微生物的培养技术及应用34课时

第2节

微生物的培养技术及应用第二课时

微生物的选择培养和计数学习目标010203通过对土壤中分解尿素的细菌进行分离和计数，理解并掌握微生物计数的方法。（科学探究）通过实例，理解各类微生物都能适应其生活环境。（生命观念）根据微生物的代谢类型，配制选择培养基，总结分离微生物的过程和测定微生物数量的常用方法。（科学思维）温故知新：酵母菌的纯培养酵母菌的纯培养2.接种和分离酵母菌1.制备培养基3.培养酵母菌①配制培养基（马铃薯、葡萄糖、琼脂、水）②灭菌③倒平板（在酒精灯火焰附近操作）培养基：湿热灭菌（高压蒸汽灭菌锅）培养皿：干热灭菌（干热灭菌锅）用接种环在固体培养基上用平板划线法接种平板倒置，放入28℃左右的恒温培养箱培养问题1：自然界中微生物数量繁多，种类庞杂，要想从中分离出需要的特定微生物并不容易，尤其当要分离的微生物在混合菌群中不是优势种群时，仅通过一般的平板划线法或稀释涂布平板法很难实现。该怎么办呢？选择培养基应运而生。PCR是一种在体外DNA复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。（一）科学实例：寻找耐高温的DNA聚合酶

黄石公园（视频）1.筛选原因：水生栖热菌能在70-80℃高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。耐高温的酶耐高温生物体高温环境（热泉、火山口）寻找寻找2.筛选思路：一、选择培养基文山市第一中学选择培养基微生物的选择培养微生物的数量测定寻找耐高温的DNA聚合酶（一）科学实例：3.启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。耐寒微生物耐热微生物石油分解菌问题2：这对在实验室中选择培养特定的微生物有什么启示？如何筛选？什么是选择培养基？文山市第一中学选择培养基微生物的选择培养微生物的数量测定文山市第一中学选择培养基微生物的选择培养微生物的数量测定问题2：这对在实验室中选择培养特定的微生物有什么启示？如何筛选？什么是选择培养基？阅读教材P16第2段，并思考以下问题：问题3：怎么证明一个选择培养基具有选择性呢？问题4：如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？（二）实验室中微生物筛选的原理：

人为提供

的条件（包括

、

和

等），同时

。有利于目的菌生长抑制或阻止其他微生物的生长营养温度pH（三）概念：

在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。（四）类型：在培养基中加入某种化学物质改变培养基中的营养成分改变微生物的培养条件文山市第一中学选择培养基微生物的选择培养微生物的数量测定+氨苄青霉素具有抗氨苄青霉素能力的菌落没有氨苄青霉素抗性的细菌在培养基中加入某种化学物质培养基+氨苄青霉素培养基没有抗氨苄青霉素能力的菌落被淘汰怎样选择出抗氨苄青霉素能力的细菌?问题3：怎么证明一个选择培养基具有选择性呢？文山市第一中学选择培养基微生物的选择培养微生物的数量测定

应该设置基础培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基）或完全培养基作为对照，若基础培养基或完全培养基中生长的菌落数菌多于该选择培养基，则该选择培养基具有选择性。基础培养基选择培养基

问题3：怎么证明一个选择培养基具有选择性呢？问题4：如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？文山市第一中学选择培养基微生物的选择培养微生物的数量测定文山市第一中学选择培养基微生物的选择培养微生物的数量测定不同类型选择培养基的应用不加碳源自养微生物不加氮源固氮微生物加入青霉素酵母菌和霉菌(青霉素能杀死细菌、放线菌)加高浓度食盐金黄色葡萄球菌石油是唯一碳源能消除石油污染的微生物任务一：请同学们自主学习教材P16页，小组合作思考讨论完成问题。

1.如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？文山市第一中学选择培养基微生物的选择培养微生物的数量测定选择培养基配方的设计思考.讨论尿素含氮量高，化学性质稳定，是一种重要的农业氮肥，尿素施入土壤后，被某些细菌分解成NH3，NH3再转化成NO3-、NH4+等才能被植物吸收。土壤中尿素分解菌之所以能将尿素分解，是因为它们能合成脲酶：尿素的立体结构问题4：如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？CO(NH2)2+H2O2NH3+CO2

脲酶文山市第一中学选择培养基微生物的选择培养微生物的数量测定选择培养基配方的设计思考.讨论问题1：如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？

设计一种选择培养基,用尿素作为唯一氮源,可以将分解尿素的细菌分离出来。问题2：该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？这种培养基与普通培养基相比，只是用尿素作为唯一氮源，培养基的其他营养成分基本相同。文山市第一中学选择培养基微生物的选择培养微生物的数量测定牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g琼脂20.0g蒸馏水定容到1000ml培养基一KH2PO41.4gNaH2PO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g琼脂15.0g蒸馏水定容到1000ml培养基二1.从物理性质来讲，两者属于_____培养基，判断依据是_______________；该类培养基的主要用途为_____________________。2.从目的用途上来讲，

属于选择培养基，目的是为了获得

。3.两种培养基共有的培养基成分有：

。固体添加了凝固剂琼脂分离、鉴定、计数、保存培养基二能分解尿素的微生物碳源、氮源、无机盐、水课堂练习

问题3：仅通过选择培养基可以知道1g土壤中有多少能分解尿素的细菌吗？二、微生物的选择培养1g土壤中有多少能分解尿素的细菌？（一）方法：分离：获得分解尿素的细菌的纯培养物计数：测定分解尿素的细菌的数量问题1：由于土壤细菌的数量庞大，怎么获得要想得到特定微生物的纯培养物呢？稀释涂布平板法

是将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。1.概念：文山市第一中学选择培养基微生物的选择培养微生物的数量测定任务二：请同学们自主学习教材P17-18页，观看稀释涂布平板法操作视频，小组合作思考讨论完成问题。

1.培养时要将一个未接种的培养基和一个已接种的培养基放在一起培养为什么？2.实验注意事项有哪些？文山市第一中学选择培养基微生物的选择培养微生物的数量测定2.步骤：（1）梯度稀释菌液（2）涂布平板文山市第一中学微生物的选择培养选择培养基

细菌宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝大部分分布在距地表3~8cm的土壤层。铲去表层土3cm左右，取样，将样品装入事先准备好的信封中。①土壤取样

取土样时用的铁铲和取样袋在使用前都需要灭菌。操作完成后，一定要洗手。2.步骤：（1）梯度稀释菌液文山市第一中学选择培养基微生物的选择培养微生物的数量测定

将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。1×101mL1mL1mL1mL1mL1mL1×1021×1031×1041×1051×1061×1079mL无菌水90mL无菌水10g②样品的稀释2.步骤：（1）梯度稀释菌液文山市第一中学选择培养基微生物的选择培养微生物的数量测定①取0.1mL菌液滴加到培养基表面1×107移液枪②将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中③将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀2.步骤：（2）涂布平板文山市第一中学微生物的选择培养微生物的数量测定选择培养基21恒温培养箱稀释103倍稀释104倍稀释105倍空白对照待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30-37℃的恒温培养箱中，培养1-2d。2.步骤：（3）菌落培养问题2：培养时要将一个未接种的培养基和一个已接种的培养基放在一起培养为什么？培养未接种的培养基的作用是对照。文山市第一中学选择培养基微生物的选择培养微生物的数量测定3.注意事项：注意事项三注意事项四注意事项一注意事项二将涂布器从酒精中取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后再放在火焰上灼烧；不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免引燃酒精。过程中所有操作都应在酒精灯火焰旁进行10g土样加入盛有90mL无菌水中后，已稀释10倍，在计算时，不要忽略；由于使用的是选择培养基，所以一般情况下，获得的单菌落即目的菌，但因为有些微生物可以利用目的菌的代谢产物来生长繁殖，所以还需要进一步验证文山市第一中学选择培养基微生物的选择培养微生物的数量测定主要方法稀释涂布平板法平板划线法主要步骤接种工具菌体获取能否用于计数共同点稀释涂布平板法和平板划线法的比较系列梯度稀释操作和涂布平板操作接种环在固体培养基表面连续划线涂布器接种环从适宜稀释度的平板上的菌落中挑取菌体在具有显著的菌落特征的区域挑取菌体可以计数，但是操作复杂，需涂布多个平板不能计数使培养基上形成由单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体——菌落文山市第一中学选择培养基微生物的选择培养微生物的数量测定文山市第一中学微生物的数量测定选择培养基微生物的选择培养三、微生物的数量测定（一）统计菌体数目：1.稀释涂布平板计数法——间接计数法2.显微镜直接计数法——直接计数法稀释103倍稀释104倍稀释105倍空白对照血细胞/细菌计数板文山市第一中学微生物的数量测定选择培养基微生物的选择培养【任务三】阅读课本18页第2-4段，明确微生物的数量测定中的方法，并对每种方法进行分析。1.间接计数法—稀释涂布平板法（1）原理：当样品的稀释度足够

时，培养基表面生长的一个

，来源于

中的一个

。通过计数平板上的

数，就能推测出样品中大约含有多少

。样品的稀释度将直接影响平板上的菌落数目高菌落样品稀释液活菌菌落活菌文山市第一中学选择培养基不同微生物在土壤中含量不同，分离不同的微生物采用不同的稀释度，以保证获得菌落数在30～300之间适于计数的平板。测细菌数：一般用104、105、106稀释液。测放线菌：一般用103、104、105稀释液。测真菌数：一般用102、103、104稀释液。思考：在初次实验中，对于稀释的范围没有把握，怎样做才能保证从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数？选用稀释范围更大的稀释液进行平板培养样品稀释涂布平板（补充）微生物的数量测定微生物的选择培养1.稀释涂布平板计数法——间接计数法（2）计数原则：选择菌落数为30~300的平板计数。同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值统计的菌落往往比活菌的实际数目低统计的结果一般用菌落数而不是活菌数。恰当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。文山市第一中学选择培养基微生物的选择培养微生物的数量测定缺点：因为当两个或多个细胞连在一起时，繁殖后形成的还是一个菌落。文山市第一中学微生物的数量测定选择培养基微生物的选择培养（3）.计算每克样品中的菌落数＝(C÷V)×MC代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。

实例1：甲同学做此实验在稀释倍数105获得3个平板，菌落数分别是80、90、100，涂布平板时均使用0.1ml菌液，试计算每克土壤中可以分离尿素的细菌数目？（80+90+100）/30.1×105=9×107个文山市第一中学微生物的数量测定选择培养基微生物的选择培养课堂训练

2.某同学在稀释倍数为106

的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每g样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL)()A.2.34×108B.2.34×109C.234D.23.41.用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中得到以下几种统计结果，其中正确的是()A.涂布了1个平板，统计的菌落数是230B.涂布了2个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238C.涂布了3个平板，统计的菌落数分别是13、234和254，取平均值167D.涂布了3个平板，统计的菌落数分别为210、240和250，取平均值233文山市第一中学微生物的数量测定选择培养基微生物的选择培养2.直接计数—显微镜直接计数法①原理：利用细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。②缺点：不能区分死菌与活菌；个体小的细菌在显微镜下难以观察；（“染色排除法”）①工具：血球计数板②方法：抽样检测法探究培养液中酵母菌种群数量的变化探究.实践实验设计（4）酵母菌计数计数板正面方格网计数室

每块计数板由H形凹槽分为2个同样的计数区。每个计数区分为9个大方格。规格一：25×16型A1A2A3A4A5规格二：16×25型A1A3A2A4实验设计（4）酵母菌计数每个计数室共有400小格，总容积为0.1mm3。A1A2A3A4A51mL=103mm3计数一个小方格内酵母菌数量，再以此为依据估计培养液中酵母菌总数。1mL培养液中细胞个数：=小方格中细胞数量的平均值×400×104×稀释倍数探究培养液中酵母菌种群数量的变化探究.实践每个计数室共有400小格，总容积为0.1mm3。规格二（25×16）：1mL培养液中细胞个数＝中方格中酵母菌数量的平均值×25×104×稀释倍数规格一（16×25）：1mL培养液中细胞个数＝中方格中酵母菌数量的平均值×16×104×稀释倍数探究培养液中酵母菌种群数量的变化探究.实践16×25型计数板25×16型计数板实战训练

1.用血球计数板对培养液中酵母菌进行计数，若计数室为1mm×1mm×0.1mm方格，由400个小方格组成。若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有

个。2×108

解析：根据公式：5×400×10000×10＝2×108

实战训练

2.若使用的血细胞计数板(规格为1mm×1mm×0.1mm)每个计数室分为25个中方格，每个中方格又分为16个小方格，将样液稀释100倍后计数，发现计数室四个角及中央共5个中方格内的酵母菌总数为20个，则培养液中酵母菌的密度为

个/mL。1×108解析：根据公式：（20÷5)×25×10000×100＝1×108探究.实验土壤中分解尿素的细菌的分离和计数（P18-19)一提出问题土壤中含有能分解尿素的细菌，我们如何分离它们？每克土壤样品究竟含有多少这样的细菌？二作出假设三实验原理利用以“尿素作为唯一氮源”的选择培养基，可以分离。绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。文山市第一中学选择培养基微生物的选择培养微生物的数量测定文山市第一中学微生物的数量测定选择培养基微生物的选择培养任务四：请同学们自主学习教材P18-19页，观看土壤中分解尿素的细菌的分离和计数视频，小组合作思考讨论完成问题。

1.结合对照组，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。2.你是否获得了某一稀释度下菌落数为30～300的平板在这一稀释度下，是否至少有2个平板的菌落数接近？3.你统计的每克土样中能分解尿素的细菌的菌落数是多少？与其他同学统计的结果接近吗？如果差异很大，可能是什么原因引起的？文山市第一中学微生物的数量测定选择培养基微生物的选择培养1.实验流程：样品稀释涂布平板微生物的培养与观察菌落计数土壤取样制备培养基1、实验流程：样品稀释涂布平板微生物的培养与观察菌落计数土壤取样制备培养基①要求：富含有机质、酸碱度接近中性且潮湿的土壤②取样土层：距地表3~8cm的土壤层以尿素为唯一氮源（选择培养基）在酒精灯火焰旁称取土壤10g，放入90mL无菌水的锥形瓶中，震荡使土壤与水充分混合，将细菌分散，制成101倍土壤稀释液。用1支1mL无菌吸管从中吸取1mL土壤悬液注入盛有9mL无菌水的试管中，吸取三次，充分混匀，制成102倍的土壤稀释液。以此类推，制成103、104、105、106、107倍的土壤稀释液。文山市第一中学选择培养基微生物的选择培养微生物的数量测定一浸、二滴、三烧、四涂1、实验流程：样品稀释涂布平板微生物的培养与观察菌落计数土壤取样制备培养基图中的1、2、3平板是选择培养基，4平板为牛肉膏蛋白胨培养基，以判断选择培养基是否具有筛选作用；另外，还要有两个对照，即不涂布稀释液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基以验证培养基中是否含有杂菌。文山市第一中学选择培养基微生物的选择培养微生物的数量测定1、实验流程：样品稀释涂布平板微生物的培养与观察菌落计数土壤取样制备培养基培养条件：不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。

细菌一般在30～37℃的温度下培养1～2d。观察：每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果。防止因培养时间不足而导致菌落数目遗漏。结果：一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，如形状、大小和颜色等。注意事项：本实验使用的平板和试管较多，为了避免混淆，最好在使用前做好标记。例如，在标记培养皿时应该注明组别、培养日期和平板上培养样品的稀释度等。选择培养基文山市第一中学微生物的选择培养微生物的数量测定1、实验流程：样品稀释涂布平板微生物的培养与观察菌落计数土壤取样制备培养基当菌落数目稳定时，选取菌落数在30~300的平板进行计数，同一稀释度下至少计数3个平板，求出平均值，并根据所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。设计如下表格记录并计数。稀释度104105106123平均值123平均值123平均值每个平板的菌落数选择培养基文山市第一中学微生物的选择培养微生物的数量测定1、实验流程：样品稀释涂布平板微生物的培养与观察菌落计数土壤取样制备培养基当菌落数目稳定时，选取菌落数在30~300的平板进行计数，同一稀释度下至少计数3个平板，求出平均值，并根据所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。设计如下表格记录并计数。稀释度菌落形状菌落大小菌落颜色平均值104105106选择培养基文山市第一中学微生物的选择培养微生物的数量测定问题1:结合对照组，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。

如果没有接种的培养基上没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。如果接种后的完全培养基上的菌落数明显多于选择培养基上的菌落数，说明选择培养基筛选出了一些尿素分解菌。问题2:你是否获得了某一稀释度下菌落数为30～300的平板？在这一稀释度下，是否至少有2个平板的菌落数接近？

如果得到了两个或多个菌落数为30~300的平板，说明稀释度合适，操作比较成功，能够进行菌落的计数。2、特别注意：选择培养基文山市第一中学微生物的选择培养微生物的数量测定问题3:你统计的每克土样中能分解尿素的细菌的菌落数是多少？与其他同学统计的结果接近吗？如果差异很大，可能是什么原因引起的？

如果是用同一土样进行的操作，数据应该比较接近。如果差异很大，就需要从操作是否规范、培养基配制是否合理等方面查找原因。问题4:得到的菌落一定是分解尿素的细菌吗？不一定，还需要进一步的鉴定文山市第一中学选择培养基微生物的选择培养微生物的数量测定内容现象结论有无杂菌污染的判断对照的培养皿中无菌落生长未被杂菌污染培养基中菌落数偏高被杂菌污染菌落形态多样，菌落数偏高培养基中混入其他杂菌选择培养基的筛选作用牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目大于选择培养基上的数目选择培养基具有筛选作用样品的稀释操作得到3个或3个以上菌落数目在30~300的平板操作成功重复组的结果若选取同一土样，统计结果应接近3、结果分析与评价：文山市第一中学选择培养基微生物的选择培养微生物的数量测定拓展延伸：本活动只是初步筛选了能分解尿素的细菌,对分离的菌种进行鉴定还需要借助生物化学的方法。你可以查阅相关资料,进一步设计实验来鉴定自己分离的菌种。需要用“鉴别培养基”一、原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→酚红变红→脲酶阳性CO(NH2)2+H2O2NH3+CO2

脲酶呈碱性，遇酚红指示剂呈

色。红在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。文山市第一中学选择培养基微生物的选择培养微生物的数量测定二、方法：可以观察菌落周围是否出现红色环带，红色环带直径与菌落直径比值越大，说明分解能力越强。液体培养基：可以直接看液体的变色情况。固体培养基：

在培养基中加入某种指示剂或化学药品(不影响微生物正常生长)，使微生物的某种代谢产物与培养基中的特定指示剂或化学药品发生反应。从而达到鉴定的作用。伊红和美蓝培养基鉴别大肠杆菌刚果红培养基鉴别纤维素分解菌文山市第一中学选择培养基微生物的选择培养微生物的数量测定选择培养基和鉴别培养基的比较比较项目选择培养基鉴别培养基特殊成分控制某一条件（如唯一氮源）或加入某种物质（如青霉素）加入某种指示剂或化学药品目的抑制其他微生物生长，促进目的微生物的生长与微生物的代谢产物或培养基中的成分发生特定反应用途培养、分离出特定微生物鉴别不同的微生物举例培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素，抑制细菌的生长；用以尿素为唯一氮源的培养基来培养尿素分解菌可用伊红—美蓝坚定饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌（若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽）文山市第一中学选择培养基微生物的选择培养微生物的数量测定

将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到伊红-美蓝培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记算得出水样中大肠杆菌的数量。测定饮水中大肠杆菌数量的方法：滤膜法到社会中去文山市第一中学选择培养基微生物的选择培养微生物的数量测定课堂小结微生物的选择培养和计数选择培养基科学实例筛选原则选择培养基的概念及举例微生物的选择培养选择培养基的作用微生物选择培养获取纯培养物的方法-稀释涂布平板法稀释涂布平板法的操作过程微生物的数量测定间接计数法—稀释涂布平板法直接计数—计数板计数法土壤中分解尿素的细菌的分离与计数培养基的制备实验设计（1）土壤取样（2）样品的稀释（3）稀释涂布平板法接种（4）微生物的培养与观察高考题1.(2023·山东卷)金黄色葡萄球菌是一种病原菌，它可耐受质量分数为7.5%的NaCl溶液。金黄色葡萄球菌在添加适量血液的血平板上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色。为检测鲜牛奶中是否存在金黄色葡萄球菌，科研人员设计了如图所示的流程。下列说法错误的是（）A.振荡培养时应选用含质量分数为7.5%NaCl溶液的鉴别培养基B.振荡培养可使微生物与营养物质充分接触，提高培养液中的氧气含量C.若血平板中菌落周围出现透明圈，则初步说明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌D.为使检测更严谨，应设置加灭菌的鲜牛奶但其他操作均与图示相同的对照组A选择培养基2.(2023·河北卷)下列有关微生物培养或纯化的叙述，错误的是（

）A.微生物在培养前要先对培养基进行灭菌处理再接种B.培养液中溶氧量的变化会影响酵母菌的繁殖和代谢途径C.分离自养型微生物的方法是用纤维素作为唯一碳源的培养基进行培养D.分离纯化微生物的常用方法是平板划线法和稀释涂布平板法添加无机碳源C练习与应用1.研究人员用无机盐、琼脂和石油配制的培养基从被石油污染的土壤中筛选出了一种石