DB51T 3015-2023 牛5种病毒性腹泻病的诊断和防治技术规程　

DB51TechnicalspecificatiI 2 2 3 4本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。1牛5种病毒性腹泻病的诊断和防治技术规程本文件规定了牛病毒性腹泻黏膜病病毒、牛冠状病毒、牛轮状病毒、牛纽布病毒和牛诺如病毒共5种病毒引起的牛病毒性腹泻病诊断依据和防本文件适用于上述5种腹泻相关病毒的检测，牛病GB/T18637-2018牛病毒性腹泻粘膜病诊断技术规范NY/T541-2016兽医诊断样本采集、保存与运输技术规范牛病毒性腹泻黏膜病bovineviraldiarrheamuco牛病毒性腹泻黏膜病是由牛病毒性腹泻病毒（Bovineviraldiarrheavirus,BVDV）感染一种病毒性传染病。BVDV可引起牛呼吸道综合征、繁殖障碍性疾病、腹泻/黏膜病、免疫抑制和持续性牛冠状病毒病bovinecoronavi牛冠状病毒病是由牛冠状病毒（Bovinecoro牛轮状病毒病是由牛轮状病毒（Bovinerotavirus,BRV）引起的以呕吐、腹泻、脱水等为2牛诺如病毒病bovinenorovi牛诺如病毒病是由牛诺如病毒（Bovinenorovirus,BNoV）引起的一种犊牛腹泻性疾病。NoV属于杯状病毒科，诺如病毒属，是单链的RNA病毒，基因组全长7.3kb～7.5kb。根据其基因组特征，可将NoV分为6个基因型，感染牛的主要为基因型GШ。4.2.1样本采集与处理按照《NY/T541-2016兽医诊断样本采集、保存与运输技术规范》采集肛门棉拭子5g～1RNA保存液，-20℃及以下保存运输不超过48h，立即提取并反转录合成cD4.2.2样本检测依据本标准附录A中提供的牛病毒性腹泻粘膜病病毒、牛冠状病毒、牛轮状病毒、牛纽布病毒和牛诺如病毒荧光定量PCR或恒温隔绝式荧光PCR(iiP4.3诊断结果判定4.3.1可疑4.3.2确诊5.2消毒放牛进入前用清水冲洗饲槽和牛床，待干燥后牛方可进入。运动场地清除粪便和杂草后，用5%～10%的35.3加强饲养管理5.4.1.1补液5.4.1.3止泻5.4.1.4防止细菌继发感染5.5疫苗紧急免疫患病牛及其产品按照农业部关于“病死及病害动物无害化处理技术规范（农医发〔2014NeV-F：5'-CAGCCCGTCTGGGTGAAT-3'；NeV-R：5'-CTGGATRGTTCTGACTTCGG-3'；BNoV-F：5'-CCTYCACGGCGAGAAGTT-BNoV-R：5'-CGGWGCGATGGTACAAARAT-BCoV-F：5'-AGTAGTGTCAGTGCTAAC-BCoV-R：5'-CAAGTGCCTGTAGGTATA-BCoV-Probe：5'-FAM-ACAACTTCCATCCCGCCAAA-TAMRABVDV1-F：5'-AAGCCTCGAGATGCCACG-3'；BVDV1-R：5'-GCAGCACCCTATCAGGCTGT-BVDV1-Probe：5'-FAM-CCCACAGCACATCTTAA-MGBBRV-F：GCTAACCACTTGGTATBRV-R：GCCATCTGAGTGATTACTCBRV-Probe：FAM-TACGTATTCGCTACACAGAGTAATCA-BA.2.1NeV染料法荧光定量PCRA.2.1.1反应体系及条件反应体系：TBGreenPremixExTaqII10μL，上、下游引物各1.0μL，cDNA模板1.5μL，用A.2.1.2结果判定A.2.1.2.1阈值设定A.2.1.2.2质控标准阴性对照无Ct值，且无典型扩增曲线；或阴性对照Ct值>35.0，A.2.1.2.3结果描述及判定5阴阳性对照成立的前提下，样品检测无Ct值，且无典型的扩扩增曲线，但熔解曲线于88℃左右未出现明显的Ct值≤35.0，出现典型的扩增曲线，熔解曲线于88℃左右出现明显的峰值，表A.2.2BNoV染料法荧光定量PCRA.2.2.1反应体系及条件）：A.2.2.2结果判定A.2.2.2.1阈值设定A.2.2.2.2质控标准阴性对照无Ct值，且无典型扩增曲线；或阴性对照Ct值>35.0，阳性对照Ct值<30.0，并出现典型的扩增曲线，熔解曲线于88A.2.2.2.3结果描述及判定阴阳性对照成立的前提下，样品检测无Ct值，且无典型的扩扩增曲线，但熔解曲线于88℃左右未出现明显的Ct值≤35.0，出现典型的扩增曲线，熔解曲线于88℃左右出现明显的峰值，表A.2.3BCoV探针法荧光定量PCRA.2.3.1反应体系及条件PCR反应体系：ProbeqPCRPremixExTaq10µL，探针0.4µL（10µmol/L上下游引物各0.8µL（10µmol/L），cDNA模板2µL，DEPCH2O补足到20µL。反应程序为：95℃min；95℃15s，54℃20s），6A.2.3.2结果判定A.2.3.2.1阈值设定A.2.3.2.2质量控制阴性对照和阳性对照结果要求在同一次实验中同时满足A.2.3.2.3结果描述及判定被检样本检测结果中FAM通道Ct值≤35，TAMRA通道≤35，且扩增曲线均为典型的S曲线，报告为线均为典型的S曲线，报告为BCoV核酸阳性。被检样本检测结果中FAM和TAMRA通道均无Ct值或无典型的S型扩增曲线，报告为BCoVA.2.4.1反应体系及条件反应体系：Taq酶1μL，预混Buffer25μL，引物上下游各A.2.4.2结果判定A.2.4.2.1质量控制阴性对照和阳性对照结果要求在同一次实验中同时满足A.2.4.2.2结果判定被检样本检测结果中，iiPCR仪显示为“+”者判定为阳A.2.5.1反应体系及条件反应体系：Taq酶1μL，预混Buffer25μL，引物