时间分辨荧光免疫分析仪校准规范实验报告

时间分辨荧光免疫分析仪实验报告1．实验目的本次实验为验证时间分辨荧光免疫分析仪校准规范中的计量特性主要技术指标的合理性。2．仪器型号时间分辨荧光免疫分析仪多分为全自动和半自动两种模式，主要生产厂商有：珀金埃尔默股份有限公司（PE)、赛默飞世尔科技ThermoFisher、瑞士TECAN、苏州新波生物技术有限公司（被PE收购）、广州市达瑞生物技术股份有限公司、广州丰华生物工程有限公司、广州万孚生物技术有限公司、南京岚煜生物科技有限公司，光景生物科技(苏州)有限公司等。目前市场主流产品主要为PE、达瑞等品牌。表1为目前市场主要产品。表SEQ表\*ARABIC1常见的几种仪器型号进口/国产品牌型号备注进口PEWallac

1235AutoDELFIA全自动Wallac

1420

Victor2

D半自动EasyCuta全自动（新波）Anytest2000BiotekSynergyH1半自动TECANSPARK半自动国产广州达瑞DR6606全自动广州万孚LS1000半自动丰华TALENT-II半自动根据规范方法，采用以上部分型号仪器的计量性能进行校准和比对。3．实验人员周瑾艳、黄彦捷4．实验时间2022年05月至2022年09月5．环境条件温度：（10~30）℃，相对湿度：≤70%6．实验所用校准装置及标准物质(1)铕单元素溶液国家有证标准物质，GBW(E)082185，100µg/mL，U=1µg/mL（k=2）。(2)甲胎蛋白血清（液体）标准物质GBW(E)090088，25.6IU/mL，U=1.2IU/mL（k=2）。冰冻人血清未结合雌三醇标准物质GBW(E)091049，33.6nmol/L，U=1.6nmol/L（k=2）。试剂：配套体外诊断试剂盒。数字温度计：测量范围（0~100）℃，最小分度0.1℃。电子天平：分度值不低于0.1mg，I级合格。容量瓶、移液管：A级合格。7．实验对象挑选市场上部分时间分辨荧光免疫分析仪进行校准，主要采用为一台达瑞DR6606、一台PEWallac1420（半自动）、一台PEEasyCuta2750、一台PEEasyCutaMiNi2730。8．实验方法时间分辨荧光免疫分析仪的各计量性能指标测量方法详见时间分辨荧光免疫分析仪校准规范。9．实验结论通过对这些不同生产厂家生产的时间分辨荧光免疫分析仪进行检测限、线性、重复性、稳定性、温度准确度和波动度、临床项目示值误差、临床项目检测重复性、携带污染率测量。实验结果表明，该校准规范规定的计量特性、校准项目、校准方法等要求科学合理，适用于仪器的校准工作。

时间分辨荧光免疫分析仪实验原始记录1.检测限因时间分辨荧光免疫分析仪荧光信号因仪器而异，且常检测的临床项目常为阴性样本或者低浓度样本，因而通过考察仪器荧光性能最低检测限尤为必要。本部分采用配套的增强液稀释配制的铕标准溶液物质实现，参考行标YYT1533根据大部分仪器可达到的检测下限，选用1×10-12mol/LEu溶液，并以增强液作为空白，均分别测试10次，计算各实验标准偏差，采用公式(1)评估，当满足公式(1)要求，则仪器检测限不大于1×10-12mol/L（Eu）。起草小组在验证实验过程中，采用GBW(E)082185，按照规范附录A的方法配制溶液，对不同型号仪器的检测限进行校准，具体结果如表2-3所示。表2不同型号仪器检测限校准结果仪器型号结论达瑞DR6606374.283515.04满足：检测限不大于1×10-12mol/L（Eu）PEWallac1420（半自动）374.873434.95PEEasyCutaMiNi2730617.372145.81PEEasycuta2750541.742462.27表3不同型号仪器检测限校准原始数据达瑞DR6606PEWallac1420半自动PEEasyCutaMiNi2730PEEasycuta2750空白10-12mol/L(Eu)空白10-12mol/L(Eu)空白10-12mol/L(Eu)空白10-12mol/L(Eu)433392344434446652342105228284533915420365169022868442823399383140837478202488107128194393682418368176423397872883458381439637147622637988271444839344513655744244472127493933809425368472026109952623427378141835967472427738259545939084513673689254489026154593571459372573523917652662436.83816.84293657733.62450.8885.12731.124.23116.9620.9886.0645.05118.21133.09104.20374.283515.04374.873434.95617.372145.81541.742462.272.线性采用配制好的（1×10-12~1×10-8）mol/LEu溶液进行荧光值测量，重复测量6次，取其平均值。将各标准铕浓度对数值()与荧光对数值()进行线性回归，计算线性相关系数。结果如表5-6所示。表5各仪器线性校准结果仪器型号达瑞DR6606PEWallac1420PEEasyCuta2750PEEasyCutaMiNi27300.9960.9930.9960.997表6各仪器线性校准原始数据仪器CEu/(mol/L)123456达瑞DR6606-121.0E-128224805472787423743668077537.003.880.996-111.0E-1136932374253624836754380013815937253.174.57-101.0E-10357995351734353070356851361174362296357186.675.55-91.0E-093586700345361834476453464380347098934552283479760.006.54-81.0E-0811961310119611891196112511961304119612111196119111961221.677.08PEWallac1420-121.0E-1212571113371134610767106751080111249.504.050.993-111.0E-1149604492214858548640505105018749457.834.69-101.0E-10471124458837470149466436467934470911467565.175.67-91.0E-094731956449060544697604536363446531944762774528380.006.66-81.0E-0812038357120383611203842712038440120384711203846512038420.177.08PEEasyCuta2750-121.0E-122691261925442550240826182571.673.410.996-111.0E-119988991096689709951093189683.833.99-101.0E-10122627122679122115121131121150119852121592.335.08-91.0E-091130792112553911149541113307111051911019291116173.336.05-81.0E-0810129405991252997341869696676943956293338529707701.676.99PEEasyCutaMiNi2730-121.0E-122823288327492595266227442742.673.440.997-111.0E-1112176124201175912120118061152611967.834.08-101.0E-10124886122971120635122939120932119562121987.505.09-91.0E-091188948117204811554051127165111901111117841145726.836.06-81.0E-0810775538105394101029637498514369862426954717010145392.337.01以上四种型号的仪器在铕浓度(10-12~10-8)mol/L范围内线性均满足r>0.99。3.重复性采用10-10mol/L铕标准溶液，连续测量6次，计算测得荧光值的相对标准偏差作为重复性的表征，同样采用上述四种仪器测量，得到结果如表7-8所示。表7各仪器重复性校准结果仪器型号达瑞DR6606PEWallac1420PEEasyCuta2750PEEasyCutaMiNi2730RSD/%0.990.610.901.73表8各仪器重复性校准原始数据仪器123456平均值STDEVRSD/%PEWallac1420471124458837470149466436467934470911467565.174650.330.99达瑞DR6606388217382395383685381764385726384289384346.002358.060.61PEEasyCuta2750122627122679122115121131121150119852121592.331091.950.90PEEasyCutaMiNi2730124788122681119699122600120495119358121603.502106.811.73以上仪器荧光信号重复性RSD<3%，满足规范建议要求。4.稳定性采用10-10mol/L铕标准溶液，连续测量10次，计算测得荧光值的平均值，过4h、8h后分别再上机重复测试10次，计算测定荧光的平均值，以第1次的测定结果作为基准值，按式(7)计算相对偏移以表示稳定性(α，%)：表9所示为四种型号仪器的稳定性数据，其稳定性均不大于±10%。表9不同型号仪器稳定性校准结果仪器型号达瑞DR6606PEWallac1420PEEasyCuta2750PEEasyCutaMiNi2730RSD/%7.874.58-2.613.39表10不同型号仪器稳定性校准原始数据仪器时间/h12345678910平均值稳定性/%PEWallac14200471124458837470149466436467934470911476532468971473219459523468363.60/4471345476532481128476890479845480931480992480199483764486541479816.702.458489734490276490421490532491123490652490409487012482346495766489827.104.58达瑞DR66060357995351734353070356851361174362296357995351734353070356851356277.00/4373551370904370684364641375971373340361174362296367531371569369166.103.628388217382395383685381764385726384289389321381256385439381129384322.107.87PEEasycuta27500127762128072126114126291124553124183122877122238122007121382124547.90/4122740122681122870121997121887120597121487120495119691118552121299.70-2.618123965123071123636124092122867123184122090121590121955122218122866.80-1.35PEEasyCutaMiNi27300118464118352117707119142119519118195118664119055118688119415118720.10/4118647118527117779117231117890116968117429118181118241117924117881.70-0.718122286122564122766122960122340122567122617123448122024123837122740.903.39稳定性测量结果，当采用铕溶液测量时，溶液的在8h内的保存应密封保存在2~8℃下，测试时，溶液回到室温下再进行测试。5.温度准确性与波动性采用温度计对仪器各孵育舱进行温度校准，仪器孵育温度设定值为37℃，对每个孵育舱重复测定10次，计算得到温度准确度和波动性，表11~13为PEEasyCutaMiNi2730、PEEasycuta2750两个型号的温度校准数据。表11各仪器温度校准结果准确度(±1.5℃)波动度(±1.5℃)PEEasyCutaMiNi27300.700.95PEEasycuta2750-0.810.65表12PEEasyCutaMiNi2730温度校准数据PEEasyCutaMiNi2730CH1(1号舱)CH2(2号舱)CH3(3号舱)CH4(4号舱)CH5(5号舱)CH6(6号舱)CH7(7号舱)CH8(8号舱)136.936.936.436.936.637.537.737.2236.736.736.336.836.637.537.737.1336.736.936.436.736.537.337.637.1436.936.736.436.736.237.537.637.2537.036.936.536.936.237.337.737.1637.037.036.636.936.137.537.937.2736.936.936.436.835.937.437.637.2836.936.936.436.735.737.437.737.2936.836.836.436.835.637.537.837.31037.037.036.937.037.537.737.737.3Mean36.8836.8736.4736.8236.2937.4637.7037.19Max37.0037.0036.9037.0037.5037.7037.9037.30Min36.7036.7036.3036.7035.6037.3037.6037.10准确度(±1.5℃)-0.12-0.13-0.53-0.18-0.710.460.700.19波动(±1.5℃)0.150.150.300.150.950.200.150.10表13PEEasycuta2750温度校准数据PEEasycuta2750CH1(1号舱)CH2(2号舱)CH3(3号舱)CH4(4号舱)CH5(5号舱)CH6(6号舱)CH7(7号舱)CH8(8号舱)CH9(9号舱)CH10(10号舱)CH11(11号舱)CH12(12号舱)135.736.536.836.537.136.635.935.936.937.338.436.2235.736.636.836.737.336.836.136.037.037.438.136.4335.936.736.936.837.336.836.136.137.237.437.736.5436.136.937.137.037.436.936.336.337.237.637.436.6536.136.937.137.037.537.036.336.337.337.637.236.8636.237.037.437.137.637.236.436.637.537.736.937.0736.437.037.337.137.737.236.636.737.537.836.737.1836.537.237.637.537.837.436.736.837.637.936.437.3936.537.137.537.438.037.536.837.037.738.236.337.41036.837.337.637.638.037.536.937.137.838.236.137.5Mean36.1936.9237.2137.0737.5737.0936.4136.4837.3737.7137.1236.88Max36.8037.3037.6037.6038.0037.5036.9037.1037.8038.2038.4037.50Min35.7036.5036.8036.5037.1036.6035.9035.9036.9037.3036.1036.20准确度(±1.5℃)-0.81-0.080.210.070.570.09-0.59-0.520.370.710.12-0.12波动(±1.5℃)0.550.400.400.550.450.450.500.600.450.451.150.656.临床项目示值误差采用甲胎蛋白国家标准物质GBW（E）090088，对PEWallac1420、达瑞DR6606仪器进行校准。示值误差分别为-4.24%和1.54%。满足规范不大于±10%要求。同时我们也采用GBW（E）090088稀释10倍进行测量，稀释剂为试剂盒内缓冲溶液。如表14所示，示值误差分别为27.98%和23.02%，均大于10%。这是由于免疫分析的基质效应，导致结果偏差。因而校准示值误差时不建议将有证标准物质稀释使用，否则可能影响互换性。同时我们也采用客户自用的标准品进行验证。如表14第三组所示，达瑞试剂盒自带的甲胎蛋白标准品进行示值误差实验，示值误差均小于10%，表明客户试剂盒准确度满足要求。表14各仪器甲胎蛋白示值误差校准结果仪器型号标准值/(IU/mL)测量值平均值示值误差/100%123PEWallac142025.623.9826.17223.39324.515-4.242.563.063.1883.5813.27627.98达瑞DR660625.625.63324.53627.81325.9941.542.563.1793.153