T-BPCT 007-2024 禽蛋中磺胺类和喹诺酮类兽药残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS67.120.20T/BPCT007-2024禽蛋中磺胺类和喹诺酮类兽药残留量的测定液相色谱-串联质谱法Determinationofsulfonamidesandquinolonesveterinarydrugsinpoultryegg—Liquidchromatographytandemmassspectrometrymethod2024-09-27发布I本标准按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化标准的结构和起草规则》给出的规则起草。本标准由北京理化分析测试技术学会提出并归口。本标准负责起草单位：北京市科学技术研究院分析测试研究所（北京市理化分析测试中心）。本标准主要起草人：冯月超，贾丽，刘艳，王建凤，丁奇，王颖，周欣燃。1本标准规定了禽蛋中23种磺胺类和18种喹诺酮类兽药残留的液相色谱-串联质谱检测方法。本标准适用于鸡蛋、鸭蛋、鹅蛋、鹌鹑蛋等生鲜禽蛋中喹诺酮类和磺胺类药物的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过本文的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中凡是注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。3术语和定义本标准没有需要界定的术语和定义。4方法原理禽蛋中的磺胺类和喹诺酮类化合物，用含1%乙酸的乙腈溶液提取，提取液通过滤过型固相萃取柱净化，净化液吹至近干后复溶。采用液相色谱串联质谱法测定，基质添加外标法定量。5试剂和材料以下所用的试剂除另有说明外，均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。5.1试剂5.1.1乙腈（CH3CN）：色谱纯。5.1.2乙酸（CH3COOH）：色谱纯。5.1.3甲酸（HCOOH）：色谱纯。5.2溶液配制5.2.1提取液：取乙酸10mL，用乙腈稀释至1000mL，混匀即得1%乙酸乙腈溶液。5.2.20.1%乙酸水溶液：取1mL乙酸用水稀释至1000mL，混匀。5.2.3复溶液：取上述0.1%乙酸水溶液（5.2.2）90mL与10mL乙腈，混匀即得0.1%乙酸水-乙腈溶液（9:1，v:v）。25.3标准品标准品：41种被测物（包括23种磺胺类和18种喹诺酮类）的中英文名称、缩写、CAS号等具体见附录A中的表A.1，纯度均大于95%。5.4标准溶液配制5.4.1标准标储备液：精密称取41种被测物标准品适量（相当于各被测物的有效成分10.0mg），加入少量乙腈和几滴甲酸使其溶解并用乙腈定容至50mL，配制成浓度为200μg/mL的标储备液。-18℃冷冻避光可保存12个月。5.4.2混合标准储备液：将被测物按照种类分为两组，用乙腈分别配制成被测浓度均为5μg/mL的23种磺胺混合标准储备液和18种喹诺酮的混合标准储备液。-18℃冷冻避光可保存3个月。5.4.3混合标准中间液：取两组混合标准储备液（5.4.2）用乙腈稀释配置成1μg/mL的标准混合中间液。5.5材料5.5.1针筒式滤膜（有机系，尼龙材质，0.22μm）；5.5.2滤过型兽药残留净化柱(1)。6仪器和设备6.1液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源；6.2离心机；6.3恒温水浴氮吹仪；6.4多管涡旋混匀仪；6.5分析天平：感量0.01mg和0.01g。7试样制备生鲜禽蛋4℃冷藏保存；取适量新鲜禽蛋去壳均质，均质后的试样-18℃冷冻保存。8测定步骤8.1样品前处理方法并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果3样品称样1.0g（精确至0.01g）于50mL螺纹盖离心管中，加入10mL提取液（5.2.1），振荡15min，6000r/min离心5min。取5mL上清液过兽药残留净化柱（5.5.2），以不大于1滴/秒的流速收集流出液，于45℃以下水浴中氮气吹至近干，加入1mL复溶液（5.2.3），涡旋1min，过0.22μm有机滤膜后待测。8.2空白试验不称取试样，按8.1的步骤做空白实验。8.3基质添加标准曲线的制备称取不含被测物的基质空白禽蛋试样1.0g，向其中加入混合标准中间液（5.4.3）0μL、2μL、5μL、10μL、20μL、50μL，混匀后，按照8.1的方法前处理，复溶过膜后得到系列基质加标标准工作液，相当于标准工作液浓度分别为0ng/mL、1ng/mL、2.5ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL，即试样中的含量分别为0µg/kg、2µg/kg、5μg/kg、10μg/kg、20μg/kg、50μg/kg。8.4测定8.4.1液相色谱参考条件a）色谱柱：BEHC18（1.7µm，2.1×100mm）或相当者；b）柱温：30℃;c）进样量：5µL；e）流速：0.3mL/minf）梯度洗脱程序参考表1。表1液相色谱洗脱梯度表时间（min）乙腈（%）0.1%乙酸水溶液（%）0.05955952.0907.09005955958.4.2质谱参考条件a）离子源：电喷雾离子源，正离子扫描（ES+）；b）检测方式：多反应监测（MRM）；c）毛细管电压：1.5kV；4d）离子源温度：150℃;e）脱溶剂温度：450℃;f）脱溶剂气流量：800L/hr；g）锥孔气流量：150L/hr；h）碰撞气体为氩气；i）其它质谱参数参考附录B中的表B.1。8.4.3定性测定用液相色谱-串联质谱联用法对试样进行定性判定，在相同试验条件下，样液谱图中应呈现定量离子对和定性离子对的色谱峰，被测物质的质量色谱峰保留时间与标准溶液中对应物质的色谱峰保留时间偏差在±2.5%之内；试样色谱图中所选择的监测离子对的相对丰度与相当浓度标准溶液的离子相对丰度比的偏差不超过表2规定范围，则可以判断试样中存在对应的目标物质。表2定性确证时相对离子丰度的最大允许误差相对离子丰度（%）>5020~50（含）10~20（含）≤10允许的相对偏差（%）±20±25±30±508.4.4定量测定取基质添加标准溶液和试样溶液，作单点或多点校准，按外标法，以峰面积计算。基质添加标准溶液及试样溶液中试样中被测物的峰面积应在仪器检测的线性范围之内，试样中被测物含量超出线性范围时应用基质空白液进行适当倍数稀释后再进行分析。基质添加标准溶液中总离子流图和特征离子质量色谱图见附录C中图C.1和图C.2。9结果计算和表述结果按式（1）计算：X=........................................（1）式中：X——试样中被测组分含量，单位为：微克/千克(μg/kgm——试样的称样量，单位为：克（g）；C——从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为：纳克/毫升（ng/mLV1——复溶液的体积，单位为：毫升（mL）；V2——移取提取液上清液的体积，单位为：毫升（mL）；V3——加入提取液的体积，单位为：毫升（mL）。注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留一位小数。10方法准确度、精密度和灵敏度10.1准确度本方法41种被测物在2μg/kg~50μg/kg添加浓度水平上的回收率范围是60%~120%。10.2精密度本方法的批内相对标准偏差≤20%，批间相对标准偏差≤20%。10.3灵敏度当称样量为1.0g时，本方法磺胺类和喹诺酮类检出限均为0.5μg/kg，定量限均为2.0μg/kg。附录A（资料性）41种被测物的中英文名称、缩写、CAS号、分子式和相对分子质量本方法41种被测物的中英文名称、缩写、CAS号见表A.1。表A.141种被测物的中英文名称、缩写、CAS号、分子式和相对分子质量序号中文名称英文名称缩写CAS号分子式相对分子质量1磺胺索嘧啶SulfisomidineSIM515-64-0C12H14N4O2S278.32磺胺脒SulfaguanidineSGN57-67-0C7H10N4O2S214.23磺胺醋酰SulfacetamideSAA144-80-9C8H10N2O3S214.24磺胺多辛SulfadoxinSDX2447-57-6C12H14N4O4S310.35磺胺地索辛SulfadimethoxineSDT122-11-2C12H14N4O4S310.36磺胺对甲氧嘧啶SulfameterSMD651-06-9C11H12N4O3S280.37磺胺甲氧嗪SulfamethoxypyridazineSMP80-35-3C11H12N4O3S280.38磺胺间甲氧嘧啶SulfamonomethoxineSMM1220-83-3C11H12N4O3S280.39磺胺二甲嘧啶SulfadimidineSDM57-68-1C12H14N4O2S278.3磺胺鯻唑SulfamoxolSMO729-99-7C11H13N3O3S267.3磺胺异鯻唑SulfisoxazoleSFZ127-69-5C11H13N3O3S267.3磺胺硝苯SulfanitranSAN122-16-7C14H13N3O5S335.3磺胺苯吡唑SulfaphenazoleSPA526-08-9C15H14N4O2S314.4磺胺喹沙啉SulfaquinoxalineSQX59-40-5C14H12N4O2S300.3甲氧苄啶TrimethoprimTMP738-70-5C14H18N4O3290.3磺胺氯达嗪SulfachloropyridazineSCP80-32-0C10H9ClN4O2S284.7磺胺苯酰SulfabenzamideSBA127-71-9C13H12N2O3S276.3磺胺甲二唑SulfamethizoleSMT144-82-1C9H10N4O2S2270.3磺胺甲嘧啶SulfamerazineSMR127-79-7C11H12N4O2S264.320磺胺噻唑SulfathiazoleSTZ72-14-0C9H9N3O2S2255.321磺胺甲鯻唑SulfamethoxazoleSMZ723-46-6C10H11N3O3S253.322磺胺嘧啶SulfadiazineSDZ68-35-9C10H10N4O2S250.3表A.123种磺胺类和18种喹诺酮类的中英文名称、缩写、CAS号、分子式和相对分子质量（续）序号中文名称英文名称缩写CAS号分子式相对分子质量23磺胺吡啶SulfapyridineSPD144-83-2C11H11N3O2S249.324奥比杀星OrbifloxacinORB113617-63-3C19H20F3N3O3395.425氟罗杀星FleroxacinFLE79660-72-3C17H18F3N3O3369.326丹诺沙星（达氟沙星）DanofloxacinDAN112398-08-0C19H20FN3O3357.427环丙沙星CiprofloxacinCIP85721-33-1C17H18FN3O3331.328依诺沙星EnoxacinENX74011-58-8C15H17FN4O3320.329诺氟沙星NorfloxacinNOR70458-96-7C16H18FN3O3319.330氟甲喹FlumequinFLU42835-25-6C14H12FNO3261.231奥索利酸OxolinicacidOXO14698-29-4C13H11NO5261.232萘啶酸NalidixicacidNAL389-08-2C12H12N2O3232.233双氟沙星DifloxacinDFX91296-86-5C21H19F2N3O3399.434斯帕沙星SparfloxacinSPX110871-86-8C19H22F2N4O3392.435沙拉沙星SarafloxacinSFX91296-87-6C20H17F2N3O3385.436氧氟沙星OfloxacinOFX82419-36-1C18H20FN3O4361.437恩诺沙星EnrofloxacinENR93106-60-6C19H22FN3O3359.438洛美沙星LomefloxacinLOM98079-52-8C17H19F2N3O3351.439培氟沙星PerfloxacinPEF70458-92-3C17H20FN3O3333.440吡哌酸PipemidicacidPPA51940-44-4C14H17N5O3303.341西诺沙星CinoxacinCIX28657-80-9C12H10N2O5262.2（资料性）41种被测物的质谱参数41种被测物的质谱参数见表B.1表B.141种被测物的质谱参数（带*的为定量离子）序号缩写保留时间（min）母离子(m/z)子离子(m/z)锥孔电压碰撞能1SIM3.28279.22SGN215.1156.0*/92.0223SAA3.04215.1156.0*/92.08/204SDX8.69311.2425SDT9.37311.2156.0*/92.05020/326SMD6.22281.2287SMP6.61281.2156.0*/108.0468SMM281.2156.0*/92.0329SDM6.03279.2SMO5.78268.2156.0*/92.028SFZ9.02268.2156.0*/92.034SAN9.82336.5156.0*/134.130SPA9.42315.2158.2*/92.028/34SQX9.38301.2156.0*/108.036TMP5.21291.3230.2*/123.16222/24SCP8.26285.2156.0*/92.032SBA9.22277.226SMT6.43271.2156.0*/108.022SMR4.69265.220STZ4.22256.1156.0*/92.02221SMZ8.77254.2156.0*/92.022SDZ3.51251.2表B.141种被测物的质谱参数（带*的为定量离子）（续）序号缩写保留时间（min）母离子(m/z)子离子(m/z)锥孔电压碰撞能23SPD4.43250.2156.0*/92.03224ORB7.75396.6295.2*/226.14822/4425FLE5.82370.6269.3*/194.15226/4426DAN7.13358.196.1*/82.04222/3627CIP6.27332.1245.0*/231.04022/3828ENX5.39321.1234.0*/206.05022/3