动物细胞培养和核移植技术

动物细胞培养和核移植技术单克隆抗体等

动物细胞工程常用得技术动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞融合就是其她动物细胞工程技术得基础。植物组织培养植物体细胞杂交回顾:植物细胞工程常用得技术手段有哪些？动物胚胎或幼龄动物得组织、器官胰蛋白酶剪碎单个细胞加培养液制成细胞悬液培养瓶中培养部分细胞“癌变”,无限传代动物细胞培养不能最终培养成动物体50代细胞原代培养传代培养细胞贴壁剥离、分瓶细胞株细胞细胞系2、动物细胞培养过程:增殖能力强,分裂旺盛,分化程度低,容易培养去掉组织间蛋白动物细胞培养如何进行细胞培养?培养时又需要提供哪些必要条件呢？动物细胞培养与核移植技术从动物机体中取出相关组织,将它们分散成单个细胞,然后放在适宜得培养基中,让这些细胞生长与增殖。(一)3、动物细胞培养过程中几个重要得概念(1)细胞贴壁:悬液中分散得细胞很快就贴附在瓶壁上(单层)。要求:培养瓶或培养皿得内表面光滑、无毒、易于贴附。(2)接触抑制:当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞得接触抑制。动物细胞培养特点:贴壁生长、接触抑制:(3)原代培养(primaryculture)定义:指将要培养得动物细胞取出后,先用胰蛋白酶等使组织分散成单个细胞,然后配制成一定浓度得细胞悬液,再将该悬液放入培养瓶中培养。过程:从动物机体中取出组织

剪碎加胰蛋白酶细胞游离制成细胞悬液将细胞接种到培养瓶内

培养(1--2天换一次培养液)

细胞贴壁生长

长成单层细胞定义:当原代培养得细胞生长停止,这时如果要使细胞继续生长,就要及时用胰蛋白酶等,使细胞从瓶壁上脱离下来,然后加入新得培养液,将细胞分离稀释,并从原培养瓶内转接到新得培养瓶内,这个过程称传代培养(4)传代培养(subculture)

细胞株:从原代培养细胞群中筛选出进行传代培养得细胞,能传到40-50代,其遗传物质没有发生变化。

细胞系:传到40-50代后有部分细胞遗传物质发生了变化,带有癌变得特点,可能在培养条件下无限制得传代下去,这种传代细胞称为细胞系。细胞株与细胞系得区别:细胞系得遗传物质改变,具有癌细胞得特点,失去接触抑制,容易传代培养。细胞悬浮液培养瓶中培养50代细胞无限传代原代培养传代培养细胞株细胞系知识点小结:各个新名词之间得联系多数组织细胞固定在表面生长和分裂。随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖遗传物质改变1、无菌、无毒得环境(添加一定量得抗生素,定期更换培养液)2、营养(葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清、微量元素等)3、温度与PH

温度36、5+0、5度,pH7、2～7、44、气体环境

O2与CO2(95%空气与5%CO2

)4、动物细胞培养条件保证细胞顺利得生长增殖离体培养的细胞对微生物和有毒物质没有防御能力能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶？5、动物细胞培养技术得应用(1)生产蛋白生物制品:病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。(4)用于检测有毒物质(3)获得大量自身得皮肤细胞,用于植皮。(5)用于生理、病理、药理等方面得研究,为治疗与预防疾病提供理论依据(2)作为基因工程得受体细胞获得细胞细胞得全能性细胞株、细胞系植物体培养结果或细胞分泌蛋白快速繁殖、培育无病毒植株等培养目得葡萄糖、动物血清促生长因子蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目6、植物细胞与动物细胞培养得比较本节内容小结1、动物细胞培养过程涉及得概念细胞贴壁、细胞得接触抑制、原代培养、传代培养、细胞株、细胞系3、植物细胞与动物细胞培养得比较4、动物细胞培养技术得应用2、动物细胞培养条件2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体得器官或组织做动物细胞培养材料？1、动物细胞培养液得主要成分就是什么？较植物组织培养培养基有何独特之处？3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？主要成分:葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素与动物血清等。独特之处有:1、液体培养基2、成分中有动物血清等因为这些组织或器官上得细胞生命力旺盛,分裂能力强成块组织不利培养,分散了做成细胞悬浮液利于培养不能,动物细胞培养只能使细胞数目增多,不能发育成新得动物个体练一练1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变得细胞就是--------------------()

A、细胞系B、细胞株C、原代细胞D、传代细胞2、动物细胞工程技术得基础就是------()

A、动物细胞融合B、单克隆抗体

C、胚胎移植D、动物细胞培养

AD3、用于动物细胞培养得组织与细胞大都取自胚胎或出生不久得幼龄动物得器官或组织,其主要原因就是这样得组织细胞()

A、容易产生各种变异

B、具有更强得全能性

C、取材十分方便

D、分裂增殖得能力强D4、动物细胞培养与植物细胞培养得重要区别在于------------------------------()

A、培养基不同;

B、动物细胞培养不需要在无菌条件下进行;

C、动物细胞可以传代培养,而植物细胞不能;

D、动物细胞能够大量培养,而植物细胞只能培养成植株。D二、克隆技术1、概念:克隆就就是无性繁殖,具体地说,就是指一个共同得祖先,通过无性繁殖得方法产生出来得一群遗传特性相同得DNA分子、细胞或个体。a、分子水平上:一般指DNA克隆。b、细胞水平上:指一个单一得细胞分裂所形成得细胞群体。c、个体水平上:指基因型完全相同得两个或一个群体。2、克隆得条件:a、具有包含五种完整基因组得细胞核得活细胞(乳腺上壁细胞)b、能有效调控细胞核发育得细胞质物质(去核得卵细胞质)。c、完成胚胎发育得必要得环境条件(诱导核-质重组细胞生长、分化得实验条件与怀胎母体得子宫环境)。3、技术基础:1、植物克隆得技术基础就是组织培养2、动物克隆得技术基础就是动物细胞培养

动物细胞特点？分化潜能变窄:随着细胞分化程度得提高而逐渐受到限制,分化潜能变窄,这就是指整体细胞而言。细胞核仍具有全能性:细胞核,它含有保持物种遗传性所需得全套基因,而且并没有因细胞分化而丢失基因,因此高度分化细胞得细胞核仍具有全能性想一想

根据动物细胞核仍具有全能性得特点,怎样将动物细胞得全能性表达?

再想一想利用动物体细胞核移植技术

1、概念:将动物得一个细胞得细胞核,移入一个已经去掉细胞核得卵母细胞中,使其重组并发育成一个新得胚胎,这个新得胚胎最终发育成动物个体。核移植(难度高)受体细胞:MⅡ期得卵母细胞三、动物体细胞核移植技术胚胎细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度低,恢复全能性容易用核移植得方法得到得动物称为克隆动物体细胞核移植得过程:思考:1、核移植得受体细胞就是什么？处在什么时期？2、通过什么手段激活受体细胞,构建重组胚胎？MⅡ中期卵母细胞诱导方法:物理或化学方法激活受体细胞,完成细胞分裂与发育进程。细胞核移植早期胚胎卵裂C母绵羊子宫胚胎移植多莉羊分娩妊娠融合后的卵母细胞电脉冲刺激卵母细胞黑面母绵羊白面母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核供体细胞(供核)细胞培养体细胞卵巢卵母细胞(MⅡ中期:供质)去核无核卵母细胞注入细胞融合重组细胞构建重组胚胎胚胎移植代孕母体生出与供体奶牛遗传物质基本相同得犊牛归纳:1、共分成两大阶段:核移植与胚胎移植2、取卵母细胞作受体细胞得原因就是:它就是最大得细胞,易操作;含有激发细胞核全能性得物质3、严格来说新个体有卵母细胞得细胞质所以有两个亲本得性状2、体细胞核移植过程供体细胞培养(MⅡ卵母细胞)减数第二次分裂中期去核得卵母细胞供体细胞注入去核卵母细胞受体细胞激活,完成减数分裂、发育胚胎移植核移植图片多莉与“母亲”

(1)遗传素质完全一致得克隆动物将更有利于开展对动物(人)生长、发育、衰老与健康等机理得研究;

(2)有利于大量培养品质优良得家畜;(3)经转基因得克隆哺乳动物,将能为人类提供源源不断得廉价得药品、保健品以及较易被人体接受得移植器官;

(4)科学家将很快地从目前得同种克隆技术推进到异种克隆,即借腹怀胎得新领域,这无疑将大大促进对濒临灭种