徐州市感染性腹泻综合监测工作方案

附件：

徐州市感染性腹泻综合监测工作方案

（2023年,试行）

一、背景

感染性腹泻病仍然是当今全球性重要公共卫生问题之一，尤其在发展中国家，其发病率高，危

害大，是影响人类身体健康，尤其是青少年、小朋友生长发育的重要疾病。我国腹泻病发病率很高,

感染性腹泻H勺发病率居传染病首位。引起该病的病原诸多，其中以细菌引起腹泻者占比例最大，伴

随抗生素药物在感染性腹泻病治疗中口勺广泛应用，出现了耐药及新的肠道致病原。因此，监测肠道

致病菌的种类具有十分重要的意义，以掌握本省感染性腹泻流行特性和病原菌（毒）株变化趋势，

为制定有效的防止控制措施提供科学根据，特制定此方案。

二、监测工作目的

I、掌握本市感染性腹泻的发病强度，及时理解感染性腹泻疫情动态，为制定防治对策提供参

照根据。

2、理解本市重点感染性腹泻病原分布特性和变化趋势，为防止控制提供科学根据。

三、监测病例定义

腹泻病监测病例定义：

（1）1岁及以上小朋友、青少年及成人：每日排便3次及以上，并伴有大便性状的变化，呈

稀便、水样便、粘液便或脓血便等；

（2）婴儿：大便次数比平常增长，大便性状变化，伴呕吐、或/和食欲下降、或/和脱水（如尿

少、口渴）；6个月内母乳喂养儿排便达每日6次及以.上、人工喂养儿每日排便4次以上，6个月〜

1岁每口排便4次以上；

（3）同一患者间隔7d（含7d）再次腹泻，为发生另1次腹泻。

霍乱、伤寒、副伤寒、细菌性痢疾、其他感染性腹泻病的诊断参摄影应日勺国家卫生行业诊断原

则。

四、监测点设置

选择铜山区、泉山区和睢宁县为综合监测区。

选择市级医院I家（徐州市第一人民医院）、区及县级医院各I家（铜山区中医院和睢宁县中

医院）、小区服务中心（城区和农村）各2家（铜山区汉王镇卫生院和棠张镇卫生院、睢宁县王集

镇卫生院和高集镇卫生院）开展腹泻病流行病学监测和病原学监测标本采集；医疗机构监测科室应

包括内科（消化内科）、儿科和感染科的门诊（肠道门诊）、急诊部门。

五、监测工作内容

（-）感染性腹泻综合监测

1、流行病学综合监测

通过长期、持续监测腹泻病例就诊数及占就诊总数比例的动态变化、腹泻病人的流行病学特点,

并综合腹泻病原分离状况，分析判断当地区感染性腹泻流行趋势。

监测哨点医院整年开展腹泻病监测，对符合病例定义原则的各年龄组所有就诊腹泻病人专册登

记（附表1）,逢泻必登。监测医院每旬逢3前将上一旬资料负责整顿到附表2中并报至属地区县

疾控中心，区县疾控中心每旬逢4前将上旬报表（附表2）汇总上报至市疾控中心。市疾控中心每

旬逢5前将上旬报表（附表2）汇总上报至省疾控中心。

已建立完善HIS系统的监测哨点医院,可逐渐开发运用HIS系统诊断信息，从信息系统获取“肠

炎、腹泻、腹痛、呕吐、食物中毒”等胃肠道有关症状及诊断信息，实现监测工作的信息化.

2、病原学常规监测

综合监测点医院整年开展细菌性痢疾及病毒性腹泻病原监测。

（1）标本采集：监测哨点医院有关科室U勺医护人员发现符合感染性腹泻病例定义11勺患者（尤

其是诊断为细菌性痢疾和病毒性腹泻病例）时，按照方案规定搜集有关信息（附表3）,并采集粪

便或呕吐物标本，一式两份。一份标本12小时内送检进行细菌性痢疾检测，另一份置于-20℃或如

下冷冻保留，用于病毒性腹泻检测。标本采集时注意做好标本编号记录。每月采集标本总数不少于

20份（泉山区不少于4份、铜山区和睢宁县各不少于8份）。标本采集、保留、运送规定详见附录

1。

（2）病原检测：检测细菌性痢疾和病毒性腹泻有关病原（轮状病毒、星状病毒、札如病毒、

诺如病毒、腺病毒）。

细菌性痢疾标本检测由有条件U勺医院负责，不具有条件的由属地区、县疾控中心负责，检测内

容包括病原分离、生化鉴定和血清学分型。病毒性腹泻检测由市级疾控中心负责每月统一检测。当

月病毒性腹泻标本检测应在下月5日前所有完毕。病原检测措施详见附录lo

（3）信息汇报：各地疾控中心每月5日前将上月病原检测成果上报市疾控中心，市疾控中心

每月7口前将汇总成果（附表4和附表5）上报到省疾控中心急传所；每月10日前将上月分离痢

疾菌株和病毒性腹泻PCR阳性标本上送至省疾控中心急传所。

3、病原学加强监测

综合监测区各监测医院，在4月、8月、12月开展感染性腹泻病原学加强监测，检测6种细菌

性病原、5种病毒性病原。根据肠道传染病防制形势的需要，可适时增长需关注的I病原监测种类和

样本数量。

（1）标本采集：监测医院按季节不一样，分三批次（4月、8月、12月份）集中采莫持续3

日内（标本量局限性的，适时延长期限）的就诊腹泻病例样本：其中4月和12月每批次标本采集

数不少于20份（泉山区不少于4份、铜山区和睢宁县各不少于8份），8月标本采集数不少于30

份（泉山区不少于6份、铜山区和睢宁县各不少于12份）。有关科室日勺医生或护士在发现符合病例

定义的患者时，按照方案规定搜集有关信息，并采集粪便标本（填写附表3）；标本采集后12小时

内，连同附表3一起送至属地区县疾控中心，区县疾控中心登记整顿后立•.即送市级疾控中心试验室

检测。标本采集、保留、运送规定详见附录I。

（2）标本检测：①细菌性病原：沙门菌、志贺菌、空肠弯曲菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌、致

各感染性腹泻病原日勺检出状况等。

（2）数据汇报与反馈：区县疾控中心腹泻病流行病学监测数据每旬逢4前上报到市疾控中心

疾控科。市疾控中心每旬逢5前上报到省疾控中心，每月7日前将上月病原检测成果（附表4和附

表5）上报到省疾控中心；每月10日前将上月分离阳性菌株和病毒性腹泻PCR阳性标本上送至省

疾控中心。年度总结于下年度1月10日前上报至省疾控中心。

3、监测工作质量评估

对监测工作有关单位开展督导检查，评估并增进各级单位监测工作II勺质量。

评估指标包括工作及时性、精确性和覆盖范围等，包括：资料搜集的完整性、精确性和及时性;

人员培训状况；信息汇报及时性和规范性；标本送检的及时性和试验室检测口勺及时性；试验室检测

的规范性：技术资料档案管理，包括原始记录规范性和完整性等。（附录6）

六、监测系统构成与职责

监测系统由各级卫生行政部门、各级疾病防止控制中心、医疗机构构成。

（一）各级卫生行政部门

各级卫生行政部门负责组织开展本辖区内感染性腹泻综合监测工作，提供所需监测补助经费并

监督经费使用状况，保证监测工作日勺顺利开展。

（二）市级疾病防止控制中心

负责当地区感染性腹泻综合监测H勺平常管理、业务指导工作；负责对监测资料进行搜集、汇总

和分析，开展病原学检测，并及时对各项成果进行汇报与反馈，保质保量地完毕监测任务。

（三）区县级疾病防止控制中心

按监测工作方案规定，配合医院完毕标本送检以及进行部分试验室检测等工作；对辖区内哨点

医院的监测工作开展质量控制和业务指导；按规定期限向市级疾控中心汇报监测资料。

（四）医疗机构

医疗机构处在发现感染性腹泻病例的最前沿，负责完毕门（就）诊和住院病例的腹泻病人日勺登

记和标本采集，有条件叫参与部分试验室检测任务；配介疾病防止控制机构完毕本方案所规定啊其

他监测工作等。

七、技术支持与联络方式

市疾控中心对承担感染性腹泻综合监测的区县疾控中心、哨点医院提供技术支持与指导。

技术支持部门：徐州市疾控中心疾控科。

现场联络人：孙传武()，石春雷()。

试验室联络人：

病毒检测:童晶(85956780)

细菌检测:郭惠(85956780)

八、附表与附录

附表I医疗机构腹泻门诊病例登记表

附表2感染性腹泻病人登记检索旬报表

附表3感染性腹泻标本采集登记表

附表4感染性腹泻综合监测细菌性病原检测成果反馈表

附表5感染性腹泻综合监测病毒性病原检测成果反馈表

附表6感染性腹泻综合监测疑似病原菌菌株送检表

附录标本采集、保留、运送及检测技术指南

附表2感染性腹泻病人登记检索旬报表（月旬）

分年龄组腹泻病汇报数门/急诊

日期

就诊总数

0岁〜5岁〜15岁〜60岁〜

本旬合计

附表6感染性腹泻综合监测疑似病原菌菌株送检表

标本编号病人姓名分离病原菌名称菌株编号API编码VITEK2编码血清型

填报单位:送检人:送检口期:

附表1医疗机构腹泻门诊病例登记表（医院名称：门诊:）

捡

送

联络发病重要初步采样检直医师

期

日期姓名性别工作单位职业住址初，复诊日

（岁）日期症状诊断状况项目成果签名

填表人：填表日期：年月日

附表3感染性腹泻标本枭集登记表

重要临床症状采样方式

标本患者性年发病与否服抗采样日期

职业现住址及联络

编号姓名别龄期生素体温恶心（详细到“时”）养使股拭呕吐

H腹痛腹泻其他炎便

C呕吐性状物

月日时

月日时

月日时

月日时

月H时

&患者姓名：5岁如卜患儿加注家长姓名.

*英便性状：1.蚱血样便2.血便相混3.脓血便4.黑便5.粘液便6.米潜水样便7.水样便8.稀便9.正常便

填表人:填丧日期：年月日

附表4感染性腹泻综合监濯细菌病原检测成果反馈表（年月）

标本细菌性病原体

患者年龄发病检测

编号性别职业

姓名（岁）日期日期

霍乱瓠菌副溶血如菌致泻性大肠埃希菌空肠弯曲菌沙门菌志贺函

*病原体阳性检;则成果而详细到血清亚型

填报单位：填报人：填报日期：

时表5感染性腹泻综合监测病毒性病原检测成果反馈表（年月）

轮状病毒杯状病毒如

标本诺如星状

病人姓名性别年龄职业发病日期检测日期有腺病超

编号病毒病毒

G分型P分型

填报单位:填报人:埴报日期:

附录:

标本采集、保留、运送及检测技术指南

一、标本采集

（-）标本的采集

采集粪便标本，由受过专门培训的人员来施行，并填写附表3。优先采集就诊时未使用过抗

生素的病例标本。注意生物安全防护，防止污染、传播和自身感染。标本应做好对应标识。

采集粪便使用无菌容器。用6支无菌棉拭多点采集粪便标本（如有脓血或黏液应挑取脓血、

黏液部分，液体粪便应取絮状物，使棉拭表面充满粪便），分别插入1支C-B运送培养基，棉拭子

应尽量所有插入培养基内，以保证弯曲菌所需的微需氧环境，迅速拧紧管口。此外再分5ml粪便

放到无菌粪便采样杯（盒）（不加任何培养基和试剂），置于-20C或-20C如下冷冻保留。

（二）标本的保留和运送

用于细菌检测的粪便标本如不能立即送检，需保留于4c冰箱或冷藏包，但不应超过12小时％

用于病毒检测的粪便样本采集后30min内放入-20C冰箱中，保留期内防止样本发生反复冻

融。所有标本置于冷藏包（配置冰排），由专职人员运送至监测点试验室，在动输过程中需防止

容器破碎、洒漏、颠倒，注意生物安全防护。粪便样本的保留、运送和检测培养条件见表1。

二、细菌检测

（-）标本处理

1、直接分离培养：采集II勺标本直接划线接种选择性平板进行培养，包括麦康凯平板、XLD平

板、STEC平板、科玛嘉沙门菌显色平板、科玛嘉弧菌显色平板、TCBS平板，放置37℃培养；接种

mCCD平板，放置42℃微需氧环境下培养。

2、增菌培养：将标本同步接种于碱性蛋白陈水，于培养6小时后，接种科玛嘉弧菌显色

平板或TCBS平板；接种SGB增菌37c培养18小时后，接种科玛嘉沙门菌显色平板；接种跳氯化钠

蛋白陈水增菌液，37c培养12〜16小时后，接种于科玛嘉弧菌显色平板或TCBS平板：接种Preston

肉汤增菌42℃微需氧培养24〜48小时，接种改良CCD平板，42℃微需氧培养1天〜5天。

（-）菌株分离和鉴定

1、菌落形态鉴定：在STEC显色平板上挑取5个形态特性经典的可疑产毒性大肠杆菌菌落分别

保留在半固体培养基中送省CDC进行后续检测；在其他多种选择性培养基上分别挑取5个形态特性

经典的可疑菌落（参照附录3有关内容：病原体在不一样选择性培养基上的菌落特性）进行纯化或

血清凝集试验，同步进行革兰染色。

2、生化鉴定：初步生化鉴定包括氧化酶试验、动力、双糖等。对经初步生化鉴定成果符合

的菌株用API生化鉴定条或全自动生化鉴定仪进行系统生化鉴定。如使用VITEK2鉴定者，规定将

每株疑似菌株鉴定汇报附于菌株送检单背面。

3、血清学鉴定：使用病原菌特异血清进行玻片凝集，初步血清鉴定后再进行血清分型。

（三）疑似菌株的保留和运送

除志贺菌、空肠弯曲菌和副溶血性弧菌不上送外，其他菌株分别接种半固体琼脂，37c过夜,

在室温下保留送检，不要冷藏。病毒核酸检测阳性口勺粪便标本冷藏送省CDC。

表1粪便样本的保留、运送和检测培养条件

项目培养基目口勺病原体温度

细菌标本保

1.Cary-Blair氏运送培养基所有感染性腹泻综合监测致病菌4℃

留和运送

1.3%氯化钠碱性蛋白陈水副溶血性弧菌37℃

增菌液

2.碱性蛋白脍水霍乱弧菌37℃

3.Preston肉汤弯曲菌微需氧42℃

4.SBG增菌液沙门菌37℃

1.Mac平板EPEC、STEC、ETEC、37℃

EIEC、EAEC、志贺菌

2.XLD平板志贺菌37℃

选择性3.mCCD平板弯曲菌微需氧42℃

分离平板4.科玛嘉沙门氏菌显色平板沙门菌37℃

5.科玛嘉沙门氏菌显色平板弧菌37℃

6.TCBS平板弧菌37℃

7.STEC平板产志贺样毒索大肠杆菌37℃

病毒标本1.采便盒轮状病毒、诺如病毒、札如病毒、—20C如下

星状病毒、腺病毒

（四）检查措施与工作流程

1、工作流程与措施汇总

粪便标本------>3%氯化钠碱性蛋白陈水

736℃±1℃.I2h-I6h

TCBS或科玛嘉弧菌显色培养基

360c±1℃I8h〜24h

挑取3个或以上可疑菌落，接呷于3%氯化钠胰蛋白陈大豆琼脂

7360c±1℃18h~24h

氧化酶试验，3%氯化钠三糖铁琼脂，嗜盐性试验

进行系统生化鉴定

▽:

血清学分型——>1~汇报成果

3、沙门菌和志贺菌检查程序

4、弯曲菌检查程序

汇报成果

5、病原体在不一样选择性培养基上的菌落特性

选择性琼脂平板病原体菌落特性

MAC琼脂平板志贺菌属菌落光滑、无色，直径2〜3nlm

XLD琼脂平板志贺菌属菌落呈红色，直径2〜4nlm

科玛嘉沙门菌

沙门菌(大多数)紫色或酒红色

显色培养基

圆形、半透明、表面光滑的绿色菌落，用接种

副溶血性弧菌

环轻触，有类似口香糖H勺质感，直径2〜3mm

TCBS琼脂平板

霍乱弧菌光滑、凸起、边缘完整、黄色菌落

圆形、半透明、表面光滑啊粉紫色菌落，

副溶血性弧菌

科玛嘉弧菌直径2~3mm

显色培养基

霍乱弧菌绿松石蓝色

改良CCD

空肠弯曲菌灰绿色菌落、非常干燥，有或无金属光泽

琼脂平板

大肠杆菌0157：H7紫色

大肠杆菌026紫色带荧光

STEC大肠

显色培养基

杆菌其他产志贺毒索大肠杆菌紫色，荧光或有或无

其他肠杆菌无色、蓝色或被克制

三、腹泻病毒检测

(-)检测流程

（二）核酸提取：采用Geneaid病毒核酸提取试剂盒。

（=）病毒检测；采用QIAGENProbeRT-PCRKiI荧光定量检测多种腹泻病毒。

1、引物及探针：省CDC合成并下发。

2、反应体系（模板2.5ul）

试剂体积（卜1）

DEPCH>02.875

MasterMIX6.250

RT-M1X0.125

引物+0.250

引物一0.250

探针0.250

3、反应条件

病原种类温度时间循环数

50℃30min

95℃15min

轮状病毒

95℃15s

45Cycle

60℃Imin

50℃45min

95℃15min

星状病毒

94℃15s

45Cycle

55℃Imin

50℃30min

95℃15min

札如病毒

94℃15s

40Cycle

55℃34s

50℃30min

95℃15min

诺如病毒

95℃10s

45Cycle

60℃Imin

95℃15min

腺病毒95℃15s

45Cycle

60℃Imin

4、成果分析条件设定和成果判断:

Ct值无数值的标本为阴性样本；Ct值＜35.0的样本为阳性。

注:Ct值235.0的样本提议重做；重做成果无数值者为阴性，否则为阳性。

（四）轮状病毒阳性的标本进行血清型分型和基因型分型

采用QIAGENOneStepRT-PCRKit及GenStar企业的2XMix.

1、RT-PCR所用的引物

(1)VP7RT-PCR*

NucleotidePosition(expected

PrimerSequence5'3

sizecDNA881bp)

VP7FATGTATGGTATTGAATATACCAC51-71

VP7RAACTTGCCACCATTTTTTCC932-914

*(IturrizaGomaraetal.,(2023)JClinMicro)

(2)G-TypingPCR*

NucleotideSizePCR

TypePrimerSequence5'-3'

Positionproduct(bp)

G1aBTlCAAGTACTCAAATCAATGATGG314-335618

G2aCT2CAATGATATTAACACATTTTCTGTG411-435521

G3G3ACGAACTCAACACGAGAGG250-269682

G4aDT4CGTTTCTGGTGAGGAGTTG480-499452

G8aAT8GTCACACCATTTGTAAATTCG178-198754

G9G9CTTGATGTGACTAYAAATAC757-776179

*(Gouveaeta/.,(1990)JClinMicro;IturrizaGomaraetal.,(2023)JClinMicro)

(3)VP4RT-PCR*

NucleotidePosition(expected

PrimerSequence5'-3'

sizecDNAis663bp)

VP4FTATGCTCCAGTNAATTGG132-149

VP4RATTGCATTTCTTTCCATAATG775-795

*(Simmondeta/.,(2023)JClinVirol)

(4)P-TypingPCR*

NucleotideSizePCR

TypePrimerSequence5'-3'

Positionproduct(bp)

P[4]2T-1CTATTGTTAGAGGTTAGAGTC492-474362

P⑹3T-1TGTTGATTAGTTGGATTCAA278-259146

P[8]IT-IDTCTACTGGRTTRACNTGC356-339224

P[9]4T-1TGAGACATGCAATTGGAC402