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TechnicalGuidelinesforHumanParainfluenzaVirusNucleicAcid2025 前 引 附录A(资料性)痰液标本预处 附录B(资料性)引物和探针序列及RT-PCR反应体系组 GB19489WS233HumanparainfluenzaSerotypeofReal-timeRT-PCR:实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real-timefluorescencequantitativereverse-transcriptionpolymerasechainreaction)RNA:核糖核酸(ribonucleicacid)RNaseP:核糖核酸酶P(ribonucleaseP) RNA提取。K消化或痰液消化液预处理(A)后进行病毒RNA 病毒RNA提取应严格遵循试剂盒或全自动核酸提取仪操作说明执行,若计划在24h内使用,需于2℃~8℃保存;如需长期保存,应于-60℃~-80℃超低温环境保存,避免反复冻融。 HPIV的核酸检测(B.1) 配制HPIV四种血清型单通道核酸检测Real-timeRT-PCR反应体系,包含预混反应缓冲液、逆转录/ 45、5min95、5minFAM荧光(HPIV1)、VIC荧光(HPIV2)、CY5荧光(HPIV3)、TexasRed荧光 Ct值<35.0,出现典型的S 设立阴性对照、阳性对照和提取对照监测核酸检测有效性;设立RNaseP对照监测采集的标本阳性对照Ct值<35.0,并且出现典型的SRNasePHPIV核酸检测结果判定为阴性时,RNaseP对照检测结果阴性代表采集的标本质量不符合要求。 实验室应遵循GB19489WS233个人防护和实验过程中产生的所有废弃物应遵循GB19489附录30min~60min,待痰液充分消化后,进行病毒RNA提取。50mL。表A.10.1000.7800.0200.1120.0207.5PH值(25
附录引物和探针序列及RT-PCR表B.1HPI
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