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第1页第2页第3页第4页形成单链DNA新DNA分子形成重组DNA分子黏性末端或平末端形成产物碱基对间氢键磷酸二酯键磷酸二酯键磷酸二酯键作用部位DNA分子脱氧核苷酸DNA分子片段DNA分子作用底物解旋酶DNA聚合酶DNA连接酶限制酶比较项目第5页第6页第7页第8页第9页第10页第11页第12页第13页第14页第15页第16页第17页第18页第19页为使目标基因与载体形成相同DNA片段末端能够连接，通常使用同一个限制酶将二者切割，但假如不一样限制酶切割DNA分子所产生末端也存在互补关系时，则两末端也可连接对象要求选择限制酶切割目标基因时，被选择限制酶在目标基因两侧都要有识别序列，这么才能切割出完整目标基因数量要求限制酶切割位点所处位置必须在标识基因外，只有这么才能确保标识基因完整性位置要求第20页第21页第22页第23页第24页第25页第26页第27页第28页过程逆转录法化学合成法从部分基因文库，如cDNA文库中获取从基因组文库中获取人工合成从基因文库中获取方法第29页第30页第31页第32页第33页第34页当温度上升到90℃以上时，双链DNA解聚为单链变性图解说明过程第35页72℃左右时，TaqDNA聚合酶有最大活性，可使DNA新链由5′端向3′端延伸延伸温度下降到50℃左右，两种引物经过碱基互补配对与两条单链DNA结合复性图解说明过程第36页第37页第38页第39页限制酶BamHⅠBclⅠSau3AⅠHindⅢ识别序列及切割位点第40页第41页第42页第43页第44页第45页第4
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