2025年高考生物复习新题之基因工程

2025年高考生物复习新题速递之基因工程（2025年4月）

选择题（共15小题）

1.（2025春•重庆校级月考）普通小麦的TaMLO基因与白粉病的易感性有关。研究发现，利用CRISPR/Cas9

基因编辑技术敲除TaMLO基因可增强小麦对白粉病的抗性，CRISPR/Cas9基因编辑技术的工作原理如

图所示。在实验过程中，科研人员构建了含有Cas9基因和sgRNA编码序列的重组质粒，并将其导入小

麦细胞中，以期在TaMLO基因两端实现精准切割。下列有关叙述正确的是（）

A.普通小麦是二倍体作物，只需敲除一个TaMLO基因即可实现稳定抗病性

B.该实验中，sgRNA的主要功能是切割目标DNA序列，从而实现基因编辑

C.CRISPR/Cas9识别目标DNA序列主要与Cas9蛋白的特异性相关

D.通过CRISPR/Cas9敲除TaMLO基因需要断开4个磷酸二酯键

2.（2025•辽宁一模）新型蛋白质进化模型EVOLVEpro可以利用氨基酸序列，仅通过少量学习和最低限度

的实验测试来预测蛋白质空间结构，从而获得新型高活性蛋白质改造方案。下列有关说法正确的是（）

A.预测蛋白质结构需要依据肽链中肽键的结构、氨基酸的物理性质与结构

B.氨基酸是蛋白质的基本单位，氨基酸发生替换一定使蛋白质的结构和功能发生改变

C.EVOLVEpro在蛋白质工程广泛应用后将不再需要借助基因工程手段改造蛋白质

D.通过EVOLVEpro得到的蛋白质还需要进行进一步的功能检测实验才可以投入生产

3.（2025•郑州二模）单碱基编辑系统可以使靶序列特定碱基发生改变，进而实现定向突变。如图为其中

一种编辑系统:dCas9末端与APOBEC1形成融合蛋白，随后gRNA将融合蛋白引导到靶位点,APOBEC1

会使单链DNA的C脱氨形成U,后续经DNA复制完成C到T的转换。相关分析错误的是（）

B.编辑后的DNA需经过2次复制才能实现C到T的转换

C.C转换为U后，与其相连的五碳糖由脱氧核糖转为核糖

D.单碱基编辑系统可以为镰状细胞贫血病的治疗提供思路

4.（2025•邯郸模拟）下列有关“DNA的粗提取与鉴定”“琼脂糖凝胶电泳”实验的相关说法，正确的是

（）

A.利用酒精初步分离DNA与蛋白质的原理是DNA溶于酒精

B.过滤后的研磨液放置在4℃冰箱中可防止DNA被降解

C.琼脂糖凝胶电泳时，DNA分子越大，迁移速率越快

D.提取到的丝状物与二苯胺溶液充分混匀后即可变为蓝色

5.（2025•云浮模拟）某小组同学选择菜花为实验材料进行“DNA粗提取与鉴定”的实验，并进行了一些

改进。基本流程为：裂解一分离一沉淀一鉴定，下列分析错误的是（）

A.裂解：研磨时加入适量纤维素酶可加速细胞破裂释放出DNA等物质

B.分离：利用DNA溶于酒精的特性去除混合物中的蛋白质等物质

C.沉淀：多次离心研磨液并将沉淀物收集晾干可提高DNA的纯度

D.鉴定：在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂呈现蓝色

6.（2025•淮安校级二模）经典的CRISPR-Cas9系统可以通过敲除基因实现基因沉默。近日研究人员基

于CRISPR系统开发了一个名为CRISPRoff的新型编辑器，可以将甲基（Me）添加在DNA链的特定位

点上;研究人员还创建了功能相反的编辑器一一CRISPRon,它能逆转基因沉默。下列叙述正确的是（）

A.新型编辑器对染色体DNA的效果低于染色质DNA

B.CRISPRo任利用基因重组来实现基因沉默

C.CRISPRoff对基因的影响不能遗传给后代

D.CRISPRon有助于基因与DNA聚合酶结合以恢复表达

7.（2025•山东模拟）用DNasel酶切割DNA分子，可产生一系列不同长度的DNA片段，且相邻片段只相

差1个核甘酸。当DNA分子中的某一区段与特异的转录因子蛋白质结合后，加入DNasel酶时该区段

会得到保护，在凝胶电泳放射性自显影图片上会出现一个空白区“足迹”，这种检测DNA序列的方法

称为DNasel足迹法。上述过程如图所示，下列说法正确的是（）

对黑实It

A.需设置不添加DNasel酶的对照组

B.对照组的每个DNA分子只发生一次磷酸二酯键的断裂

C.未与特定蛋白结合的DNA切割后的片段长度相同

D.此方法可筛选能与DNA进行特异性结合的目标蛋白

8.（2025•江苏模拟）关于“琼脂糖凝胶电泳”实验，下列叙述正确的是（）

A.根据待分离DNA片段的大小，需用无菌水配制0.8%〜1.2%的琼脂糖溶液

B.向琼脂糖溶液中加入适量的核酸染料后，需在沸水浴内加热至琼脂糖熔化

C.将PCR产物和电泳缓冲液混合后，需用微量移液器将混合液缓慢注入加样孔

D.待指示剂前沿迁移接近凝胶边缘时，需及时断电并取出凝胶置于紫外灯下观察

9.（2025•河北模拟）下列关于实验的叙述，正确的是（）

A.可通过观察石灰水是否变浑浊探究酵母菌呼吸方式

B.绿叶中色素提取和分离的实验应在通风条件下进行

C.DNA粗提取实验可以用鸡血细胞作材料，利用DNA易溶于酒精来初步分离DNA

D.在PCR扩增DNA时，当温度上升到50℃以上时，双链DNA解聚为单链

10.（2025•宜宾校级二模）红细胞生成素（EPO）是体内促进红细胞生成的一种激素物质，是当今最成功

的基因工程药物，可用于治疗肾衰性贫血等疾病。由于天然EPO来源极为有限，目前临床使用的红细

胞生成素主要来自基因工程技术生产的重组人红细胞生成素（rhEPO）。其简要生产流程如图，下列相

关叙述正确的是（）

人EPO基因①②中国仓鼠筛选,高效表达rhEP。基

-如果细胞"因的重组CHO细胞

值组表系（CHO）燮g

我体达载体介，肉

rhEPO

A.过程①用到的工具酶有DNA聚合酶、限制酶和DNA连接酶

B.构建的重组表达载体中终止子的作用是终止翻译过程

C.检测重组细胞是否转录出EPO的mRNA常用分子杂交技术

D.用乳腺生物反应器生产EPO可将人EPO基因导入哺乳动物体细胞获得

H.（2025•南宁二模）黄瓜叶片形状由一对等位基因控制，野生型黄瓜叶片形状为心形，经诱变处理获得

了纯合圆叶突变体甲。甲与野生型杂交，Fi均为心形叶，6自交，F2心形叶植株与圆叶植株数量比约

为3：1。用限制酶H处理亲本和Fi,电泳结果如图。下列叙述正确的是（）

酶H处理前酶H处理后

.野生型甲及野生型甲艮片段大小

L端■■■■■]69对碱基

■.149对碱基

下端■■20对碱基

A.加样孔位于该电泳图谱的下端

B.Fi植株减数分裂可形成四种基因组成不同的配子

C.诱变使植株甲的相关基因发生了碱基对的增添或缺失

D.用酶H处理F2某心形叶植株的叶形基因，电泳条带数为2或3条

12.（2025•安庆二模）借助DNA分子杂交技术进行遗传病基因诊断的一般流程为：制作能与目的基因特

异性结合的DNA探针一DNA分子杂交实验一结果分析。如图是某单基因遗传病家系图谱，若要借助

DNA分子杂交技术进一步确定该遗传病的遗传方式（不考虑X、丫同源区段），只要设计哪种探针对哪

一成员进行检测即可达到目的（）

I□正常男性

患病男性

患病女性

34

A.与正常基因结合的DNA探针、I-1

B.与致病基因结合的DNA探针、I-1

C.与正常基因结合的DNA探针、I-2或II-3

D.与致病基因结合的DNA探针、I-2或II-3

13.（2025•泰安一模）关于“DNA粗提取与鉴定”、“琼脂糖凝胶电泳”、“PCR扩增”实验，下列说法正

确的是（）

A.将洋葱切碎、研磨、过滤，滤液放置4℃冰箱中静置几分钟后，DNA存在于沉淀物中

B.鉴定过程中DNA双螺旋结构不发生改变

C.凝胶载样缓冲液中加入的核酸染料能与DNA分子结合，便于在紫外灯下观察

D.对2个双链DNA分子进行PCR扩增，第n次循环共需引物2.1个

14.（2025•枣庄二模）下列与DNA有关的实验，说法正确的是（）

A.DNA粗提取时加入冷酒精出现白色丝状物后不能用离心法收集

B.PCR缓冲液中Mg?+作用是激活DNA聚合酶，浓度越高，酶活性越大

C.DNA电泳指示剂需要加入到熔化之后凝固之前的琼脂糖中

D.DNA电泳指示剂的作用主要用来指示何时停止电泳

15.（2025•常德校级一模）用PCR方法检测转基因植株是否成功导入目的基因时，得到以下电泳图谱。其

中1号为DNA标准样液（Marker）,10号为蒸储水，PCR时加入的模板DNA如图所示。据此作出的

分析，不合理的是（）

23456789O

2OOo

100o

75o

50o

25o

1OO

2号：野生型植株DNA3号：？4〜9号：转基因植株DNA

A.PCR产物的分子大小在250-500bp之间

B.3号样品为不含目的基因的载体DNA

C.9号样品对应植株不是所需的转基因植株

D.10号确定反应体系等对结果没有干扰

二.解答题（共5小题）

16.（2025•海南模拟）通过从自然界中筛选、基因工程育种等方法可获得不同类型和性能的酵母菌。回答

下列问题：

（1）酿酒酵母菌种的性能是决定果酒品质的重要因素。利用选择培养基筛选高耐酸、高耐糖的酵母菌

时，培养基的pH应呈,同时培养基中应添加o

（2）通过基因工程可培育乳酸乙酯（白酒香味的主要来源）高产酵母菌。利用同源重组技术在重组酶

的作用下将酿酒酵母质粒上的丙酮酸脱氢酶基因（PD）直接替换为植物乳杆菌中的乳酸脱氢酶基因（L

-PG）o重组酶可催化PCR产物直接进行重组连接，不需要酶切产生黏性末端。酵母菌质粒与目的基

因L-PG连接过程如图1（AmpR表示氨茉青霉素抗性基因），L-PC基因结构及相关引物如图2。

①图1中L-PC与PD发生同源重组的前提条件是若要获得如图2所示的

含PA和PB片段的L-PG基因并进行PCR扩增，则最好选择图2中的引物。与传统双

酶切法构建基因表达载体相比，利用同源重组技术构建基因表达载体的优点是（答

出1点）。

②AmpR可作为用于酵母菌的筛选。

③请设计实验证明转L-PG基因酵母菌获得了产乳酸乙酯的能力。写出简要的实验思

路:

17.（2025•泰安一模）磷脂酸（PA）是调节植物生长发育和逆境响应的重要信使物质。为了解植物细胞中

PA的动态变化，研究人员用无缝克隆技术将高度专一的PA结合蛋白（PABD）基因与绿色荧光蛋白（GFP）

基因融合，构建有效监测细胞PA变化的荧光探针，并测定拟南芥细胞内PA含量。无缝克隆技术连接

DNA片段的机理和构建荧光探针表达载体的过程如图。

（1）无缝连接时，过程①中使用T5核酸外切酶目的是□过程③所需的酶

有

（2）PCR技术分别扩增PABD和GFP基因时，配制的两个反应体系中不同的有。引物

Ri的设计需依据的核甘酸序列。据图分析引物F1和R2分别为

（填序号）。

A.5'-TCCGGACTCAGATAGC-3'

B.5'-AGGCCTGAGTCTATCGTTATGTCCGGACTCAGATAGC-3'

C.5'-GCTATCTGACTCCGGACTTGTACAGCTCGTCGTCTCA-3'

D.5'-TCCGGACTCAGATAGCTATCGATGCGCAGCTGACGA-3'

（3）将PCR产物片段与线性质粒载体混合后，在重组酶作用下可形成环化质粒，直接用于转化细菌。

这一过程与传统重组质粒构建过程相比，无需使用的酶主要是。

（4）利用农杆菌花序侵染法转化拟南芥，将获得的种子（T1）进行表面消毒，均匀铺在含有

的MS培养基上进行筛选。T1代阳性植株自交，按单株收种并播种后获得的T2代中抗性幼苗占比

为,说明T1可能为单个位点插入的转基因株系。通过观测转基因拟南芥根尖

细胞中，了解PA的动态变化。

18.（2025•遂宁校级二模）红薯感染甘薯羽状斑驳病毒后会使老叶出现褪绿斑或紫环斑，影响红薯生长,

降低块根的品质。研究发现，当拟南芥感染病毒后，在其体内R基因的作用下会发生超敏感反应（HR）,

引起病毒感染区域以及周围组织发生细胞凋亡，将病毒释放并杀死，从而不会扩散到其他健康组织。

HR是植物局部抗病的表现，这种局部抗性继而又引发整株植物对病毒的广谱抗性，基因序列相同或相

似的病毒将不能感染远离感染区的新生组织。科学家欲将拟南芥的R基因转入红薯细胞中，培育出抗

病毒红薯，以抵御该病毒的侵染。回答下列有关问题：

（1）甘薯羽状斑驳病毒属于RNA病毒，以该病毒的遗传物质为模板获得cDNA时需要用到

酶，该酶发挥作用时，模板链上的碱基A将与子链上的碱基互补配对。

（2）科学家在构建重组质粒时，用限制酶SpeI、EcoRV对R基因进行切割，形成的末端为5?~A

3,-TGATC

和5,-GM,（填“T4”或"E.coli"）DNA连接酶连接5'一。47末端的效率更高。写出

3'-CTA3'-CTA

限制酶Spel的识别序列，注明5端和3端，并用箭头标出切割位点：o与只

用一种限制酶切割目的基因和载体相比，用两种限制酶切割目的基因和载体的优点

是o

（3）R基因上的两个限制酶切割位点如图所示,若R基因转录时以图中A链为模板链，则插入质粒时，

酶切位点（填“1”或“2”）离启动子更近，原因是。

牌切位点1密切位点2

5'—*--------------------上-3'Att

3'------------------------------------5'Btt

19.(2025•定州市校级一模)由P基因编码的P蛋白是一种水通道蛋白，该蛋白在植物调节水分吸收方面

发挥着重要作用。科研人员利用基因工程技术培育出了高表达P蛋白的转基因玉米，图1表示P基因

片段和农杆菌的Ti质粒及几种限制酶的识别序列和切割位点。回答下列问题：

Spel

EcoRi终止子

Muni：5-CAATTG-3,

Hyg11/Xbal

引物1引物2IT

a链RB•I：5/CTAGA-3'

LB

b链

引痴II痛4质粒

Mun\TiSpe\：5」应:TAGT-3'

强启动子P基因

KanREcoRi：5iGAATTC-3,

注：LB/RB表示T-DNA的边界序列，叱表示潮

霉素抗性基因，表示卡那霉素抗性基因。

图1

(1)若b链为P基因转录的模板链，则扩增P基因时，应选择的引物是。构建基因

表达载体时，切割Ti质粒应选用的两种酶为0

(2)用含重组Ti质粒的农杆菌侵染玉米后，应在含的培养基中进行筛选。科研人员进一

步用PCR验证P基因是否成功导入玉米细胞，电泳结果如图2所示。其中①为P基因，作为阳性对照，

②为阴性对照，③为检测结果，由此可验证。

图2

(3)为了验证玉米植株中是否成功表达出P蛋白，可用技术进行检测。

(4)侵染后的玉米外植体需要先进行脱分化，然后在含有(填植物激素)的培养

基上诱导生根和生芽。从遗传学的角度看，玉米外植体能形成完整植株的原因

是O

20.(2025•江苏模拟)血浆外泌体是由活细胞分泌到血液中的囊泡。研究发现，阿尔茨海默病(AD)患

者血浆外泌体上蛋白质A例一42含量显著升高，为快速诊断AD,科研人员开发了免疫磁珠外泌体聚合

酶链式反应(iMEP)技术。请回答下列问题。

DNA抗体DNA

偶联物总荧光强度相对（ft平台期

抗AR々抗体

外泌传"岁＜?仇"

M.CD63抗体力

单线期神坏次数

图2田3

（1）外泌体可参与细胞间的通讯，其上蛋白质的成熟常发生在（填细胞器）。图1为外

泌体与抗体一磁珠偶联物及DNA抗体偶联物的结合示意图，外泌体与DNA抗体偶联物特异性结合的

原理是o选择CD63蛋白制备抗体磁珠的原因是o

（2）图2为实时荧光定量PCR的过程示意图，除所示组分外，实时荧光定量PCR的反应体系中还需

加入。设计TaqMan探针的序列的依据是模板DNA的中部序列，不选择两端

序列的原因是。若PCR循环中过程①温度设置过高，会导致相同循环次数下总

荧光强度oR基团与Q基团距离近时，R的荧光能量被Q吸收，检测不到荧光信号。过程

②中，TaqDNA聚合酶可催化TaqMan探针的磷酸二酯键键断裂，导致位于探针（填5'或

3'）端的R基团远离Q基团，其能量不再被吸收，从而发出荧光信号。

（3）图3为PCR循环次数与实时荧光定量PCR反应体系中荧光强度的关系图，其中Ct值为达到阈荧

光强度时的循环次数。PCR的循环次数达到一定次数后，再进行PCR,总荧光强度基本不增加，出现

平台期，原因是受（至少答2点）等的限制。若利用iMEP技术检测时，甲

和乙两位待测者的达到Ct值的循环次数分别为10和30,其中更可能为AD患者，甲、乙体

内血浆外泌体中A01-42含量比约为0利用iMEP技术可快速诊断AD的机制

是。

2025年高考生物复习新题速递之基因工程（2025年4月）

参考答案与试题解析

一.选择题（共15小题）

题号1234567891011

答案DDCBBADDBcD

题号12131415

答案ABCB

一.选择题（共15小题）

1.（2025春•重庆校级月考）普通小麦的TaMLO基因与白粉病的易感性有关。研究发现，利用CRISPR/Cas9

基因编辑技术敲除TaMLO基因可增强小麦对白粉病的抗性，CRISPR/Cas9基因编辑技术的工作原理如

图所示。在实验过程中，科研人员构建了含有Cas9基因和sgRNA编码序列的重组质粒，并将其导入小

麦细胞中，以期在TaMLO基因两端实现精准切割。下列有关叙述正确的是（）

A.普通小麦是二倍体作物，只需敲除一个TaMLO基因即可实现稳定抗病性

B.该实验中，sgRNA的主要功能是切割目标DNA序列，从而实现基因编辑

C.CRISPR/Cas9识别目标DNA序列主要与Cas9蛋白的特异性相关

D.通过CRISPR/Cas9敲除TaMLO基因需要断开4个磷酸二酯键

【考点】基因工程在农牧、医疗、食品等方面的应用.

【专题】正推法；基因工程；理解能力.

【答案】D

【分析】限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核昔酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个

核甘酸之间的磷酸二酯键断裂。

【解答】解：A、普通小麦是六倍体植物，含有多个TaMLO同源基因，因此需要同时敲除多个基因才

能实现高效抗病，A错误；

B、sgRNA的主要功能是引导Cas9蛋白识别目标DNA序列，而不是切割DNA,B错误；

C、CRISPR/Cas9识别目标DNA序列主要与SgRNA编码序列有关，C错误；

D、在TaMLO基因两端实现精准切割以敲除靶基因，双链断裂需要断开2个磷酸二酯键，因此通过

CRISPR/Cas9敲除TaMLO基因需要断开4个磷酸二酯键，D正确。

故选：D。

【点评】本题主要考查基因工程的相关知识，要求学生有一定的理解分析能力，能够结合题干信息和所

学知识进行分析应用。

2.（2025•辽宁一模）新型蛋白质进化模型EVOLVEpro可以利用氨基酸序列，仅通过少量学习和最低限度

的实验测试来预测蛋白质空间结构，从而获得新型高活性蛋白质改造方案。下列有关说法正确的是（）

A.预测蛋白质结构需要依据肽链中肽键的结构、氨基酸的物理性质与结构

B.氨基酸是蛋白质的基本单位，氨基酸发生替换一定使蛋白质的结构和功能发生改变

C.EVOLVEpro在蛋白质工程广泛应用后将不再需要借助基因工程手段改造蛋白质

D.通过EVOLVEpro得到的蛋白质还需要进行进一步的功能检测实验才可以投入生产

【考点】蛋白质工程基本原理.

【专题】正推法；基因工程；理解能力.

【答案】D

【分析】蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因

合成，对现有蛋白质进行改造，或者制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产生活需求。

【解答】解：A、对蛋白质进行分子设计应从预期的蛋白质功能出发，对蛋白质的空间结构进行设计，

A错误；

B、氨基酸是蛋白质的基本单位，氨基酸发生替换后蛋白质的结构和功能可能没有发生改变，尤其个别

氨基酸的改变可能没有影响，B错误；

C、EVOLVEpro可以利用氨基酸序列，蛋白质工程仍需要基因修饰或基因合成等手段，EVOLVEpro在

蛋白质工程广泛应用后还需要借助基因工程手段改造蛋白质，使得产品更优良，C错误；

D、通过EVOLVEpro得到的蛋白质还需要进行进一步的功能检测实验才可以投入生产，以确保该蛋白

质对人体安全没有副作用，D正确。

故选：D。

【点评】本题主要考查蛋白质工程的内容，要求考生识记相关知识，并结合所学知识准确答题。

3.（2025•郑州二模）单碱基编辑系统可以使靶序列特定碱基发生改变，进而实现定向突变。如图为其中

一种编辑系统:dCas9末端与APOBEC1形成融合蛋白，随后gRNA将融合蛋白引导到靶位点,APOBEC1

会使单链DNA的C脱氨形成U,后续经DNA复制完成C到T的转换。相关分析错误的是（）

AP0BECI

A.gRNA通过碱基互补配对将融合蛋白引导至靶位点

B.编辑后的DNA需经过2次复制才能实现C到T的转换

C.C转换为U后，与其相连的五碳糖由脱氧核糖转为核糖

D.单碱基编辑系统可以为镰状细胞贫血病的治疗提供思路

【考点】基因工程在农牧、医疗、食品等方面的应用.

【专题】正推法；基因工程；理解能力.

【答案】C

【分析】编辑后的DNA第一次复制时，以含U的链为模板合成的子链对应位置为A,第二次复制时，

以含A的链为模板合成的子链对应位置为T„

【解答】解：A、gRNA能与靶位点DNA通过碱基互补配对结合，从而将融合蛋白引导至靶位点，A

正确；

B、编辑后的DNA第一次复制时，以含U的链为模板合成的子链对应位置为A,第二次复制时，以含

A的链为模板合成的子链对应位置为T,需经2次复制才能实现C到T的转换，B正确；

C、C转换为U后，U仍在单链DNA中，DNA中的五碳糖始终是脱氧核糖，不会转为核糖，C错误；

D、镰状细胞贫血是基因突变导致的，单碱基编辑系统可定向改变碱基，为该病的治疗提供思路，D正

确。

故选：Co

【点评】本题考查基因编辑相关知识，涉及碱基互补配对、DNA复制、基因突变等，意在考查对基因

编辑机制及相关知识的理解和应用能力。

4.（2025•邯郸模拟）下列有关“DNA的粗提取与鉴定”“琼脂糖凝胶电泳”实验的相关说法，正确的是

（）

A.利用酒精初步分离DNA与蛋白质的原理是DNA溶于酒精

B.过滤后的研磨液放置在4℃冰箱中可防止DNA被降解

C.琼脂糖凝胶电泳时，DNA分子越大，迁移速率越快

D.提取到的丝状物与二苯胺溶液充分混匀后即可变为蓝色

【考点】DNA的粗提取与鉴定；DNA片段的扩增与电泳鉴定.

【专题】正推法；基因工程；理解能力.

【答案】B

【分析】DNA不溶于酒精，而某些蛋白质溶于酒精；鉴定DNA时，需要先将DNA溶解在NaCl溶液

中，再与二苯胺溶液混合，并在水浴加热条件下呈现蓝色；耐高温的DNA聚合酶在延伸环节时进行子

链的合成。

【解答】解：A、DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质溶于酒精，利用这一原理可以将DNA

与蛋白质分离，A错误；

B、洋葱研磨液在4℃冰箱中放置几分钟，可降低DNA水解酶的活性，防止DNA降解，B正确；

C、待测样品中DNA分子的大小和构象、凝胶的浓度等都会影响DNA在电泳中的迁移速率，DNA分

子越小，迁移的速率越快，C错误；

D、将提取到的丝状物与二苯胺溶液充分混匀后，沸水浴加热条件下才会呈现蓝色，D错误。

故选：Bo

【点评】本题主要考查DNA的粗提取与鉴定的内容，要求考生识记相关知识，并结合所学知识准确答

题。

5.（2025•云浮模拟）某小组同学选择菜花为实验材料进行“DNA粗提取与鉴定”的实验，并进行了一些

改进。基本流程为：裂解一分离一沉淀一鉴定，下列分析错误的是（）

A.裂解：研磨时加入适量纤维素酶可加速细胞破裂释放出DNA等物质

B.分离：利用DNA溶于酒精的特性去除混合物中的蛋白质等物质

C.沉淀：多次离心研磨液并将沉淀物收集晾干可提高DNA的纯度

D.鉴定：在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂呈现蓝色

【考点】DNA的粗提取与鉴定.

【专题】正推法；从生物材料提取特定成分.

【答案】B

【分析】DNA粗提取和鉴定的原理：1、DNA的溶解性：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度NaCl

溶液中溶解度不同（DNA在0.14mol/L的氯化钠中溶解度最低）；DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某

些蛋白质溶于酒精。2、DNA的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。

【解答】解：A、植物细胞壁主要由纤维素和果胶组成，研磨时加入纤维素酶可以分解纤维素破坏细胞

壁，从而加快细胞破裂释放出DNA等物质，A正确；

B、利用DNA不能溶于酒精溶液，而某些蛋白质能溶于酒精溶液，利用体积分数为95%的酒精可将DNA

与蛋白质分离，B错误；

C、不同物质分子的质量不同，离心时可将不同分子量的物质进行分离，因此多次离心研磨液并将沉淀

物收集晾干可提高DNA的纯度，C正确；

D、DNA遇二苯胺试剂在沸水浴条件下呈现蓝色，D正确。

故选：B。

【点评】本题考查DNA的粗提取和鉴定的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，具备运用

所学知识综合分析问题的能力是解答本题的关键。

6.（2025•淮安校级二模）经典的CRISPR-Cas9系统可以通过敲除基因实现基因沉默。近日研究人员基

于CRISPR系统开发了一个名为CRISPRoff的新型编辑器，可以将甲基（Me）添加在DNA链的特定位

点上;研究人员还创建了功能相反的编辑器一一CRISPRon,它能逆转基因沉默。下列叙述正确的是（）

A.新型编辑器对染色体DNA的效果低于染色质DNA

B.CRISPRo任利用基因重组来实现基因沉默

C.CRISPRo任对基因的影响不能遗传给后代

D.CRISPRon有助于基因与DNA聚合酶结合以恢复表达

【考点】基因工程在农牧、医疗、食品等方面的应用.

【专题】模式图；遗传信息的转录和翻译；基因工程；理解能力.

【答案】A

【分析】表观遗传是指DNA序列不发生变化，但基因的表达却发生了可遗传的改变，即基因型未发生

变化而表现型却发生了改变，如DNA的甲基化，甲基化的基因不能与RNA聚合酶结合，故无法进行

转录产生mRNA,也就无法进行翻译，最终无法合成相应蛋白，从而抑制了基因的表达。

【解答】解：A、新型编辑器可将甲基添加在DNA链的特定位点上，由于染色体螺旋化程度高，故新

型编辑器对染色体DNA的效果低于染色质DNA,A正确；

B、CRISPRoff将甲基（Me）添加在DNA链的特定位点上，是表观遗传的一种，属于可遗传变异，能

够遗传给后代，没有引起碱基序列改变，也没有引起基因重组，BC错误；

D、基因沉默是相关基因无法表达，CRISPRon能逆转基因沉默，即有助于基因与RNA聚合酶结合以恢

复表达，D错误。

故选：Ao

【点评】本题考查基因表达的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力、运用所学知识综合分析

问题的能力。

7.（2025•山东模拟）用DNasel酶切割DNA分子，可产生一系列不同长度的DNA片段，且相邻片段只相

差1个核甘酸。当DNA分子中的某一区段与特异的转录因子蛋白质结合后，加入DNasel酶时该区段

会得到保护，在凝胶电泳放射性自显影图片上会出现一个空白区“足迹”，这种检测DNA序列的方法

称为DNasel足迹法。上述过程如图所示，下列说法正确的是（）

A.需设置不添加DNasel酶的对照组

B.对照组的每个DNA分子只发生一次磷酸二酯键的断裂

C.未与特定蛋白结合的DNA切割后的片段长度相同

D.此方法可筛选能与DNA进行特异性结合的目标蛋白

【考点】基因工程的操作过程综合.

【专题】模式图；基因工程；理解能力.

【答案】D

【分析】基因工程的工具：（1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核昔酸序列，并且使每一

条链中特定部位的两个核甘酸之间的磷酸二酯键断裂。（2）DNA连接酶：连接的是两个核昔酸之间的

磷酸二酯键。（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒。

【解答】解：A、该实验是研究加入DNasel酶后，DNA分子与转录因子蛋白质结合情况及切割情况，

不需要设置不添加DNaseI酶的对照组，因为重点是对比结合蛋白和未结合蛋白时DNA被DNaseI酶

切割的差异，而不是与不添加酶的情况对比，A错误；

B、由题意可知，用DNaseI酶切割DNA分子可产生一系列不同长度的DNA片段，且相邻片段只相差

1个核甘酸，这说明对照组的DNA分子被多次切割，磷酸二酯键多次断裂，而不是只发生一次磷酸二

酯键的断裂，B错误；

C、因为用DNasel酶切割DNA分子会产生一系列不同长度的DNA片段，所以未与特定蛋白结合的DNA

切割后的片段长度是不同的，C错误；

D、由于当DNA分子中的某一区段与特异的转录因子蛋白质结合后，加入DNaseI酶时该区段会得到

保护，在凝胶电泳放射性自显影图片上会出现一个空白区“足迹”，通过观察是否有“足迹”，就可以判

断是否有能与DNA进行特异性结合的目标蛋白，所以此方法可筛选能与DNA进行特异性结合的目标

蛋白，D正确。

故选：Do

【点评】本题主要考查的是基因工程的操作的相关知识，意在考查学生对基础知识的理解掌握的能力，

难度适中。

8.（2025•江苏模拟）关于“琼脂糖凝胶电泳”实验，下列叙述正确的是（）

A.根据待分离DNA片段的大小，需用无菌水配制0.8%〜1.2%的琼脂糖溶液

B.向琼脂糖溶液中加入适量的核酸染料后，需在沸水浴内加热至琼脂糖熔化

C.将PCR产物和电泳缓冲液混合后，需用微量移液器将混合液缓慢注入加样孔

D.待指示剂前沿迁移接近凝胶边缘时，需及时断电并取出凝胶置于紫外灯下观察

【考点】DNA片段的扩增与电泳鉴定.

【专题】正推法；PCR技术；理解能力.

【答案】D

【分析】PCR原理：目的基因DNA受热变性后解为单链，引物与单链相应互补序列结合；然后以单链

DNA为模板，在DNA聚合酶作用下进行延伸，即将4种脱氧核昔酸加到引物的3,端，如此重复循环多

次。由于延伸后得到的产物又可以作为下一个循环的模板，因而每一次循环后目的基因的量可以增加一

倍，即呈指数形式扩增。

【解答】解：A、配制琼脂糖溶液应用电泳缓冲液，不是无菌水，A错误；

B、应先熔化琼脂糖，冷却后再加核酸染料，B错误；

C、PCR产物与凝胶载样缓冲液混合后，用微量移液器缓慢注入加样孔，操作正确，C错误；

D、指示剂前沿接近凝胶边缘时断电，取出凝胶在紫外灯下观察，操作正确，D正确。

故选：D。

【点评】本题考查琼脂糖凝胶电泳实验操作知识，考查考生对实验试剂使用、操作步骤等要点的掌握。

9.（2025•河北模拟）下列关于实验的叙述，正确的是（）

A.可通过观察石灰水是否变浑浊探究酵母菌呼吸方式

B.绿叶中色素提取和分离的实验应在通风条件下进行

C.DNA粗提取实验可以用鸡血细胞作材料，利用DNA易溶于酒精来初步分离DNA

D.在PCR扩增DNA时，当温度上升到50℃以上时，双链DNA解聚为单链

【考点】DNA的粗提取与鉴定；DNA片段的扩增与电泳鉴定；探究酵母菌的呼吸方式.

【专题】正推法；光合作用与细胞呼吸；PCR技术；理解能力.

【答案】B

【分析】色素的提取和分离：

（1）叶绿体中的色素是有机物，不溶于水，易溶于丙酮等有机溶剂中，所以用丙酮、乙醇等能提取色

素。

（2）叶绿体色素在层析液中的溶解度不同，分子量小的溶解度高，随层析液在滤纸上扩散得快，溶解

度低的随层析液在滤纸上扩散得慢，所以用层析法来分离四种色素，滤纸条从上到下依次是：胡萝卜素

（橙黄色）、叶黄素（黄色）、叶绿素a（蓝绿色）、叶绿素b（黄绿色）。

【解答】解：A、酵母菌有氧呼吸和无氧呼吸都能产生二氧化碳，所以不能通过观察澄清石灰水是否变

浑浊来判断酵母菌的呼吸方式，A错误；

B、层析液有毒性，故本实验应在通风条件下进行，实验结束后及时用肥皂洗手，B正确；

C、DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精，故DNA粗提取实验可以用鸡血细胞作材

料，利用DNA易溶于酒精来初步分离DNA,C错误；

D、在PCR扩增DNA时，当温度上升到90℃以上时，双链DNA解聚为单链，D错误。

故选：B=

【点评】本题主要考查DNA的粗提取与鉴定、探究酵母菌的呼吸方式、色素的提取和分离、DNA片段

的扩增与电泳鉴定的内容，要求考生识记相关知识，并结合所学知识准确答题。

10.（2025•宜宾校级二模）红细胞生成素（EPO）是体内促进红细胞生成的一种激素物质，是当今最成功

的基因工程药物，可用于治疗肾衰性贫血等疾病。由于天然EPO来源极为有限，目前临床使用的红细

胞生成素主要来自基因工程技术生产的重组人红细胞生成素（rhEPO）。其简要生产流程如图，下列相

关叙述正确的是（）

2中国仓鼠筛选高效表达rhEPO基

一卯巢细胞因的聿组CHO细胞

系（CHO）分

离

A.过程①用到的工具酶有DNA聚合酶、限制酶和DNA连接酶

B.构建的重组表达载体中终止子的作用是终止翻译过程

C.检测重组细胞是否转录出EPO的mRNA常用分子杂交技术

D.用乳腺生物反应器生产EPO可将人EPO基因导入哺乳动物体细胞获得

【考点】基因工程的操作过程综合.

【专题】模式图；基因工程.

【答案】C

【分析】分析题图：图中①表示基因表达载体的构建，②表示将目的基因导入受体细胞。

【解答】解：A、过程①用到的工具酶有限制酶（切割目的基因和运载体）和DNA连接酶（连接切割

后的目的基因和运载体），A错误；

B、构建的重组表达载体中终止子的作用是终止转录，B错误；

C、检测重组细胞是否转录出EPO的mRNA常用分子杂交技术，若出现DNA-RNA杂交带，则证明

转录成功，C正确；

D、用乳腺生物反应器生产EPO,先将人EPO基因与乳腺蛋白基因启动子等调控组件重组在一起，再

导入哺乳动物的受精卵，D错误。

故选：C=

【点评】本题结合图解，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各

操作步骤中需要注意的细节，能结合所学的知识准确答题。

H.（2025•南宁二模）黄瓜叶片形状由一对等位基因控制，野生型黄瓜叶片形状为心形，经诱变处理获得

了纯合圆叶突变体甲。甲与野生型杂交，6均为心形叶，Fi自交，F2心形叶植株与圆叶植株数量比约

为3：1。用限制酶H处理亲本和Fi,电泳结果如图。下列叙述正确的是（）

酶H处理前酶H处理后

野生型甲及野生型甲艮片段大小

上端■■■■■]69对碱基

149对碱基

20对碱基

A.加样孔位于该电泳图谱的下端

B.Fi植株减数分裂可形成四种基因组成不同的配子

C.诱变使植株甲的相关基因发生了碱基对的增添或缺失

D.用酶H处理F2某心形叶植株的叶形基因，电泳条带数为2或3条

【考点】DNA片段的扩增与电泳鉴定；基因的分离定律的实质及应用；基因突变的概念、原因、特点

及意义.

【专题】模式图；基因工程；理解能力.

【答案】D

【分析】1、DNA分子具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷。在电

场的作用下，这些带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动，这个过程就是电泳。PCR的产物一

般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象

等有关。凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来。

2、据题干信息，黄瓜叶片形状由一对等位基因控制，野生型黄瓜叶片形状为心形，经诱变处理获得了

纯合圆叶突变体甲。甲与野生型杂交，Fi均为心形叶，因此心形叶为显性，圆叶为隐性。

【解答】解：A、依据电泳的原理，DNA的分子大小影响电泳的迁移速度，分子越大，迁移越慢，图

中产物电泳时加样孔在图中的上端，A错误；

B、黄瓜叶片形状由一对等位基因控制，Fi植株为杂合子，减数分裂可形成2种基因组成不同的配子,

B错误；

C、甲为纯合圆叶突变体，由图中限制酶H处理后甲的片段大小未改变，野生型被限制酶H切割，故

与野生型个体的叶形基因相比，甲的突变基因碱基序列的改变是由碱基对的替换引起的，C错误；

D、F2中某心形叶个体的叶形基因型为显性纯合子或杂合子，用限制