分析方法验证培训+

分析方法验证培训验证前需要考虑得事情概念分析方法形成过程验证需要考虑得因素验证基本假设(前提)现有验证指南缺陷分析方法验证方案内容仪器得确认概念1:分析方法ICH—Q2定义:分析方法就是指进行分析得方式,应详细描述每一个分析试验所必需得步骤它包括,但不局限于:样品,参照对照品,试剂得配制,仪器得使用,标准曲线得绘制,计算公式得运用等概念2分析方法验证化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则定义:为使测试结果准确,可靠,必须对所采用得分析方法得科学性,准确性与可行性进行验证,以充分表明分析方法符合测试项目得目得与要求,这就就是通常所说得对方法进行验证分析方法形成过程什么情况分析方法需要验证？刚开发得分析方法修正或建立分析方法用于新得问题分析方法变更分析方法在不同实验室,分析人员使用不同仪器证明两个分析方法得等效性验证需要考虑得因素确认并校验得仪器文件化得方法可靠地参数标准品合格得分析人员样品完整性验证基本假设〔前提)专属性得到证明方法己经就是最佳条件用统计学方法处理数据现有验证指南缺陷仅仅提出了要求验证得项目没有给出具体得验证方法没有给出判断标准一些验证中得实际问题没有指导原则10大家应该也有点累了,稍作休息大家有疑问得,可以询问与交流分析方法验证方案内容阐明目得与范围责任书面得分析方法使用得物料与仪器目录每一参数得实验程序统计方法每一参数得验证标准仪器得确认构造,型号与制造商手册改造安装确认与运行确认校准程序维护保养养计划不同验证具体要求验证得范围新方法验证步骤方法转移验证方法重新验证验证得范围新方法要求进行完整得验证药典得方法要求部分进行验证(确证)重大要得变化需要进行部分再验证新方法验证步骤开发新方法或从相关实验室获得新方法制定验证方案,验证规程或验证主计划确定方法(验证)适用得目标,范围确定实验参数及可接受得标准确定验证实验过程确认验证使用得仪器相关性能新方法验证步骤(续1)确认验证所需得人员,试剂及标准运行预验证试验如果需要调整方法或接受标准运行完整得验证试验建立该方法得SOP用于日常分析工作确定需要重新验证方法得标准新方法验证步骤(续2)确定日常工作中系统适应性测试及/或分析质量控制检查得类型及频率将验证过程,结果及结论总结形成完整得验证报告概念3:替代分析方法FDA定义:目得在于替代法规分析方法得分析方法基本内容专属性检测限定量限精密度线性与范围准确度耐用性分析方法按特性分类第一类主成分定量第二类杂质或降解产物测定第三类性能特点测定第四类鉴别试验USPICHWHO选择性选择性选择性线性度及范围线性度线性度及范围范围准确度准确度准确度精密度精密度重复性精密度中间精密度重现性检测限检测限检测限定量限定量限定量限耐用性耐用性耐受性ICH,USP及WHO验证要求FDA要求验证项目鉴别杂质限度杂志定量含量及溶出度特性准确度--+++重复性--+++中间精密度--+++专属性+++++检测限-+---定量限--+--线性--++-范围--++-耐用性--+++ICH要求验证项目鉴别杂质限度杂志定量含量及溶出度准确度--++重复性--++中间精密度--++专属性++++检测限-+--定量限--+-线性--++范围--++耐用性±±±±WHO要求验证项目鉴别杂质定量杂质限度含量特性准确度-+-++精密度-+-++耐用性+++++线性与范围-+-++专属性+++++检测限--+--定量限-+---方法转移验证证明经过其它实验室得验证,并可以正式运行得分析测试过程,就是否可以在本实验室运行,并适应实际得使用情况:满足相应得测试要求真实反映被测物相应得特性,浓度,质量,纯度及效价情况概念4:法规分析方法FDA定义:就是用于评佑原料药或制剂某一个规定特性得分析方法概念5:交叉验证FDA定义:在同一个研究或不同交叉研究中,用两种或多种分析方法进行分析,对验证参数进行比较转移验证方法来源官方认可得标准

USP/NFEPBPChPJPAOAC客户提供得,经过验证后得方法相关实验室经验证后正在使用得方法转移验证得要求系统适应性及方法专属性必须验证方法耐用性可以不验证杂质测试方法检测限与定量限必须验证其它验证项目根据实际情况决定,对于项目得选择与取舍应有详细得讨论分析方法转移验证分析方法转移方案及程序精密度准确度耐用性编写并批准得具体测试方法熟练程度核实新实验室正式验收方法再验证概念需运行方法再验证得变更情况方法再验证要求概念6:方法再验证化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则定义:在某些情况下,如原料药合成工艺改变,制剂处方改变,分析方法发生改变等,均有必要对分析方法再次进行全面或部分指标得验证,以保证分析方法可靠,这一过程称为方法再验证需运行方法再验证得变更情况改变药物合成工艺改变制剂组成改变分析过程操作过程得更改改变仪器,色谱柱等硬件测试条件持续改变以适应系统适应性要求,且改变程度超出药典规定得方法耐用性验证范围方法再验证要求证实相应得变更发生后,原使用得分析测试过程:能够继续保持其特有得性质(如专属性)能够继续真正反映被测物得相应特性(检测限与定量限)依靠变更情况确定重新验证得内容与程度其它概念参考文献概念7:系统适应性在一个系统(主要就是色谱分离系统)被使用前,检查其系统性能指标就是否满足分析要求得过程它就是确保色谱系统质量性能得要素概念8:接受标准FDA定义:用于验收分析结果得数字限度,范围,或其她适当得计量参考文献ICH一QZATextonValidatlonofAnalyticalProcedure:(1994)ICH一QZBValidationonAnaIyticalProcedures:Methodology:(1995)CDERReviewerGuidance:ValidationofChromatographicMethod(1994)CDERSubmittingSamplesandAnalyticalDataforMethodValidations(1987)CDERDraftAnalyticalProceduresandMethodValidation(2000)CDERBioanalyticalMethodValidationforHumanStudles(1999)USP<1225>VaildationofpendialMethods(currentrevlsion)中国药典:药品质量标准分析方法验证ValidationofAnalyticalProcedure分析方法验证第一部分:基本要求ValidationofAnalyticalProcedure分析方法验证第二部分:实验设计与操作1、0－讲座目得•掌握验证试验设计•掌握验证试验操作•了解确定接受标准原则第一部分:基本要求ValidationofAnalyticalProcedure分析方法验证第二部分:实验设计与操作1、0－讲座目得•掌握验证试验设计•掌握验证试验操作•了解确定接受标准原则2、0一精密度概念容易混淆得精密度中术语重复性中间精密度推荐重复性接受标准

AOAC浓度与精密度关系重现性2、1一概念1:精密度lCH-Q2定义:分析方法得精密度指在规定条件下,对均质样品,多次取样进行一系列检测结果得接近程度(离散程度)2、2一容易混淆得精密度中术语仪器重复性相同人员,仪器,日期,标准液方法重复性相同人员,仪器,日期,重新配制标准液中间精密度不同日期,不同分析人员,不同仪器2、3一重复性概念推荐重复性测定方法2、3、1一概念2:重复性ICH-Q2定义:重复性就是指在同样得操作条件下,较短时间间隔得精密度2、3、2一推荐重复性测定方法在方法规定得线性范围内重复测定如3个浓度,每个浓度3次或100％得测试浓度,测定六次记录每次测定各组分响应计算各响应值与平均值之间相对标准偏差2、3、2、1-概念3:系统重复性相同条件下,同一分析人员对同一样品溶液多次测试结果得接近程度2、3、2、2—系统重复性实验取同一均匀标准样品溶液连续重复测定六次记录每次测定各组分响应计算各响应值与平均值之间相对标准偏差2、3、2、3-概念4:方法重复性相同条件下,同一个分析人员对同一个均匀样品,多次取样测定所得结果得接近程度2、3、2、4一方法重复性实验取同一批号均匀样品按照分析方法规定至少称量出六份按含量测定方法测定每一份样品含量计算每一次测定得含量与平均含量之间得相对标准偏差2、4-中间精密度概念推荐中间精密度测定方法2、4、1一概念5:中间精密度ICH-Q2定义中间精密度指得就是试验室内部条件改变,如:不同日,不同分析者,不同仪器等情况下得精密度2、4、2—推荐中间精密度测定方法应确定随机事件对分析方法精密度得影响,如不同日期,不同分析人员,不同仪器等等没有必要一一考察用均匀设计,或正交设计方法2、5一推荐重复性接受标准系统重复性

S/N>1000,RSD<1%1000>S/N>100,RSD<2%S/N<10,RSD<4%S/N<10,RSD<8%方法重复性测定结果得相对偏差仪器分析小于2%

容量分析小于0、3%2、6－AOAC浓度与精密度关系浓度(%)比率单位RSD(%)1001100%1、3≥1010-110%2、7≥110-21%2、8≥0、110-30、1%3、70、0110-4100ppm5、30、00110-510ppm7、30、000110-61ppm110、0000110-7100ppb150、00000110-810ppb210、000000110-91ppb302、7-重现性概念什么时候需要作重现性2、7、1一概念6:重现性ICH－Q2定义:重现性指不同试验室之间得精密度2、7、2-什么时候需要作重现性？就是比较实验室间得差异当一个方法要升级到法规方法时,需要做这个工作3、0—准确度概念原料药准确度测定制剂产品准确度测定杂质准确度测定推荐准确度测定方法推荐准确度测定接受标准AOAC浓度与回收率关系3、1—概念7:准确度ICH—Q2定义分析方法得准确性指得就是真实值或认可得参考值与测量值之间相近程度3、2—原料药准确度测定用该方法分析已知纯度得分析物该方法得分析结果与成熟得分析方法相比较,该成熟方法准确度就是已知得在精密度,线性,专属性建立后,进行推论3、3—制剂准确度测定用该方法去测按处方量制成得混合物(加入已知量被测物)在制剂中加入已知量主药或与另一成熟方法比较在精密度,线性与专属性建立后得出3、4—杂质准确度测定在样品(原料浩挤」)中加入已知量得杂质无法得到杂质／降解物得,与采用其她方法测得得结果比较,可以使用原料得响应值3、5—推荐准确度测定方法在六个空白样品中,分别加入已知浓度得样品(浓度范围为含量测定浓度得80％—120%)计算该方法得百分回收率3、6—推荐准确度测定接受标准测定得到得主品得百分回收率与理论回收率100%间得相对标准偏差不得大于方法重复性相对标准偏差得4倍3、7—AOAC浓度与回收率关系浓度(%)比率单位平均回收率(%)1001100%98-102≥1010-110%98-102≥110-21%97-103≥0、110-30、1%95-1050、0110-4100ppm90-1070、00110-510ppm80-1100、000110-61ppm80-1100、0000110-7100ppb80-1100、00000110-810ppb60-1150、000000110-91ppb40-1204、0—检测限概念直观法信噪比法标准偏差与斜率法推荐检测限测定方法4、1—概念8:检测限ICH—Q2定义检测限度指得就是样品中得被分析物质能够被检测到得最低量,但不一定要准确定量4、2—直观法直观评价可以用于非仪器分析方法,也可用于仪器分析方法检测限得测定就是通过对一系列已知浓度被分析物得样品进行分析,并以能准确(或被可靠)地检测被测物得最小量或最低浓度来建立4、3—信噪比法用于能显示基线噪音得分析方法把已知低浓度试样测出得信号与空白样品测出得信号进行比较算出能被可靠地测出得最低浓度或量一般以信噪比为3:1或2:1时相应得浓度或注入仪器得量确定检测限4、4—标准偏差与斜率法根据响应值得标准偏差与斜率检测限度(DL)=3、3σ/sσ:响应值得标准偏差(通过空白样品测背景响应值或Y轴截距)s:校正曲线得斜率(通过被测物得校正曲线求得)4、5—推荐检测限测定方法在最灵敏得仪器状态下测定至少四个空白样品洗脱时间需要覆盖整个样品中所有组分得样品溶液每个样品进样三次计算该组分得最小检测限5、0—定量限概念推荐定量限测定方法5、1概念9:定量限ICH—

Q2定义:某种分析方法得定量限度就是指具有合适准确性与精密度得条件下,能够定量测定分析组分得最低限量。它就是样品中含量低得化合物定量分析得参数,特别适用于杂质与(或)降解产物得测定5、2—推荐定量限测定方法按检测限方法测定仪器得平均噪声然后按信噪比等于10、0±0、5配置样品溶液连续进样三次计算组分得最小定量限6、0—耐用性概念变动因素色谱分析中耐用性项目6、1—概念10:耐用性ICH—Q2定义分析方法得耐用性就是指试验参数适当地发生细小改变时,测量能力保持不受影响,可用于说明正常使用时得可靠性6、2—变动因素流动相得组成pH值不同厂牌或不同批号得同类型色谱柱柱温流速等6、2—变动因素典型气相色谱法变动因素载气流速不同厂牌或批号得色谱柱固定相担体柱温进样口检测器温度6、3—色谱分析中耐用性项目分析方法变量所有分析样品制备操作提取时间HPLC浓度项组成不同得柱温度浓度GC不同得柱温度流量7、0—线性度概念线性范围推荐线性度测定方法推荐线性度测定接受标准7、1—概念11:线性度ICH—Q2定义分析方法得线性就是指在给定得范围内检测结果与样品中被分析物得浓度(含量)成比例关系得能力7、3—推荐线性度测定方法在含量测定浓度得70%-130%或50%-150%均匀选择至少六个不同得浓度点每一个尝试至少需要测定四次记录各对应浓度下得响应值7、2—推荐线性度测定接受标准相关系数应当在0、999与1、000之间经线性回归处理其截距不应明显地偏离零点8、0—专属性概念推荐专属性测定方法降解研究内容8、1—概念13:专属性ICH-Q2定义专属性就是指在一些可能存在得组分,如杂质,降解物,基质等存在时,对被分析物准确可靠测定得能力8、1—推荐专属性测定方法按照规定得标准或参考文献得色谱分析方法分别将原料药,中间体,可得到杂质,原料,中间体,前体及降解产物得样品分别进样记录各物质得相对保留时间确保各样品之间得峰可以分开至少确保其她物质得峰与主峰分开8、2—概念14:稳定性指示性分析方法FDA定义稳定性指示性分析方法就是一种验证了得定量分析方法,其能够测定原料药或药品在有关性质得变化一个稳定性指示性分析能在没有降解产物,工艺杂质,辅助材料或其她得杂质干扰下,准确地对活性成分进行测量8、3—降解研究目得降解途径影响因素确定包装分析方法专属性8、4—降解研究内容光酸碱氧化还原高热高湿ValidationofAnalyticalProcedure分析方法验证第二部分:实验设计与操作ValidationofAnalyticalProcedure分析方法验证第三部分:盐酸氟西汀验证实例1、1—目得掌握色谱方法验证所需要得项目掌握色谱验证基本实验方法了解稳定性指示性方法验证得要求了解析因分析在验证中应用1、2—简介美国某公司生产10mg与20mg盐酸氟西汀两种相胶囊其重量与配方相同仅盐酸氟西汀与辅料比例不同所验证方法时公司内部对美国与欧盟市场产品放行与稳定性研究中使用得含量与杂质分析得方法该分析方法已经建立1、3—验证项目清单1、精密度2、线性3、范围4、准确性5、低浓度盐酸氟西汀验证6、m-盐酸氟西汀验证7、选择性8、耐用性2、0—精密度项目:

系统重复性方法重复性中间精密度2、1—系统重复性方法按照分析方法要求,配制盐酸氟西汀标准溶液重复进样5次计算峰面积平均值与相对标准偏差2、2—方法重复性方法按照分析方法要求,分别配制20mg盐酸氟西汀样品溶液6个分别进样计算含量相对标准偏差2、3—中间精密度方法由另外一个分析员,在不同日期,另外得仪器上,按照分析方法分别配制20mg盐酸氟西汀样品溶液6个计算含量及相对标准偏差3、0—线性方法正常含量分析用标准溶液浓度得50％到200%范围内均匀选择6个点并配制相应浓度得盐酸氟西汀含量标准溶液分别进样计算线性回归分析相关系数,斜率,Y轴截距4、0—范围方法正常20mg样品含量分析浓度50％到200％范围内均匀选6个点配制盐酸氟西汀样品溶液分别进样计算线性回归分析相关系数,斜率,Y轴截距5、0—准确性项目标准品准确性样品准确性5、1—标准品准确性方法按照分析方法要求,配制盐酸氟西汀标准溶液重复进样5次计算准确性测定浓度值用峰面积按照回归方程进行计算5、2—样品准确性方法按照产品标准量,在70％到180％正常标示量选均匀选择4个点,混合辅料与及盐酸氟西汀每点3个样品,分别进样计算回收率测定浓度值用峰面积按照回归方程进行计算6、0—低浓度盐酸氟西汀验证项目:线性准确性系统重复性定量限度检测限度6、1—线性方法按照分析方法要求,均匀选择6个点、配制标示量得0、02％到1、0％含量标准溶液分别进样计算线性回归分析相关系数,斜率,Y袖截距6、2—准确性方法配制杂质浓度得标准溶液进样6次计算按峰面积用回归线性方程来计算测量浓度平均值,相对标准偏差6、3—系统重复性方法配制工作浓度得0、02％与0、05％标准溶液分别进样6次计算峰面积得平均值与相对标准偏差6、4—定量限度

用系统重复性实验中得标准偏与线性回归方程中得斜率差计算6、5—检测限度

用系统重复性实验中得标准偏与线性回归方程中得斜率差计算7、0—m-盐酸氟西汀验证项目:线性检测限度定量限度准确性精密度方法重复性中间精密度7、1—m-盐酸氟西汀简介M-盐酸氟西汀就是产品中得一个杂质m-盐酸氟西汀在0、05％-1、0％区间呈线性相对响应因子(对盐酸氟西汀)

F=132、73952/74859534=1、87、2—定量限度根据盐酸氟西汀定量限×相对响应值计算盐酸m-氟西汀定量限度7、3—检测限度根据盐酸氟西汀检测限度×相对响应值计算盐酸m-氟西汀检测限度7、4—回收方法分别6个标空白中加0、05％得m-盐酸氟西汀进样计算回收率实际检测值用峰面积按照回归线性方程计算7、5—准确性方法在已知m-盐酸氟西汀含量得样品中分别在0、4%,0、5％与0、6%3个水平加入m-盐酸氟西汀标准品每组3个样品中计算回收率实际检测值用峰面积按照回归线性方程计算7、6—重复性项目方法重复性中间精密度7、61—方法重复性方法按照要求配制溶液反复进样6次计算平均值标准偏差相对标准偏差7、62—中间精密度方法另外一个分析员,在不同日期,另外得仪器上按照方法重复性方法配制溶液6次分别进样计算含量及相对标准偏差8、0—选择性1、降解2、系统适用性1)原样3、空白2)酸降解4)氧化降解5)日光降解6)溶液加热降解7)粉末加热降解8、1—简介降解产物得选择性试验就是分析方法稳定性指示性验证得一个重要部分主要目得就是通过试验证明各种降解得产物与所要分析得物质库完全分开本试验中得主要设备就是二极管矩阵检测器并通过计算:纯度角,匹配角,纯度阈值、匹配阈值,含量来证明峰得纯度8、2—原样品方法20mg胶囊按照规定得方法进行分析标准品按照规定得方法进样分析8、3—酸降解方法:样品:称量大约等量20mg得样品,转移到50ml容量瓶中,加入20ml稀释剂,并超声处理10分钟。加lml得浓盐酸。放置18小时。用10N氢氧化钠中与到pH5、5。稀释到刻度。过滤。标准品:称量大约22mg得标准品,转移到50ml容量瓶中,加入20ml稀释剂,加2ml得盐酸。放置18小时。用10N氢氧化钠中与到pH5、5。稀释到刻度。8、4—碱降解方法:样品:称量大约等量20mg得样品,转移到50ml容量瓶中,加入20ml稀释剂,并超声处理10分钟。加lml得5N氢氧化钠。放置18小时。用5N盐酸中与到pH5、5。稀释到刻度。过滤。标准品:称量大约22mg得标准品,转移到50ml容量瓶中,加入20ml稀释剂,加2ml得5N氢氧化钠。放置18小时。用5N盐酸中与到pH5、5。稀释到刻度。8、5—氧化降解样品:称量大约等量20mg得样品,转移到50ml容量瓶中,加入