TCI 569-2024 先天畸形产前诊断分子标志物鉴定与应用技术规范

TICS11.020TCCSC05团 体 标 准T/CI569—2024先天畸形产前诊断分子标志物鉴定与应用技术规范Technicalspecificationsforidentificationandapplicationofmolecularmarkersforprenataldiagnosisofcongenitalmalformations2024-11-04发布 2024-11-04实施中国国际科技促进会  发布T/CI569T/CI569—2024PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANII目 次前言 II范围 1规范性引用文件 1术语和定义 1缩略语 2分子标志物的鉴定 2鉴定工作的流程及准备 2血液样本采集及处理 4血液样本的储存及运输 4分子标志物检测分析 5分子标志物的性能确认 5分子标志物的应用 6目标疾病 6适宜检测时间 6适用人群 6不适用人群 6临床服务步骤 6附录A（资料性） 知情同意书 8前 言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中国国际科技促进会提出并归口。本文件起草单位：中国医科大学附属盛京医院、复旦大学附属儿科医院、山东大学附属生殖医院、北京大学、上海市生物医药技术研究院。本文件主要起草人：袁正伟、黄国英、刘博洋、盛伟、李智文、马巍、魏晓伟、贾杉杉、丁东雪、顾卉、罗文婷、刘丹、曹嵩颖、严卫丽、吕军、王达辉、靳蕾、苗茂华、袁伟。T/CI569T/CI569—2024PAGEPAGE1先天畸形产前诊断分子标志物鉴定与应用技术规范规范性引用文件本文件没有规范性引用文件。术语和定义下列术语和定义适用于本文件。先天畸形congenitalmalformation胚胎发育紊乱引起的形态结构异常。注：最常见的先天畸形包括先天性心脏病、神经管缺陷、唇腭裂等。产前诊断prenataldiagnosis宫内诊断对胚胎或胎儿在出生前是否患有某种遗传病或先天性畸形而进行的诊断。注：产前诊断的目的在于早期发现可能影响胎儿健康的各种问题，以便提供相应的医疗建议和干预措施，确保母婴健康。分子标志物biomarker生物过程的指示物，可以指示判断生物过程、发病过程以及治疗过程中药理反应的分子。样本sample在某特定时间从受检者或捐献者采集到的组织、血液等标本。捐赠者donor按照法定的医学标准、程序和个人隐私法规确定后提供标本的人或尸体。注：有的国家用“受试者”或“个体”来表示捐赠者，尤其是在涉及到人体标本的时候。知情同意informedconsent医生必须为患者提供足够的相关信息，以便患者做出是否接受治疗、参与试验或医学研究活动的自主决策。知情同意书informedconsentform生物安全柜biosafetycabinet具备气流控制及高效空气过滤装置的操作柜。注：能有效降低实验过程中产生的有害气溶胶对操作者和环境的危害。标签label印在或贴在样本容器或包装上的手写、印刷的文字，图形，符号，以及一切说明物。先天性心脏病congenitalheartdisease注：（（分流（如法洛氏四联症、大血管错位）类。神经管缺陷neuraltubedefects由神经管发生和分化紊乱导致的畸形。注：在胚胎发育的第15日～第17日，神经系统开始发育，22日左右，神经褶的两侧开始互相靠拢，形成1个管道，24日～第26膨出、脑脊髓膜膨出、脊柱裂（显性脊柱裂、隐性脊柱裂）等。唇腭裂cleftlipandpalate表现为单独唇裂、单独腭裂或唇裂合并腭裂的口腔颌面部先天性畸形。缩略语下列缩略语适用于本文件。DNA:脱氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid）EDTA:乙二胺四乙酸（EthyleneDiamineTetraaceticAcid）ELISA：酶联免疫吸附分析（Enzyme-linkedImmunosorbentAssay）GC-MS：气相色谱质谱联用技术（GasChromatography-MassSpectrometry）ICA：免疫层析分析（ImmunochromatographicAssay）LAMP：环介导等温扩增技术（Loop-mediatedIsothermalAmplification）LC-MS：液相色谱质谱联用技术（LiquidChromatographyMassSpectrometry）MSD：多因子电化学发光分析（MesoScaleDiscovery）NMPA：国家药品监督管理局（NationalMedicalProductsAdministration）NMR：核磁共振波谱法（NuclearMagneticResonance）PBS：磷酸缓冲盐溶液（PhosphateBufferSaline）PCR：聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction）RNA:核糖核酸（RibonucleicAcid）SAT：实时荧光核酸恒温扩增检测技术（SimultaneousAmplificationandTesting）SIMOA：单分子免疫阵列分析（SingleMoleculeArray）SOPs：标准作业程序(StandardOperatingProcedure)分子标志物的鉴定鉴定工作的流程及准备鉴定工作流程制定3（含3家中心获取的标本中进行检测。图1为鉴定工作的基本流程图。图1 分子标志物鉴定基本流程图伦理审查及知情同意（应根据知情同意书的内容与捐赠者实验室人员实验环境实验室仪器pHPCRPCRPCR实验试剂及耗材NMPA样本信息及实验数据管理在开展样本收集工作之前，实验室及样本库需建立一套完善的信息收集、样本运送及数据管理SOPs：样本信息管理应确保完整记录捐赠者基本信息、诊疗记录以及样本操作记录；SOPs（CSVXMLPDFJPEG等），保存位置及备份时间等，以确保原始数据的安全性和患者隐私得到妥善保护。血液样本采集及处理血液样本采集操作安全防护：采集的生物样本都应认为是具有潜在感染性的。采样过程中，相关工作人员应做好采样时的安全防护措施，保证捐赠者、工作人员安全和样本不受污染。采样流程：选择采血管时宜充分考虑其抗凝剂对样本及后续分析物（包括核酸、蛋白和代谢物5mL～10mL10RNADNA4℃冰箱暂存，暂存时间不6h，且应在12h血液样本处理4160010min。离心后用移液器DNA，也可在室温条件下完成离心操作。4℃，16000min300µL/管～500µL/2游离核酸：应尽量在48h总蛋白：按上述要求离心，根据实验需求进行分装；100001h，4℃，1000004h，4100µLPBS3（透射电镜、粒径分析和外泌体表面标志蛋白）鉴定分离得到的外泌体颗粒；代谢物：按上述要求离心，根据实验需求进行分装。血细胞层的处理及应用：将分离的白细胞层轻微吹打混匀后，根据后续实验需求分装至若干2DNARNADNADNA RNARNA：利用红细胞裂解液裂解白细胞层中混杂的红细胞；4℃10000g10min，分离白细胞团；向白细胞团中加入缓冲液清洗细胞团，4℃条件下10000g离心10minRNA存液，吹打混合均匀；将含RNA的溶液按照研究需求进行分装，至少分为2管，以备份储存。血液样本的储存及运输血液样本的储存血液以储存处理后的血液成分样本为宜。储存样本应分装多管进行备份，储存于不同的储存设备中，以避免污染、反复冻融及意外情况发生后损毁所有样本。血液成分样本如储存期限不超过5年，可储存在-80（5应储存在-132血液样本的运输运输操作：样本的运输应由样本库的工作人员或有资质的生物物流公司来承担。全血样本应2℃～8℃，以避免后期处理时的反复冻融。血液成分2020℃以下，保证样本的生物学活性及细胞的完整性。分子标志物检测分析检测前样本质检DNA/蛋白的样本，应根据后续研究需求，提取DNA/蛋白并评估其完整性（降解程度）、纯度和浓度。RNARNA（RIN）、浓度和纯度。注1：RIN：RNA分子完整性指数。根据RNA毛细管电泳的结果计算得出的值，从10到1代表RNA从完整到不同程度的降解，反应了RNA的完整/降解程度。注2：28S/18S：真核生物rRNA中28SrRNA与18SrRNA的比值，反映真核生物中提取的RNA28S、18S代表组成rRNA和s～13s称为一个Svedberg单位，简写S。选择检测平台ELISAMSDSIMOA、LuminexElla代谢物类生物标志物的检测平台：对于脂类、多糖、氨基酸、脂肪酸和维生素等内源性代谢NMR、LC-MSGC-MSPCRLAMPSATICA、PCR检测操作质控样品设置：为了保证检测体系的稳定性和重复性应设置质控样品。实验室可根据检测项设置实验组与对照组：包括样本分组、阴性对照、阳性对照和校准品等。（SOPs）重复实验：进行必要的重复实验，以验证结果的重复性。检测结果分析2名及以上的专业人员进行双盲统计分析及可视化，相关结果应结合生物学知识，进行解释，并通过实验验证。分子标志物的性能确认精密度：指同一样本在多次检测中结果的一致程度，包括重复性和再现性两个方面。其中重复性指在同一条件下（相同环境、相同操作人员、相同检测流程、相同仪器）多次测量同一分子标志物，测定结果的一致程度；再现性指由不同操作人员、不同仪器（相同型号）和不同批试剂进行同一分子标志物测量结果的一致性程度。准确性：所检测的分子标志物预测的胎儿畸形情况与实际情况的一致性程度。对准确性的评价可通过检测队列样本进行验证，包括孕有先天畸形胎儿的孕妇血液样本及正常胎儿孕妇血液样本，评价范围应包括具有明确临床意义的分子标志物（AFP）。特异性：确认标志物与特定疾病状态相关，而不是与其他疾病或正常状态混淆。灵敏度：评估标志物检测疾病状态的能力，即所有病例中被正确识别的比例。阳性预测值（PPV）：在标志物阳性的情况下，实际患有疾病的概率。阴性预测值（NPV）：在标志物阴性的情况下，实际未患有疾病的概率。可报告范围：检测方法能够准确、可靠地报告这些分子标志物浓度的范围等。分子标志物的应用目标疾病适宜检测时间孕妇外周血先天畸形产前诊断分子标志物筛查应在产前超声检查明确胎儿畸形前进行，适宜孕周为8+0周～20+0周。适用人群早、中孕期产前筛查高风险；预产期年龄≥35体重指数>40kg/；经过体外受精—胚胎移植方法受孕；双胎及多胎妊娠；有先天畸形相关疾病家族史；有介入性产前诊疗禁忌证者（如先兆流产、发烧、出血倾向、慢性病原体感染活动期、孕妇Rh）。不适用人群有下列情形孕妇进行检测时，可能严重影响结果正确性。包含：孕周<801有基因遗传病家族史或提示胎儿罹患基因病高风险；孕期合并恶性肿瘤；医师认为有显著影响结果正确性的其他情形。临床服务步骤检测前咨询及知情同意告知本技术目标疾病；告知本技术检出率、假阳性和假阴性率，强调该检测结果不是产前诊疗结果，高风险结果应进一步检查以确诊，以及检测费用与步骤等；告知本技术有因检测失败重新采血可能；告知影响该检测正确性相关原因；医师对病例个案认为需要说明的相关问题。检测信息采集待检血液采集血液样本检测5.2～5.4临床报告出具发放自采血至发放临床报告时间不超出1510送检单位和送检医师姓名；孕妇基础信息，包含姓名、年龄、末次月经时间、孕周等；标本信息，包含标本编号、标本状态、采血日期等；检测项目和检测方法；目标疾病检测值、参考范围、低风险或高风险结果；结果描述和提议；检测单位、检测时间、检测人员及审核人员署名；临床报告审核发放时间、审核医师署名。检测后咨询及处理对于目标疾病以外其他异常高风险结果，产前诊疗机构应通知孕妇本人或其家属进行深入咨询和诊疗。妊娠结局随访标本和资料信息保留附 录 A（资料性）知情同意书捐赠者知情同意书包含两部分，其中捐赠者须知模板见图A.1，知情同意签名模板见图A.2。第一部分捐赠者须知项目名称：×××××××××××× 项目收集单位：×××××××××××××项目简介：×××××××××××××××××××××××××××我们在征得您同意的情况下，收集您的血液××mL。您享有的权益：自由、自愿选择留存您的生物样本给××××××样本库，您可以在任何时候无您需要做的事：告知样本采集人员有关自身或家族史、当前身体状况、是否正在使用某些药物、是否曾经参与其他研究、目前是否正在参与其他研究等信息。收益：您的样本将被用于保存及科学研究，我们希望基于您的样本所得到的研究结果未来将对疾病的诊治有所帮助。您将不会分享样本的研究成果和成果产生的相关收益（另有协议约定的情况除外）。风险与不适：抽取血液样本，我们按照医院常规采血流程进行，若出