食用油中辣椒素cap检测试剂盒说明书

河南欧诺生物科技有限公司HenanOunuoBiotechnologyCo.LTD 地址：河南省郑州市惠济区大河路街道中原物流港B6-1-06邮编：450049电话用油中辣椒素（Cap）ELISA检测试剂盒使用说明书货号：Ounuo97002检测限：0.4μg/kg定量区间：1-10μg/kg本产品可以采用单点定标，即点1个标准品实现定量分析，最大可实现47个样本的检测。采用单点定标时，数据分析请来电索取专门的Excel数据分析软件样本前处理需要但未提供的试剂和器皿如下：二氯甲烷，分析纯正己烷，分析纯氢氧化钠，分析纯去离子水或蒸馏水10mL、5mL离心管试剂配制样本预处理液1：将样本预处理试剂Ⅰ用300mL去离子水溶解，备用，可常温保存样本预处理液2：将样本预处理试剂Ⅱ用去离子水按照1:19的比例稀释，按需配制，即取1体积的样本预处理试剂Ⅱ，加入19体积的去离子水或蒸馏水混匀，备用，可常温保存样本提取液：称取8gNaOH，加去离子水200mL使其完全溶解，备用，可常温保存精炼油、椰子油1）称取1.0±0.01g油样于10mL离心管中，先加入4mL样本提取液，再加1mL二氯甲烷振荡1min，4000rpm，离心1min2）取步骤1）上层液体1mL于10mL离心管中，加入0.25mL试剂A和2mL正己烷振荡1min；3）取步骤2）上层溶液1mL于5mL离心管中室温下氮气吹干（约10min），加入0.125mL样本稀释液振荡1min；样本稀释倍数：1稻米油（稻米油原油除外）1）称取0.50±0.01g油样于10mL离心管中，先加入4mL样本提取液，再加0.5mL二氯甲烷振荡1min，4000rpm，离心1min2）取步骤1）上层液体2mL于10mL离心管中，加入0.5mL试剂A和2mL正己烷振荡1min；3）取步骤2）上层溶液1mL于5mL离心管中室温下氮气吹干（约10min），加入0.125mL样本稀释液振荡1min；样本稀释倍数：1精炼油、风味油、原油(玉米原油和芝麻原油除外）1）取约2.0g油样于10mL离心管中，加入3mL样本预处液1和3mL样本预处理液2，手动剧烈振荡30-60s，4000rpm，离心1min；2）称取步骤1）上层样本（注意务必避开表层漂浮物）1g于10mL离心管中，先加入4mL样本提取液，再加1mL二氯甲烷振荡1min，4000rpm，离心1min；3）取步骤2）上层液体1mL于10mL离心管中，加入0.25mL试剂A和2mL正己烷振荡1min；4）取步骤3）上层溶液1mL于5mL离心管中室温下氮气吹干（约10min），加入0.125mL样本稀释液振荡1min；样本稀释倍数：1玉米原油、芝麻原油1）称取约2.0油样于10mL离心管中，加入3mL样本预处理液1和3mL样本预处理液2，手动剧烈振荡30-60s；4000rpm，离心1min；2）取步骤1）上层样本（注意务必避开表层漂浮物）1g于10mL离心管中，先加入4mL样本提取液，再加1mL二氯甲烷振荡1min，4000rpm，离心1min；3）取步骤2）上层液体1mL于10mL离心管中，加入0.25mL试剂A和2mL正己烷振荡1min；4）取步骤3）上层溶液1mL于5mL离心管中室温下氮气吹干（约10min），加入0.125mL样本稀释液振荡1min；样本稀释倍数：1.6操作步骤实验前，请将检测试剂盒从2-8℃冰箱中取出，于室内温度20-28℃下平衡1小时以上！试剂配制洗涤液（1×）：取1体积的20×浓缩洗液，加入19体积的去离子水或蒸馏水混匀，备用，可按需配制1）取出平衡后的适量板条，其余放回铝膜袋中；2）依次加50μL标准品/样本于相应微孔中；加50μL酶结合物和50μL抗体至所有微孔；轻敲板架；3）盖上板贴，于20-28℃下，孵育20分钟；倒出微孔中液体；4）将洗涤液注满微孔浸泡15s倒出，重复4次，共计5次；并于拍板布上尽可能干的拍出孔内液体；5）加100μL底物至微孔中，轻敲板架，盖上板贴，于20-28℃下，孵育10分钟；揭开板贴，不要倒出液体，直接加100μL终止液至微孔中，轻敲板架，于450/630nm波长下，读数；结果分析1）结果计算将检测的吸光度值输入到配套计算软件的相应位置即可计算出样本中辣椒素的含量。。2）超出检测上限的样本稀释方法（只针对少量超限的样本）称样时待测样本（或者预处理完的样本）只称取0.5g，加入0.5g同种类空白样本，后续操作不变；或者复溶时多加1倍的样本稀释液（最多只能多1倍，再多恐有差异）。将得出的含量再乘以2，即为最终样本中辣椒素的含量。注意事项、常见问题分析及解决办法1）注意事项不同产品、不同批次之间试剂不得混用；吸取不同试剂，要更换吸头，以免造成试剂污染；底物变为蓝色，表示已污染变质或过期，不得使用；终止液中含盐酸，使用时防止接触皮肤，如不小心溅到，及时用大量流水冲洗，严重时请及时就医；2）常见问题分析及解决办法问题原因分析解决办法1.不显色或显色浅①试剂变质：酶、抗体、底物、酶标板等失活；②未复温或复温时间不够；③室内环境温度过低（低于18℃）④其他原因：操作不当1）更换新产品2）参照说明书复温3）控制室内环境温度或借助恒温培养箱4）使用前请仔细阅读说明书2.显色过深①未及时终止；②环境温度过高（超过30℃）；③洗板不彻底或未洗板；1）及时进行相应地实验操作2）控制室内环境温度或借助3）恒温培养箱4）洗板严格参照说明书执行需要但未提供的试剂及设备耗材1）设备耗材油脂安全检测仪：配备450nm/630nm两种波长滤光片，1台离心机：4000rpm以上振荡器/涡旋混匀仪：1台移液器：量程1000-5000μL;100-1000μL;20-200μL三种规格氮吹仪：1台；电子天平：感量0.01g，1台；10mL、5mL离心管、一次性滴管、吸头2）试剂二氯甲烷：分析纯正己烷：分析纯氢氧化钠：分析纯去离子水或蒸馏水背景及适用范围辣椒素，又称辣椒碱，被用于餐厨回收油，俗称地沟油的鉴定标志物。本产品采用酶联免疫吸附检测技术，可实现食用油中辣椒素的快速定量检测，可以作为地沟油的初筛方法。一次性检测15个油样，仅需约50min。原理采用间接竞争ELISA法，标准品或样品中辣椒素（以下简称Cap），与预包被在微孔中的抗原竞争结合溶液中Cap抗体，经酶结合物反应，洗涤除去未反应试剂，再经底物显色；标准品或样品中Cap含量与其吸光度呈负相关。产品性能1）适用动植物性食用油脂2）检测限：0.4μg/kg3）定量范围：1.0-10μg/kg4）灵敏度：0.1μg/kg5）精密度：批内CV<10%；批间CV<15%6）准确度：100±20%7）检测时间：30min8）交叉反应：化合物交叉反应辣椒素（Capsaicin）100%二氢辣椒素（Dihydrocapsaicin）76%合成辣椒素（Nonivamide）100%9）包装规格48T板条及板架：6*8孔，板架1个标准品：1mL抗体：1瓶4mL，绿盖酶结合物：1瓶4mL，红盖底物