12530-77）：基准物于550℃灼烧1h，干燥器中冷却保存，准确称取1.1690g溶解，用水稀释至1000ml，此溶液为0.02mol/l氯化钠标准溶液；3.30.02mol/l硝酸银标准溶液：取硝酸银（分析纯）3.4g，溶于1000ml水中。贮存于棕色瓶中，即为0.02mol/l硝酸银溶液。标定：准确取氯化钠标准溶液10ml，于250ml锥形瓶中，加入50ml水及10滴铬酸钾指示剂，用硝酸银标准溶液滴定，出现橙红色，且30秒不褪色为终点M*25硝酸银标准溶液的体积浓度N==M×0.4277/VV*0.05845*1000式中：M-氯化钠的重量；V-消耗硝酸银标准溶液的体积；0.05845为与1ml硝酸银标准溶液相当的氯化钠克数。5测定称2-5g左右样品于50ml瓷质坩埚中（精确至0.0001g,）在电炉上小心炭化至无烟，再放入马弗炉，550℃灼烧3h，取出冷却后用水稀释至100ml容量瓶中，摇匀备用。精确移取上清液10ml(必要时过滤后再移取上清液),加蒸馏水50ml(用50ml的容量瓶量取),加10%铬酸钾指示剂1ml,用硝酸银溶液滴定至溶液呈砖红色,且30s不褪色为终点，同时做空白试验。6结果计算C*V*58.45NaCl%=M式中：V——消耗硝酸银溶液的体积mlC——硝酸银溶液的浓度58.45——与1mol硝酸银相当的氯化钠的克数M——试样重g7重复性每个样品取2个平行样进行测定，以算术平均值为分析结果。氯含量在3%以下，允许绝对差0.2%，含量在3%以上，允许相对偏差3%8注意事项8.1本实验用到的溶液大部分有毒，需要戴胶皮手套操作。废液需要倒入指定的废液回收池中。8.2加入硝酸银后如果沉淀很难凝聚，必须要加入一些有机试剂（如硝基苯、1.2-二氯乙烷、正己烷）1～5mL用力震荡。8.3硝酸银溶液容易和氯离子产生沉淀，用来滴定硝酸银的滴定管需要先用蒸馏水洗涤，然后再用自来水冲洗，最后用蒸馏水洗涤。8.4硝酸银见光易分解需要保存在棕色瓶中。8.5硝酸银基准试剂需要放在干燥器中干燥保存。8.6滴定时应剧烈摇动,使被吸附氯离子完全释出,以免出现判定终点过早现象。六饲料中粗脂肪的测定1适用范围配合饲料和单一饲料(玉米酒精糟、玉米蛋白饲料、花生饼、磷脂粉等)。2方法原理适量试样通过索氏脂肪提取器中石油醚抽提，称取剩余物的质量，用试样的质量减剩余物的质量既得粗脂肪值，除脂肪外还带有有机酸、磷脂、脂溶性维生素、叶绿素等，因而测定结果称粗脂肪或醚提取物。3试剂石油醚，分析纯，沸程60℃～90℃，冬季选择沸程30-60℃。4仪器设备4.1索氏脂肪提取器：带冷凝管的250ml或500ml4.2恒温水浴锅4.3电热恒温鼓风干燥箱4.4干燥器4.5滤纸：定量中速滤纸4.6称量瓶：70*35mm5分析步骤称取2--3克样品包入滤纸中，放入烘箱在130±2℃烘40min，冷却称重，。然后放入提取器中，装置安排妥当后注入石油醚至吸虹高度上的2至3厘米处为宜，水浴加热，提取约5--7小时（保证约10—12次/小时回流次数），取出滤纸包，置于通风橱中，待石油醚挥发完后置于130±2℃烘箱烘40min，干燥器中冷却30min，称重，恒重至相差0.0001g。6计算W3-W2粗脂肪（%）=×100W1试中：w1——样品质量w2——已恒重的滤纸加样品重w3——浸提后已恒重的滤纸加样品重7重复性每个试样取二个平行样进行测定，取其平均值；粗脂肪含量在10%以上，允许相对偏差为3%；粗脂肪含量在10%以下，允许相对偏差为5%。8注意事项8.1在包滤纸包时最好带手套操作，手上汗油渍会附于烘干的滤纸包上，影响结果。8.2滤纸包易吸潮,应快速称量，干燥后应放在称量瓶中冷却,前后冷却条件要一致。8.3保证约10—12次/小时回流次数,抽提时间不低于5小时。如脂肪≥16，则将抽提时间延长1h。8.4如抽提样品数量多,应适当延长抽提时间。8.5水浴锅切勿缺水。8.7石油醚抽提3-4次后，应更换一次试剂，废试剂集中回收。8.8切勿将含有石油醚残留的样品直接置于干燥箱中干燥，干燥时称量瓶盖要你打开。七饲料中粗纤维的含量测定1适用范围本方法适用于粗纤维含量大于10g/kg的饲料。本方法还适用于谷物和豆类植物。2原理用固定量的酸和碱，在特定条件下消煮样品，再用醚、乙醇除去醚溶物，经高温灼烧扣除矿物质的量，所余量为粗纤维。它不是一个确切的化学实体，只是在公认强制规定的条件下，测出的概略成分，其中以纤维素为主，还有少量半纤维素和木质素。3试剂3.1硫酸溶液：0.128±0.005mol/l,移取浓硫酸7.1ml,定容至1000ml容量瓶中。3.2氢氧化钠溶液：0.313±0.005mol/l,准确称取13.24g氢氧化钠溶于少量水中.，用水稀释至1000ml容量瓶中。3.395%乙醇4仪器设备4.1马福炉4.2粗纤维测定仪4.3古氏坩埚5分析步骤5.1在已编号的坩埚中称取脱脂样品1-1.5g（脂肪含量低于5%不用脱脂，5%以上必须脱脂）准确至0.0001g。5.2接通电源、冷凝水、开启主机电源（自来水尽量开足以保证冷凝）5.3将坩埚移入仪器温室中（下部放入坩埚底座中心，上部对准消煮管下的保护套内孔，压下手柄并锁紧，在一次检查坩埚位置是否准确）将下阀按钮全部关闭，拉出加热器手柄。5.4用漏斗在消煮管内加入少量煮沸的硫酸，打开吸开关，逐个开下阀，抽尽溶液，关闭吸开关和下阀，将煮沸的硫酸加入消煮管内（150ml）在加入3-4滴正辛醇，打开定时器，同时按需要打开加热器开关，调节选位旋钮，可观察单个加热器电压，现将电压调至最高（220V），待消煮液微沸，将电压逐个下调至溶液微沸（以样品无沉淀为准），开始计时30min，（如发现试样粘壁可补加消煮液）。5.5打开吸开关，在逐个打开下阀将消煮液快速抽掉，并用煮沸的蒸馏水洗涤残渣至中性（大约3次），在抽滤中入发现坩埚堵塞抽滤过慢，可用吹开关用气流反冲，再继续抽滤。5.6按步骤4进行碱消煮5.7按步骤5抽洗碱消煮液，同时将加热器手柄推进。5.8关闭下阀，在消煮管内加入95%乙醇约20ml，冲洗3次。5.9压下手柄，拉出锁紧勾子缓缓上升，使其复位，取出坩埚，待乙醇挥发完后移入干燥箱中，130℃，2h，冷却，称重。5.10将坩埚放入高温炉中，550℃灼烧30min，冷却，称重。6测定结果的计算和表述粗纤维(%)=(m1-m2)/m*100%式中:m1-130℃烘干后坩埚及试样残渣,滤纸重量.gm2-550℃灼热后坩埚及试样残渣重量gm-试样(未脱脂)重量g7注意事项7.1粗纤维里面含有的纤维素，半纤维和木质素。注意木质素不属于糖类，木质素是苯丙基衍生物，很难被消解。7.2脂肪高于5%时，前处理必须脱脂。脂肪低于5%可以不用脱脂。8仪器维护8.1仪器应保持洁净，试验完毕后应立即用软布擦拭干净。8.2因各地水质不同，有的水硬度较大，致使冷凝管内发黄变绿，如有此现象发生，应配置浓度大的柠檬酸溶液通入冷凝管中清洗，再用自来水冲洗干净。八中性洗涤纤维的测定1适用范围单一饲料、配合饲料，本方法不适合无机盐类饲料添加剂。2原理应用热的中性洗涤剂处理饲料试样，使植物性饲料中大部分细胞内容物溶解于洗涤剂中，称之为中性洗涤剂溶解物(NDS)，其中包括脂肪、糖、淀粉和蛋白；剩余的不溶解残渣主要是细胞壁组分，为中性洗涤纤维(NDF)，其中包括纤维素、半纤维素、木质素、硅酸盐和很少量的蛋白质3试剂3.1正辛醇；3.2无水亚硫酸钠；3.3中性洗涤剂称取18.61g乙胺二四乙酸二钠和6.81g四硼酸钠同放入1000mL烧杯中，加少量约450mL水加热熔解后，再加入30g十二烷基硫酸钠和10mL乙二醇乙醚。称取4.65g无水磷酸氢二钠，置于另一烧杯中，加少量水，微微加热溶解后倾入第一个烧杯中，稀释至1000mL。此溶液pH在6.9～7.0（一般不需调整)；3.4磷酸盐缓冲液：0.1mol/L的磷酸氢二钠和0.1mol/L的磷酸二氢钠溶液各500mL混匀；3.5α—淀粉酶溶液：12.5mgα-淀粉酶溶液，用磷酸盐缓冲溶液稀释至50mL；3.6无水亚硫酸钠；3.7无水乙醇。4仪器与设备消煮装置（接有冷凝器的300mL的锥形瓶和电炉）；玻璃砂芯滤器（滤板平均孔径40～90μm）；抽滤装置。5操作步骤5.1预处理如果样品脂肪含量超过10%则要先用石油醚除去脂肪。除去脂肪的具体方法参照粗纤维的测定中。

5.2测定准确称取试样1.0000～2.0000g(过40目)，于300mL的锥形瓶中，加入中性洗涤剂溶液100mL、0.5g无水亚硫酸钠和2滴正辛醇，安装好冷凝回流装置，并用电炉开始加热，5～10min之内煮沸，从沸腾开始计时，保持微沸1h。把洁净的玻璃砂芯坩埚置于105℃干燥4h，放入干燥器中冷却至室温，称重。将锥形瓶内全部内容物移入玻璃砂芯坩埚，抽滤至干，分别用不少于30mL的沸水分3～5次洗涤残渣①。加入约25mL无水乙醇洗涤残渣，抽干滤器，并洗净滤器底部。滤器置于105℃烘箱中干燥4h。移入干燥器中冷却称重。6结果计算式中：m0——玻璃过滤器的质量m1——玻璃过滤器及残渣的质量m——样品质量7注意事项7.1测定高蛋白饲料中中型洗涤纤维时，由于中性洗涤剂对蛋白质的提取效率不高，因而残留道德蛋白质混杂在中型洗涤纤维中，使测定值偏高。7.2淀粉对中性洗涤纤维也有一定干扰，因此测定的中性洗涤纤维只为参考。如果想排除淀粉的干扰，则需要在文中①处加如下列步骤：加入5mLα—淀粉酶溶液，以置换残渣中的水，然后塞住玻璃过滤器的底部，加入约20mL淀粉酶溶液和几滴甲苯，置于37℃培养箱中保温1h。取出滤器，取下底部的塞子，抽滤，并用不少于500mL热水分数次洗涤酶液。备注：玉米、小麦测定中性洗涤纤维时必须加入α-淀粉酶九饲用玉米脂肪酸值的测定1使用范围本方法适用东北烘干玉米脂肪酸值的测定。2试剂1.1KOH乙醇标准溶液c(KOH)=0.05mol/L；取KOH溶液[c(KOH)=0.1mol/L]100mL，用乙醇（95%）稀释到1升，然后按GB601定标。1.2酚酞指示剂：2g/L乙醇溶液；1.3无水乙醇。3仪器实验室常用仪器4步骤将平均样品按四分法制得约80g样品粉碎，过0.45mm孔径筛（40目），立即称取10g样品（精确到0.01g），于150mL具塞三角瓶内，加50mL无水乙醇，加塞振动10分钟，过滤，并用无水乙醇洗3次，每次15mL，然后加酚酞3滴，用0.05mol/LKOH乙醇标准溶液滴定到溶液呈微红色，同时取90mL乙醇作空白。5计算脂肪酸值（mgKOH/100g）按下式计算式中：V——-样品耗碱标准溶液的体积，mLV0——空白耗碱标准溶液的体积，mLc——KOH标准滴定溶液的浓度，mol/Lm——-样品质量，g6注意事项6.1玉米必须现粉现用，不可放置在空气中时间过长。6.2每次做次试验必须要做空白。6.3乙醇易挥发，氢氧化钾乙醇溶液需要用橡胶塞密封保存，每隔一月重新标定一次。十饲料中总磷的检测1适用范围1.1本方法规定了用钒钼黄显色光度法测定饲料中总磷量的方法。本方法适用于饲料原料及饲料产品中磷的测定。1.2本方法不适用于磷酸盐{如磷酸氢钙（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），磷酸二氢钙}中各种磷的测定。2原理将试样中的有机物破坏，使磷元素游离出来，在酸性溶液中，用钒钼酸铵处理，生成黄色的(NH4)3PO4NH4VO3·16MoO3络合物，在波长400nm下进行比色测定。3试剂3.1盐酸溶液：1＋1；3.2浓硝酸；3.3钒钼酸铵显色剂：称取偏钒酸铵1.25g，加水200mL加热溶解，冷却后再加入250mL硝酸，另称取钼酸铵25g，加水400mL加热溶解，在冷却的条件下，将两种溶液混合，用水定容至1000mL。此溶液应避光保存，若生成沉淀，则不能继续使用；3.450ug/l磷标准液：将磷酸二氢钾在105℃干燥1h，在干燥器中冷却后称取0.2195g（精确至0.0002g）溶解于水，定量转入1000mL容量瓶中，加硝酸3mL，用水稀释至刻度，摇匀。4仪器和设备4.1实验室用样品粉碎机或研钵；4.2分样筛：孔径0.45mm(40目)；4.3分析天平：感量0.0001g；4.4分光光度计4.5比色皿：1cm；4.6马福炉4.7瓷坩埚：50mL；4.8容量瓶：50、100、1000mL；4.9移液管：1.0、2.0、3.0、5.0、10mL；4.10可调温电炉：1000W。5测定步骤5.1试样制备取代表性样品，经四分法制得试样250g，粉碎全过0.42mm(40目)筛，装入样品瓶内。5.2工作曲线的绘制准确移取0.0﹑1.0﹑2.0﹑5.0﹑10.0﹑15.0ml磷标准溶液于50ml的容量瓶中，各加钒钼酸铵10ml，定容，常温下放10min以上，以0ml溶液为参比，用1cm比色皿，在400nm波长下，测吸光度。以磷为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线或做出回归方程。5.3试样的测定准确移取试样分解液1ml于50ml容量瓶中，加钒钼酸铵10ml，定容，常温下放置10min以上，用1cm比色皿在400nm波长下测定试样分解液的吸光度，在工作曲线上查得试样的磷含量。6测定结果的计算及表述磷%=标准曲线查得含磷量/试样质量×移取试样分解液体积×100 或代入磷标准曲线方程Y=1/KX+B/KY为测的样品的吸光度，K、B是通过磷标液计算出的7允许差含磷量0.5%以下，允许相对偏差10%；含磷量0.5%以上，允许相对偏差3%。8注意事项8.1配置一次矾钼酸铵做一次磷标准曲线方程，以保证结果的准确性，磷标准曲影响其结果的准确性。8.2炭化时应在通风柜内操作。8.3转移至容量瓶时应小心，要保证试样毫无损失。吸光度应控制在0.2～0.7内，8.4比色色皿的清洗方法：乙醚和无水乙醇（1:1）清洗，然后用水洗净8.5移液管的精度及正确使用对结果的影响极大，务必注意。8.6干法灰化法不适用含磷酸二氢钙{Ca(H2PO4)2}的饲料，水产料、含磷酸二氢钙{Ca(H2PO4)2}、磷酸氢钙（Ⅱ、Ⅲ）的饲料应用湿法消化法处理样品。8.7显色剂的配制：偏钒酸铵加硝酸不易溶解，且不能加热，应加水使偏钒酸铵溶解后再加硝酸。十二饲料中磷酸氢钙含量的检测1适用范围1.1本方法规定了用钒钼黄显色光度法测定饲料中磷酸氢钙添加量的方法。1.2本方法适用于饲料中磷酸氢钙（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）及磷酸二氢钙含量的测定。1.3本方法不适用于饲料中中总磷、植酸磷等测定。2原理将试样中的磷酸氢钙等磷酸盐有稀盐酸提取出来，经离心分离出残渣，在酸性溶液中，用钒钼酸铵处理，生成黄色的(NH4)3PO4NH4VO3·16MoO3，在波长400nm下进行比色测定。3试剂3.1盐酸溶液：c(HCl)=1mol/L取90mL浓盐酸（37%）于500mL水中。搅匀后，加水到1000mL。1＋1；3.2钒钼酸铵显色剂：称取偏钒酸铵1.25g，加水200mL加热溶解，冷却后再加入250mL硝酸，另称取钼酸铵25g，加水400mL加热溶解，在冷却的条件下，将两种溶液混合，用水定容1000mL。避光保存，若生成沉淀，则不能继续使用；3.3磷标准液：将磷酸二氢钾在105℃干燥1h，在干燥器中冷却后称取0.2195g溶解于水，定量转入1000mL容量瓶中，加硝酸3mL，用水稀释至刻度，摇匀，即为50µg/mL的磷标准液。4仪器和设备4.1实验室用样品粉碎机或研钵；4.2分样筛：孔径0.45mm(40目)；4.3分析天平：感量.0.0001g；4.4分光光度计：可在400nm下测定吸光度；4.5比色皿：1cm；4.6容量瓶：50、100mL；4.8移液管：1.0、2.0、3.0、5.0、10mL；5试样制备5.1一般样品取代表性样品，经四分法制得试样250g，粉碎全过0.42mm(40目)筛，装入样品瓶内。5.2问题样品直接取给动物饲喂的饲料250g，粉碎全过0.42mm(40目)筛，装入样品瓶内。5.3空白样品的制备按对应饲料配方的比例，将各种原料（除去磷钙外）用分析天平（千分之一）称取对应的量，并将配方中磷钙的量用等量玉米粉代替，将上述各种原料充分混合，粉碎全过0.42mm(40目)筛，空白样品至少制备50g。6测定步骤6.1样品中磷钙的提取称取空白样品（5.3）和待测样品（5.1或5.2）各3.00g（准确到0.0002g）分别放于100mL容量瓶中，同时各加70mL盐酸（3.1），室温下振荡10min±0.5min，立刻用水定容到100.00mL，再静置5min±0.5min，然后干过滤。收集滤液于干燥的三角瓶中。6.2提取液的显色与测定取空白与待测样品滤液（6.1）各5.00mL于50mL容量瓶中，加钒钼酸铵显色剂（3.2）10.00mL，室温下显色15min，用4500r/min的速度将显色液离心3min，然后以空白样品液为参比液，400nm下测定样品液的吸光度。7测定结果的计算及表述样品中磷钙的含量（以P计）%=P×100×100/(m×5×1000000)=P1/m×500式中：m待测样品的质量，g；P1由磷标准曲线（或回归方程）查的磷含量，μg。8注意事项8.1此法测定的磷为磷酸一二三钙的总和。8.2步骤6.2只能离心,不能过滤。8.3用磷酸氢钙中枸溶性磷的测定方法，测饲料中的磷钙不准，原因为：植酸铵与金属离子（铜、铁、锌、锰、钙）形成的沉淀干扰大。8.4用饲料中总磷的含量来判断磷钙是否添加足量，也不可靠，原因：0.5%的磷钙提供的磷=0.085%，已在总磷法误差内，GB/T18823-2002规定P=0.5%，P误差=±0.1%。8.5此法也可作为定性判断的方法，如果样品显色后黄色明显深于空白，则样品中加了磷钙，反之，二者颜色相近，则样品中没加磷钙。8.6每一品种都要单独做空白，不可通用，原因：配方的差异。8.7植酸酶不会干扰此法，强酸性(pH＜2)下植酸酶失活。十三磷酸氢钙中总磷、水溶性磷、枸溶性磷含量的检测1适用范围1.1本方法规定了用重量法测定磷酸氢钙中总磷的测定方法。1.2本方法适用于磷酸氢钙（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）及磷酸二氢钙中总磷、水溶性磷、枸溶性磷含量的测定。1.3本方法不适用于饲料中中总磷、植酸磷等测定。2方法原理在酸性介质中，试验溶液中的磷酸根全部与喹钼柠酮形成磷钼酸喹啉沉淀，过滤、干燥、称量，计算出磷含量。3试剂和材料3.1盐酸溶液：1+1；3.2喹钼柠酮溶液的制备A液:称取70g钼酸钠溶解于150mL水中B液:称取60g柠檬酸溶解于150mL水中和85mL硝酸中；C液:在搅拌下将A液缓慢加入B液中D液:在100mL水中加入35mL硝酸和5mL喹啉，E液：将D液倒入到C液中，摇匀，放置24h，用坩埚式过滤器过滤，再加入280mL丙酮，用水稀释至1000mL，混匀。并贮存于聚乙烯瓶中。3.3柠檬酸；3.4无水乙醇；3.5氨水；3.6中性柠檬酸铵溶液：溶解74g柠檬酸置于300mL水中，加69mL氨水，在酸度计控制下用氨水调节溶液pH值至7.0，用比重计测其相对密度为1.09（20℃），将溶液贮存于密封的瓶中备用（如果长期使用，用前需要校正其酸度）。4仪器与设备4.1电烘箱：温度能控制在180℃±2℃或250℃±10℃；4.2酸度计：分度值为0.2，配有玻璃电极和饱和甘汞电极；4.3比重计；4.4玻璃砂坩埚4﹟：孔径5~15μm。5测定步骤5.1.总磷含量的测定5.1.1试验溶液A的制备称取约1g试样（磷酸二氢钙0.8g），（准确至0.0002g），置于100mL烧杯中，加10mL盐酸溶液（3.1）和少量水，盖上表面皿，煮沸10min。冷却后移入250mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。此溶液为试验溶液A，用于磷含量、钙含量的测定。5.1.2空白溶液的制备除不加试样外，其他加入的试剂量与试验溶液的制备完全相同，并与试样同时进行同样处理。5.1.3测定用移液管准确移取20mL试验溶液A和空白溶液分别置于250mL烧杯中，加水至总体积约100mL，加入50mL喹钼柠酮溶液（3.2），盖上表面皿，于水浴中加热至杯内物温度达75℃±5℃，保温30s（在加入试剂和加热过程中，不得使用明火，不得搅拌，以免生成凝块）冷却至室温。在冷却过程中搅拌3次～4次，用预先在180℃±5℃或者250℃±10℃下烘干至恒重的玻璃砂坩埚抽滤（4.4）。先将上层清液过滤，用倾析法洗涤沉淀5次～6次，每次用水约20mL，最后将沉淀转移至玻璃砂坩埚中过滤，再用水洗涤沉淀3次～4次，将玻璃砂芯坩埚连同沉淀置于电烘箱中从温度稳定时计时，在180℃±2℃下烘45min，置于干燥器中冷却至室温，称量，精确至0.0002g。5.3枸溶性磷含量的测定步骤称取1g试样（精确至0.0002g），置于250mL容量瓶中，加100mL柠檬酸铵溶液（3.6），将容量瓶置于65℃±2℃水浴中保温1h，时常打开瓶盖，每间隔15min摇动一次，每次摇动30s，取出容量瓶后冷却至室温，用水稀释到刻度，摇匀。干过滤，弃去初始的20mL滤液，之后操作按总磷含量测定步骤进行测定并按照总磷含量计算公式进行计算。5.4.水溶性磷含量的测定称取约0.5g试样，精确至0.2mg，置于瓷（玛瑙）研钵中，加水研磨，每次加25mL水，连续研磨4次，水溶液全部移取到250mL容量瓶中，摇动30min（2次/s），用水稀释至刻度，摇匀。干过滤，弃去初始20mL滤液，用移液管移取20mL滤液置于250mL烧杯中，之后按照按总磷含量测定步骤进行测定并按照总磷含量计算公式进行计算。6磷、枸溶性磷、水溶性磷含量分析结果的表述以质量分数表示总磷（P总、P枸、P水）含量（X1）的计算：式中：m1──试验溶液生成磷钼酸喹啉沉淀的质量，g；m2──空白溶液生成磷钼酸喹啉沉淀的质量，g；m──试样的质量，g；0.01400──磷钼酸喹啉换算成磷的系数。允许差取平行测定结果的算术平均值为测定结果，平行测定结果的绝对差值不大。7测定时的注意事项7.1玻璃砂坩埚必须用4﹟，每次用毕都必须进行有效的洗涤处理，以免因沉淀物堵塞滤控而影响过滤功效。具体洗涤方法：先用1:1氨水将玻璃砂坩埚浸泡30min，然后用自来水冲洗干净，再用1：1盐酸煮沸，用自来水冲洗干净，最后放在抽滤瓶上，用自来水和纯水各抽滤3次，烘干备用。7.2煮沸过程中应控制好火候，防止液体溅出;抽滤时应小心，应保证试样液毫无损失。7.2喹钼柠酮溶液的制备：按顺序加入，不可产生沉淀。7.3颗粒状的产品必须研磨成细粉后，才可测定P枸、P水。7.4用比色法不能测定磷钙的P总、P枸、P水。，否则，误差较大。8总磷、枸溶性磷、水溶性磷的含义8.1总磷P总表示样品中磷酸一二三钙以及其他磷酸盐中含磷的总量。8.2枸溶性磷P枸表示样品中磷酸氢钙和磷酸二氢钙含量的和。8.3水溶性磷表示样品中磷酸二氢钙含量。8.4可认为：磷酸二氢钙的磷含量=P水磷酸氢钙中磷含量=P枸-P水。磷酸三钙中磷的含量=P总-P枸8.5磷酸氢钙以P枸衡量质量的好坏、磷酸二氢钙以P水衡量质量的好坏。十四磷酸盐中总钙的测定1适用范围1.1本方法规定了用络合滴定法测定磷酸氢钙中总钙的测定方法。1.2本方法适用于磷酸氢钙（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）及磷酸二氢钙中总钙含量的测定。2方法原理将样品用酸溶解，溶液调pH值到强碱性，用EDTA标准滴定溶液滴定溶液中的钙离子，钙黄绿素—甲基百里香草酚蓝为指示剂。3试剂与溶液3.1盐酸羟胺：1+1；3.2三乙醇胺：1+1；3.3乙二胺；3.4盐酸水溶液：1+1；3.5氢氧化钾溶液（200g/L）：称取20g氢氧化钾溶于100mL水中；3.6淀粉溶液（10g/L）：称取1g可溶性淀粉入200mL烧杯中，加5mL水润湿，加95mL沸水搅拌，煮沸，冷却备用（现用现配）；3.7孔雀石绿水溶液（1g/L）；3.8钙黄绿素—甲基百里香草酚蓝指示剂：0.10g钙黄绿素与0.10g甲基麝香草酚蓝与0.03g百里香酚酞、5g氯化钾研细混匀，贮存于磨口瓶中备用；3.9钙标准溶液（0.001g/mL）：称取2.4974g于105℃～110℃干燥为3h的基准物碳酸钙，溶于40mL盐酸（8.4）中，加热赶除二氧化碳，冷却，用水移至1000mL容量瓶中，稀释至刻度；3.10乙二胺四乙酸二钠（EDTA）标准滴定溶液c(EDTA)约为0.01mol/L。用钙标液（3.9）按（4.2）标定。4测定步骤4.1称取约1g试样（准确至0.0002g），置于100mL烧杯中，加10mL盐酸溶液（3.1）和少量水，盖上表面皿，煮沸10min。冷却后移入250mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。此溶液为试验溶液A，4.2用移液管移取25mL试验溶液A，置于250mL锥形瓶中，加50mL水，加10mL淀粉溶液，加4mL三乙醇胺，加2mL乙二胺，加1滴孔雀石绿指示液，滴加氢氧化钾溶液至无色，再过量滴加10mL，加0.1g盐酸羟胺（每加一种试剂都要摇匀），加钙黄绿素少许，在黑色背景下用EDTA标准滴定溶液滴定至溶液由绿色荧光消失呈显紫红色为终点。5分析结果的表述钙含量以钙（Ca）的质量分数w2计，数值以%表示，按式下式计算：式中：V—试验溶液所消耗的EDTA准滴定溶液的体积，mL；c—EDTA标准滴定溶液的实际浓度，mol/L；M—钙的摩尔质量，g/mol，M=40.08；m—试样的质量，g。取平行测定结果的算术平均值为测定结果。两次平行测定结果的绝对差值不大于0.3%。十五石粉中钙与镁的测定1适用范围1.1本方法规定了用络合滴定法测定石粉中钙与镁的测定方法。1.2本方法适用于石粉中钙与镁含量的测定。2原理络合滴定法，样品酸溶解后，调节溶液到不同的pH值，分别测定试液中钙和镁的含量。3试剂与溶液3.1盐酸羟胺：1+1；3.2三乙醇胺：1+1；3.3氨-氯化铵缓冲溶液（pH=10）；3.4氢氧化钾溶液（200g/L）：称取20g氢氧化钾溶于100mL水中；3.5淀粉溶液（10g/L）：称取1g可溶性淀粉入200mL烧杯中，加5mL水润湿，加95mL沸水搅拌，煮沸，冷却备用（现用现配）；3.6孔雀石绿水溶液（1g/L）；3.7钙黄绿素—甲基百里香草酚蓝指示剂：0.10g钙黄绿素与0.10g甲基麝香草酚蓝与0.03g百里香酚酞、5g氯化钾研细混匀，贮存于磨口瓶中备用；3.8铬黑T指标剂5g/L；3.9氨水10%；3.10乙二胺四乙酸二钠（EDTA）标准滴定溶液c(EDTA)约为0.02mol/L。用钙标液（3.9）按（4.2）标定。4测定步骤4.1称取样品0.8g（精确到0.0002g），于小烧杯内，加少量水湿润，盖好表面皿，沿杯壁小心加入（1+1）盐酸15mL，电炉上加热煮沸2分钟，若有少量不溶物可再加5mL（1+1）盐酸，1mL浓硝酸再煮沸2分钟，冷却降温后，用水定容到250mL容量瓶内，摇匀，为储备液。4.2取25.00mL储备液于三角瓶内，加20mL水，10mL10g/l淀粉，3mL（1+1）三乙醇胺，2～3滴孔雀石绿，用氢氧化钠（30%）调至无色，并过量7mL，加少许钙黄绿素-甲基百里香酚兰混合指标剂，用0.05mol/L的EDTA标准溶液滴定到溶液呈浅红色。消耗EDTA标准溶液滴的体积为V1mL。4.3取25.00mL储备液于三角瓶内，加20mL水，3mL（1+1）三乙醇胺，再放一小块pH试纸于瓶内，用10%氨水调节pH到中性，加氨-氯化铵缓冲溶液（pH=10）15mL，铬黑T指标剂（5g/L）3滴，用0.05mol/LEDTA标准溶液滴定至溶液呈纯蓝色，消耗EDTA标准溶液滴的体积为V2mL。同时作空白。5分析结果的表述钙含量以钙（Ca）的质量分数w1计，数值以%表示，按式（1）式计算镁含量以钙（Mg）的质量分数w2计，数值以%表示，按式（1）式计算式中：V——试验溶液所消耗的EDTA准滴定溶液的体积，mL；C——EDTA标准滴定溶液的实际浓度，mol/L；m——试样的质量，g。取平行测定结果的算术平均值为测定结果。两次平行测定结果的绝对差值不大于0.3%。十六油脂检测1过氧化值测定1.1原理试样溶解在乙酸和三氯甲烷溶液中，与碘化钾溶液反应，用硫代硫酸钠标准溶液滴定析出的碘。1.2试剂与溶液1.2.1冰乙酸1.2.2三氯甲烷：1.2.3乙酸与三氯甲烷混合液（体积比60：40）：将300mL冰乙酸与200mL三氯甲烷混合；1.2.4碘化钾饱和溶液：14g碘化钾容易10ml水中，避光保存，现配现用。1.2.5硫代硫酸钠溶液：c（Na2S2O3）=0.1mol/L，按GB/T601配制标定；1.2.6硫代硫酸钠溶液：c（Na2S2O3）=0.01mol/L，临使用前标定；由硫代硫酸钠标准滴定溶液：c（Na2S2O3）=0.1mol/L，临使用前用新煮沸并已冷却的蒸馏水稀释，摇匀。1.2.7淀粉溶液：10g/L。将1g可溶性淀粉与少量冷蒸馏水混合，在搅拌的情况下溶于100mL沸水中，煮沸3min，立即从热源上取下并冷却。现配现用。1.3分析步骤1.3.1称取3-5g试样，准确至0.0001g，置于250ml碘量瓶中。1.3.2相碘量瓶中加入30ml乙酸-三氯甲烷混合液，立即盖上塞子摇动使试样溶解，加入1.0ml饱和碘化钾溶液，紧密盖好瓶塞，并轻轻振摇0.5min，然后在暗处放置3min，取出加入100ml蒸馏水，摇匀后立即用0.01mol/l硫代硫酸钠标准滴定溶液滴定至淡黄色时（对于过氧化值含量很低的试样，可先加淀粉指示剂，再用硫代硫酸钠标准滴定溶液滴定），加淀粉指示剂1ml，继续滴定至蓝色消失，即为终点，记下消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积。1.3.3空白实验测定需进行空白实验，当空白实验消耗0.01mol/L硫代硫酸钠溶液{c（Na2S2O3）=0.01mol/L}超过0.1mL，应更改试剂，重新对样品进行测定。1.5结果表示1.5.1过氧化值P按式（1）计算：(单位meq/kg)．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．（１）式中：V——用于测定的硫代硫酸钠溶液的体积，mL；V0——用于空白的硫代硫酸钠溶液的体积，mL；c——硫代硫酸钠溶液的浓度，mol/L；m——试样的质量，g。1.5.2过氧化值以毫摩尔每千克表示：过氧化值P′按式（2）计算：（单位mmol/kg）．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．（2）1.6重复性短时间内、同一操作者、采用相同的方法、对于同一份试样、在同一实验室、相同仪器、获得两个独立的测定结果。在过氧化值小于或等于5mmol/kg（10meq/kg）时，这两个独立的测定结果的绝对差值大于其平均值的10%的事例，不得超过5%。1.7注意事项滴定时要不断腰带，使碘从溶剂中释放出来。2酸价的测定油脂中游离脂肪酸用氢氧化钾标准溶液滴定，每克油脂消耗氢氧化钾的毫克数称为酸价（mgKOH/g）。2.1试剂2.1.1酚酞指示液；2.1.2石油醚-乙醇混合液；按石油醚-无水乙醇2：1混合，用0.1mol/L氢氧化钾溶液中和至对酚酞指示液呈中性。2.1.3氢氧化钾标准液0.02mol/L，使用前用0.1mol/L的氢氧化钾标准溶液准确稀释。2.2操作步骤称取2～5g试样（精确至0.001g），置于锥形瓶中，加入50mL中性石油醚-乙醇混合液，并后加入酚酞指示液2滴～3滴，以0.1mol/L氢氧化钾标准液滴定，至初显微红色且30s内不褪色为终点。2.3结果计算按下式计算酸价：式中：X——样品酸价值（KOH），每克样品中氢氧化钾的毫克数，mg/g；V——样品消耗氢氧化钾标准溶液体积数，mL；c——氢氧化钾标准溶液浓度，mol/L；m——试样质量，g；56.11——每毫升1mol/L氢氧化钾溶液相当氢氧化钾毫克数。2.4重复性每个样品做两个平行样，结果以算术平均值计算。3油脂TBA值的测定方法3.1原理油脂受到光、热、空气中氧的作用，发生酸败反应，分解出醛、酸之类的化合物。丙二醛就是分解产物的一种，它能与TBA（硫代巴比妥酸）作用生成粉红色化合物，在532nm波长处有吸收高峰，利用此性质即能测出丙二醛含量，从而推导出油脂酸败的程度。3.2试剂3.2.1氯仿（分析纯）；3.2.2三氯乙酸混合液；准确称取分析纯三氯乙酸（分析纯）7.5g及0.1gEDTA，用水溶解，稀释至100mL。3.2.3硫代巴比妥酸溶液（TBA）0.02mol/L；准确称取TBA0.288g溶于水中，并稀释至100mL（如TBA不易溶解，可加热至全溶澄清），然后稀释至100mL。3.2.4丙二醛标准溶液。称取0.315g1，1，3，3-四乙氧基丙烷，溶解后稀释至1000mL，此溶液每mL相当于丙二醛100μg，置于冰箱内保存。准确吸取10mL，稀释至100mL，此溶液每mL相当于丙二醛10μg，备用。3.3测定步骤3.3.1标准曲线的绘制准确吸取每相当于丙二醛10μg的标准溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL置于纳氏比色管中，加水至总体积为5mL，加入5mLTBA溶液，然后按样品测定步骤进行，测得光密度绘制标准曲线。3.3.2样品测定准确称取融化均匀的油脂样品3～10g，置于100mL有盖三角瓶内，准确加入50mL三氯乙酸混合液，在70℃水浴上振摇半小时，趁热用双层滤纸过滤，除去油脂。滤液重复用双层滤纸过滤一次。准确移取上述滤液5mL置于25mL比色管内，加入5mLTBA溶液，混匀，加塞，置于90℃水浴内保温40min，取出，室温冷却1h，摇匀，静置2min，于532nm波长比色，对照标准曲线得到微克数。同时作空白试验。计算丙二醛含量（mg/kg）=C/m式中：C——从标准曲线查得丙二醛的微克数，μg；m——样品质量，g。3.4注意事项：TBA水溶液在通风柜中配制，用棕色瓶保存，有沉淀则不能使用；水浴时试管密封性要好，漏气结果偏低。4皂化值的测定4.1原理皂化值（皂化价）系指中和1g油脂中所含全部游离脂肪酸和结合脂肪酸（甘油脂）所需氢氧化钾的毫克数。油脂与氢氧化钾乙醇溶液共热时，发生皂化反应，剩余的碱可用标准酸液进行滴定，从而可计算出中和油脂所需的氢氧化钾毫克数。4.2试剂和溶液4.2.1无水乙醇4.2.2酚酞指示剂1g/L4.2.3盐酸标准溶液0.5mol/L4.2.4氢氧化钾乙醇溶液0.5mol/L称取化学纯氢氧化钾34g，溶于20～30mL水中，加无水乙醇980mL，摇匀，静置1h，过滤，滤液贮于装有苏打石灰球管的玻璃瓶中）。4.3测定步骤称取2～3g样品（称准至0.0002g），准确加入0.5mol/L氢氧化钾乙醇溶液25.00mL，在水浴（90℃）上加热回流30min，不时摇动。取下冷凝管，冷却后加入数滴酚酞指示剂，用0.5mol/L的盐酸标准溶液滴定至红色消失。同时做空白试验。4.4结果计算皂化价按下式计算：式中：c——盐酸标准溶液的浓度，mol/L；V——试样耗用盐酸标准溶液之体积，mL；V0——空白试验消耗盐酸标准溶液之总体积，mL；m——试样的质量，g；56.1——与1.0000mol/L盐酸标准液1.00mL相当于氢氧化钾的克数。4.5皂化率的计算：注：豆油酸价一般为：0.7mgKOH/g，理论皂化值一般为：190-195mgKOH/g；花生油酸价一般为：3.5mgKOH/g，理论皂化值一般为：188~195mgKOH/g；动物性油脂理论皂化价为195mgKOH/g；鱼油酸值一般为：0.7mgKOH/g，理论皂化值一般为：200-210mgKOH/g一般植物油的皂化价如下：棉子油189~198，花生油188~195，大豆油190~195，菜子油170~180，芝麻油188~195，葵子油188~194，茶子油188~196。5油脂含皂量测定法5.1原理油脂中的含皂量，即油脂经过碱炼后，残留在油脂中的皂化物数量(以油酸钠计)。5.2试剂5.2.1石油醚（沸点60～90℃）；5.2.2中性乙醇95％；5.2.3甲基红乙醇溶液2g/L；5.2.4硫酸标准滴定溶液c(1/2H2SO4)=0.02mol/L。5.3测定方法称取混匀试样约10g，注入干燥的锥形瓶中，加入乙醇10mL和石油醚60mL，摇动，使试样溶解后，缓慢加入80℃的蒸馏水80mL，振摇使成乳状，滴入3滴甲基红指示剂，趁热逐滴加入硫酸标准滴定溶液（c(1/2H2SO4)=0.02mol/L），每加一滴振摇一次，滴至下层的溶液显出微红色为止。5.4结果计算油脂含皂量按下列公式计算：

式中：V——滴定用去的硫酸溶液体积，mL；c——硫酸标准滴定溶液的浓度，mol/L；W——试样重量，g；0.304——与1.00mL硫酸{c(1/2H2SO4)=1.000mol/L}相当于油酸钠的克数。每个样品称取两份试料，以其算术平均值报告结果，结果取至小数点二位。平行试验结果允许差不超过0.02％。6油脂碘价的测定6.1适用范围植物油脂和动物油脂6.2试剂与溶液6.2.1韦氏液的配制：称取三氯化碘7.9g和纯碘8.7g分别溶于冰乙酸中，合并两液，再用冰乙酸稀释至1L，贮于棕色瓶内。6.2.2KI溶液150g/L；6.2.3硫代硫酸钠标液滴定溶液C（NaS2O3）=0.1mol/L）；6.2.4三氯甲烷CHCl3AR。6.3步骤按附表称取试样（准确至0.0002g）于干燥的碘量瓶中，加20mLCHCl3溶解试样，加25.00mL韦氏液立即加塞，以KI溶液封口，摇匀后，在20±5℃条件下，置黑暗处30min（碘价在130以上时放置1h），到时立即加入KI溶液20mL和水100mL，用[c（NaS2O3）=0.1mol/L]硫代硫酸钠标液滴定至浅黄色时，加入1mL5g/L淀粉指示剂，滴定至兰色消失。同样条件做空白两个，取平均值。6.4结果的表示和计算碘价按下式计算式中：V1——试样消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，mL；V2——空白消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，mL；c——硫代硫酸钠标准溶液的浓度，mol/L；m——试样的质量，g；0.1269——与1.00ml硫代硫酸钠标准溶液[c（NaS2O3）=1.000mol/L]的相当的以克表示的碘的质量。附表：碘价数值与试样用量碘价试样用量范围（g）碘价试样用量范围（g）200.8461～1.58651200.2115～0.2644400.6346～0.79351400.1813～0.2266600.4231～0.52881600.1587～0.1983800.3173～0.39661800.1410～0.17621000.2538～0.31732000.1269～0.15866.5注意事项6.5.1称取油脂的质量一定要合适，如果还没有滴定就到终点，则减少称取样品质量，重新测定。6.5.2每次测定碘价的过程中都要相应的测定空白。6.5.3韦试液流入锥形瓶的时间要一致。6.5.4滴定接近终点为淡黄色时，加入淀粉后要剧烈震荡，以保证上三氯甲烷中的碘全部被萃取出来。6.5.5冬天韦试液会有部分先结冰，此时不能继续使用，需要把韦试液放置在温度25℃的避光环境中操作。7油脂中矿物油的定性检测7.1原理油脂可以被碱皂化，生成易溶于水的皂，而矿物油属于烃类，不可被皂化，也不溶于水。7.2步骤取约1mL样品于干燥的250mL三角瓶中，加1mL饱和的NaOH溶液，30mL无水乙醇，在电炉上回流5min，取下三角瓶，加入50mL沸水，如溶液出现分层或浑浊现象，可判定样品中含有矿物油成份。本法检出限量为0.5%。8生物柴油的检验方法1将油样100mL移入精馏装置内称重，加热，收集150～250℃的馏分。方法2在已烘干恒重的100mL烧杯内加50～60mL油样，称重，将烧杯放到电炉上加热到250℃，并保持20min，冷却后称重，其加热减重小于1%的为正常，若大于2%则可疑掺假，若在1～2%之间须结合其他方法作进一步检测。方法3烟点的差异，在方法2中如在140℃左右油样就开始冒烟则可疑掺假，油脂的烟点（植物和动物油脂）都在190℃以上。9混合脂的检测原理：混合脂溶于水，油脂不溶水。步骤：50mL油样加50mL水，震荡1min后静止观察分层情况。十七挥发性盐基氮的测定1原理挥发性盐基氮是指动物性食品由于酶和细菌的作用，在腐败过程中，使蛋白质分解而产生氨以及胺类等碱性含氮物质。此类物质具有挥发性，在碱性溶液中蒸出后，用标准酸溶液滴定计算含量。2试剂2.1氧化镁混悬液（10g/L）：称取1.0g氧化镁，加100mL水，振摇成混悬液；2.2硼酸吸收液（20g/L）；2.3盐酸[c(HCl)=0.010mol/L]标准滴定溶液；2.4甲基红—乙醇指示剂（1g/L）；2.5次甲基蓝指示剂（1g/L）。临用时将上述两种指示液等量混合为混合指示液。3仪器3.1自动定氮仪；4分析步骤4.1试样处理：取3g左右试样（粉碎好的样品）于200mL磨口三角瓶中，加100mL蒸馏水于振荡器上振荡30分钟，4000转离心。4.2蒸馏滴定：将盛有25mL吸收液及2-3滴混合指示液的锥形瓶置于冷凝管下端，并使其下端插入吸收液的液面下，准确吸取5ml加10mL氧化镁混悬液，通入蒸汽，进行蒸馏，蒸馏4min即停止，用蒸馏水冲洗冷凝管下端，在蒸馏1分钟（总体积不超过150ml）用盐酸标准滴定溶液滴定，终点至红色。同时做试剂空白试验。5结果计算试样中挥发性盐基氮的含量按下式进行计算。式中：X——试样中挥发性盐基氮的含量，mg/100g；V1——测定用样液消耗盐酸或硫酸标准溶液体积，mL；V2——试剂空白消耗盐酸或硫酸标准溶液体积，mL；C——盐酸或硫酸标准溶液的实际浓度，mol/L；14——与1.00mI盐酸标准滴定溶液[c(HCl)=1.000mol/L]相当的氮的质量，mg；m——试样质量，g。计算结果保留三位有效数字。6精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。十八大豆制品中尿素酶活性的两种快速检测法酚红法1原理酚红指示剂在pH6.4~8.2时由黄变红，大豆制品中所含的尿素酶，在室温下可将尿素水解产生氨。释放的氨可使酚红指示剂变红，根据变红的时间长短来判断尿素酶活性的大小。2仪器和试剂2.1粉碎装置粉碎时应不产生强烈发热（如研钵、球磨机）；2.2天平感量0.01g；2.3试管直径