苹果苗木传带病虫害检测与防控技术规范

1苹果苗木传带病虫害检测与防控技术规范本标准适用于山东省苹果苗木繁育期间，随苗木传带病虫NY/T2281苹果病毒检测技术规范苗传病虫害(SeedlingTransmitt病毒与类病毒（AppleVirusandVi造成树体生长发育不良和严重危害的病毒与类病毒，包括锈果类病毒(ASSVd)、坏死花叶病毒在常规栽培品种上，能造成明显症状和严重危害的病毒或类病毒，主要为锈果类病毒(ASSVd)、坏2非脱毒材料（NonVirus-Fre指没有经过脱毒处理，不潜带有非潜隐病毒，但带有不超过一种潜隐病毒的繁殖材外源病虫害（ExternalSourceP4苗圃地选择4.1苗圃位置与地块宜选择开阔通风、灌溉与排水条件良好、土壤肥沃地块作育苗地。周围5km范围内不能有桧柏等刺柏科植物。及时销毁废弃的苗木、接穗、病虫栽5.1种子从健康、无毒的母本树上采集。采种前对采种母本树进行病毒检测，发现带毒母株5.2采穗圃35.3材料获取脱毒材料；或筛选含容易脱除病毒的植株，进行脱毒处理，获得无毒材料或非脱毒以取样单元为单位密封于塑料袋中，标记取样用0℃~4℃的冷藏箱短期保存(2周内)；长期保存时，需先将样品用液氮速冻后，放于负80℃的低温冰箱内。嫩梢和嫩芽装入保温箱内，加冰块密封后运输；枝条可密封于塑袋中保湿运6.5.2筛选非脱毒材料时，首先检测检测混合样品时，可分成多个样品检测。RT-PCR检测技术按附录A的方法进行，免疫学检测和生物学检苹果苗木繁育期，重点防控腐烂病、轮纹病、苹果绵蚜和保的油漆作为基质，混入有效成份为0.3%～0.4冬春季室内嫁接的苗木，嫁接后立即喷淋有效成份含量为0.03%～0.05%的吡唑醚菌酯或0.3%~喷3～5波美度的石硫合剂、1%～2%多量式波尔多液或95%机油乳剂80倍～100倍药液等。生长季节，于5月、6月份和9月、10月份绵蚜迁飞期，用诱虫板监测迁飞成虫，发现有绵蚜迁入时，及时喷撒杀虫剂。若绵蚜已在苗圃内定殖，用药剂灌根或树雨水少的季节或年份，结合其他病害防治喷施杀菌剂；遇雨量大于10mm，持续时间长于2雨，雨后及时喷施内吸性杀菌剂。多雨季节或连续阴雨期，每7d～10d喷施一次杀菌剂，内吸性杀菌起苗后剔除染有病虫和生长不良的苗木，用苗木处理剂处理苗木，或用有效成份为0.03%～0.05%吡唑醚菌酯或0.3%～0.5%甲基硫菌灵药液，混加0.05%～0.1%吡虫啉或0.3%～0.5%毒死蜱，喷淋整株苗木，直到根部有药液流下为止，并保湿24h～4浇足水后，移入温度为20℃~30℃的光照环境中培养，后期不再浇水。苗木萌芽后检查苗木发芽率、5增DNA序列。这是一个指数增长的过程，上一轮的扩增产物又可作为下一轮扩增的模板，使其成为检测A.2.1Trizol试剂：由苯酚和硫氰酸胍配制而成的单相的快速抽提总RNA--380ml/L，硫氰酸胍盐（0.8M）--118.16g/L，硫氰酸铵（0.4M）--76pH5）--33.4ml/L，甘油50ml，加水补充至1A.2.4氯仿，异戊醇，异丙醇、无水乙醇，反转录酶，DNAA.3仪器设备A.4操作步骤A.4.1.250mg～100mg苹果组织置注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的A.4.1.3研磨液室温放置5min，然后每1mlTrizol加入0.2ml氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离A.4.1.4取上层水相于一新的离心管，加入等体积异丙醇，室温放置10min，12000r/min离心10miA.4.1.5弃去上清液，加入1ml的70%乙醇，涡旋混匀，7500r/min离心5mi6A.4.1.7将RNA溶于DEPC处理过的无菌水中，可55℃~60℃水浴10min，增加RNA的溶解度。RNA可进行mRNA分离，或贮存于70%乙醇并保存于负A.4.2核酸检测F:GAGARTTTCAGTTTGCTR:AGTCTACAGGCTATTTATTATF:GGAATTTCACACGACTCCTAACCCTCCR:CCCGCTGTTGGATTTGATACAF:TGCCTCAAAGTACACCCCTF:ATGGTGTGCAATCGCTGR:CATCGACCATAAGGATF: