1.2.2微生物的选择培养与计数课件高二下学期生物人教版选择性必修3

第2节第2课时微生物的选择培养和计数第1章发酵工程人教版高中生物

选择性必修31阐明微生物选择培养的原理。2进行土壤中分解尿素的细菌的分离和计数(重、难点)。自然界中微生物数量繁多，种类庞杂，要想从中分离出需要的特定微生物并不容易，尤其当要分离的微生物在混合菌群中不是优势种群时，仅通过一般的平板划线法或稀释涂布平板法很难实现。该怎么办呢？事实1稀释涂布平板法中出现的杂菌

新课导入科学实例寻找耐高温的DNA聚合酶4美国黄石公园筛选原因：因为热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物，而水生栖热菌能在70-800C高温条件下生存。1966年，布鲁克在美国黄石国家公园的一个热泉中发现了耐热的水生栖热菌，并分离到耐高温的DNA聚合酶。耐高温的酶耐高温生物体高温环境（热泉、火山口）寻找寻找PCR是一种在体外DNA复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。那么，如何从众多的微生物中筛选出单一菌种？启示：根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。耐寒微生物耐热微生物石油分解菌选择培养基人为提供有利于目的菌生长的条件（包括营养、温度和pH）等，同时抑制或阻止其他微生物生长。纤维素分解菌适用实验室微生物的筛选同理：

新课导入科学实例

选择培养基、微生物的选择培养和数量测定一

探究•实践——土壤中分解尿素的细菌的分离与计数二目录1.选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。2.类型：（一）选择培养基类型条件分离得到的菌种改变培养条件70～80℃高温无氧环境添加某种化学物质加入青霉素高浓度食盐特殊碳、氮源石油是唯一碳源营养缺陷不加碳源不加氮源水生栖热菌酵母菌、霉菌等真菌金黄色葡萄球菌（耐高盐）能消除石油污染的微生物自养型微生物固氮菌厌氧型微生物、兼性厌氧型青霉素等能抑制细菌生长，对真菌无作用（一）选择培养基培养基中加氨苄青霉素具有抗氨苄青霉素能力的菌落长出各种各样的细菌培养基+氨苄青霉素

没有抗氨苄青霉素能力的菌落被淘汰

怎样选择出抗氨苄青霉素能力的细菌?培养基

怎么证明一个选择培养基具有选择性呢？

怎么证明一个选择培养基具有选择性呢？（一）选择培养基

应该设置基础培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基）或完全培养基作为对照，若对照培养基中生长的菌落数菌多于该选择培养基，则该选择培养基具有选择性。基础培养基选择培养基

如果让你分离土壤中分解尿素的细菌，你应该怎么设计呢？

尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，施入土壤后，会被某些细菌分解成NH3，再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。这些细菌能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。通常1g土壤中有几亿到几百亿个土壤微生物，其中细菌的数量最多，能分解尿素的细菌只是其中的一部分。事实2结合材料思考1.如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？在选择培养基中，以尿素作为唯一氮源，只有能合成脲酶的细菌才能生长发育繁殖。2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？除以尿素作为唯一氮源外，该培养基的其他营养成分与普通培养基基本相同。(细菌生长的氮源)尿素NH3脲酶尿素分解菌1.选择培养基的作用：分离并计数某种微生物的数量（例：能分解尿素的细菌）。（二）微生物的选择培养由于土壤细菌数量庞大，能分解尿素的细菌只占部分。那么怎么获得特定微生物的纯培养物并进行计数呢？选择培养基+稀释涂布平板单菌落2.微生物选择培养获取纯培养物的方法：(1)方法:稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体选择培养基的表面，进行培养。(2)基本操作:①梯度稀释②涂布平板仅通过选择培养基就可以知道1g土壤中有多少能分解尿素的细菌吗？测定分解尿素的细菌的数量获得分解尿素的细菌的纯培养物当稀释度足够高时，能在培养基表面形成单个菌落不能！还需对土壤菌液进行充分稀释，然后再将菌液涂布到制备好的选择培养基上梯度稀释涂布平板1×101mL1mL1mL1mL1mL1mL1×1021×1031×1041×1051×1061×1079mL无菌水90mL无菌水10g在火焰旁将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。3.稀释涂布平板法的操作过程：（二）微生物的选择培养①梯度稀释取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。微量移液器①取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。②将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。③将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，培养。3.稀释涂布平板法的操作过程：（二）微生物的选择培养②涂布平板梯度稀释涂布平板注意：各梯度分别涂布3个平板（重复实验）1个不涂布作空白对照。待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30～37℃的恒温培养箱中培养1～2d。稀释103倍稀释104倍稀释105倍空白对照恒温培养箱思考：1.设置空白对照组的目的是什么？检测培养基灭菌是否彻底，保证实验结果的准确性。2.根据实验结果，能否计算出细菌数目的是多少？原理是什么？可以。4.培养与观察（二）微生物的选择培养微生物的选择培养和计数任务一2.用平板划线法接种培养结果的图片如下。请结合图片分析，平板划线法能否达到对细菌进行计数的目的？为什么？提示不能；平板划线法最开始的划线很可能菌类会长成一片，导致无法计数，此外灼烧接种环的时候也会杀死一部分菌类。3.当菌液稀释倍数足够高时，培养基表面生长的一个单菌落来源于一个活菌。用稀释涂布平板法接种培养的结果如图所示。与平板划线法相比，为什么稀释涂布平板法可以用于细菌的计数？提示稀释涂布平板法会进行等比稀释，在合适的稀释倍数下，均匀涂布得到的菌落互不接触，可以确定菌落的密度，再通过计算可以得知原液中的活细菌数。①分离和纯化微生物②统计样品中活菌的数目（三）微生物的数量测定1.稀释涂布平板法②计数原则：①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个______。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少______。活菌活菌选择30-300个菌落的平板进行计数；每个稀释度至少取3个平板取其平均值；统计的结果一般用菌落数而不是活菌数；恰当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。缺点：统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。原因：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。——间接计数法分析实验结果时，要考虑重复组结果是否接近，如果相差太大，意味着操作有误，需重新实验。M：代表稀释倍数；C：代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；V：代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)4号试管的结果表明每克土壤中的活菌数约为________个③计算公式：每g样品中的菌落数＝(C÷V)×M1.1×108——间接计数法（三）微生物的数量测定1.稀释涂布平板法常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数利用特定的____________或

______________在________下观察、计数，然后再计算

__________的样品中微生物的数量。①原理：细菌计数板血细胞计数板显微镜一定体积②优点：③缺点：快速、直观①不能区分死菌和活菌→偏大②不适于对运动细菌的计数。③个体小的细菌在显微镜下难以观察。台盼蓝染液染色，可以通过统计无色细胞的个数来对活菌进行计数。——直接计数法（三）微生物的数量测定2.显微镜直接计数法对细菌等较小的细胞进行观察和计数计数区放大后的计数室④计数方法：每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数（三）微生物的数量测定2.显微镜直接计数法——直接计数法注意：统计结果一般是活菌数和死菌数的总和。微生物的选择培养和计数任务一项目显微镜直接计数法稀释涂布平板法主要用具显微镜、_____________

等培养基、涂布器等计数依据菌株本身培养基上的

数优点计数方便、操作简单计数的都是活菌缺点死菌、活菌都计数在内操作复杂、有一定误差计算公式每毫升原液含菌株数＝每小格平均菌株数×400×104×稀释倍数血细胞计数板或细菌计数板菌落每克样品中的菌株数＝6.请完善表格中稀释涂布平板法和显微镜直接计数法的比较。项目操作特点结果稀释涂布平板法取一定稀释度的样品涂布平板↓用无菌玻璃涂布器将样品涂布均匀先制作平板后加入菌液细菌菌落通常仅在平板表面生长混合平板法取稀释的少量菌悬液与50℃左右的培养基混合均匀↓将与样品混合后的培养基倒入无菌培养皿中菌液与培养基混合，共同倒平板细菌菌落出现在平板表面和内部比较两种分离和纯化方法核心归纳平板划线法稀释涂布平板法主要步骤接种工具单菌落的获得用途培养结果相同点接种环在固体培养基表面连续划线等比稀释操作和涂布平板操作接种环涂布器从最后划线的区域挑取稀释度合适，整个平板上都可找到单菌落分离纯化菌种，获得单菌落①分离纯化菌种，获得单菌落②用于计数都能将微生物分散到固体培养基表面，以获得单细胞菌落，达到分离纯化微生物的目的，也可用于观察菌落特征平板划线法不能达到对细菌进行计数的目的，因为平板划线法最开始的划线很可能菌类会长成一片，导致无法计数，此外灼烧接种环的时候也会杀死一部分菌类。稀释涂布平板法会进行等比稀释，在合适的稀释倍数下，均匀涂布得到的菌落互不接触，可以确定菌类的密度，再通过计算可以得知原液的菌落数。1、两种纯培养方法比较牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g琼脂20.0g蒸馏水定容到1000ml培养基一KH2PO41.4gNaH2PO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g琼脂15.0g蒸馏水定容到1000ml培养基二1.从物理性质来讲，两者属于_____培养基，判断依据是_______________；该类培养基的主要用途为_____________________。2.从目的用途上来讲，

属于选择培养基，目的是为了获得

。3.两种培养基共有的培养基成分有：

。培养基一的主要碳源为

，主要氮源为

；培养基二的碳源为

，氮源为

。固体添加了凝固剂琼脂分离、鉴定、计数、保存培养基二能分解尿素的微生物碳源、氮源、无机盐、水牛肉膏蛋白胨葡萄糖尿素

实战训练

(1)以尿素为唯一氮源的培养基是选择培养基(

)(2)脲酶能催化尿素分解产生N2，N2可作为细菌生长的氮源(

)提示分解尿素的细菌合成的脲酶将尿素分解成氨(NH3)，氨可作为细菌生长的氮源。(3)利用显微镜直接计数法统计的细菌数量就是活菌的数量(

)提示利用显微镜直接计数法统计的细菌数量无法区分死菌和活菌。××√跟踪训练1.(2023·广东，10)研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线(如图)和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是A.a点时取样、尿素氮源培养基B.b点时取样、角蛋白氮源培养基C.b点时取样、蛋白胨氮源培养基D.c点时取样、角蛋白氮源培养基√跟踪训练√2.如图是纯化微生物时采用的两种接种方法接种后培养的效果图，下列相关叙述正确的是A.图甲三个平板中所用培养液的稀释倍数相同B.图甲、乙均适合分离微生物，但乙不适合对微生物进行计数C.图甲、图乙所用的接种工具分别是接种环和涂布器D.图乙每次划线应从同一起点开始以便使聚集的菌种逐步稀释获得单菌落跟踪训练√3.用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中得到以下几种统计结果，其中正确的是（

）A.涂布了1个平板，统计的菌落数是230B.涂布了2个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238C.涂布了3个平板，统计的菌落数分别是13、234和254，取平均值167D.涂布了3个平板，统计的菌落数分别为210、240和250，取平均值233分析实验结果时，要考虑重复组结果是否接近，如果相差太大，意味着操作有误，需重新实验。

选择培养基、微生物的选择培养和数量测定一

探究•实践——土壤中分解尿素的细菌的分离与计数二目录1.提出问题：（1）土壤中含有能分解尿素的细菌，我们如何分离它们？（2）每克土壤样品究竟含有多少这样的细菌？利用以尿素作为唯一氮源的选择培养基，可以分离。2.做出假设：3.实验原理：4.实验步骤：（一）实验设计绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成____的微生物才能分解尿素，利用以_____作为唯一氮源的___________，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。脲酶尿素选择培养基CO(NH2)2+H2O脲酶2NH3+CO2常见的分解尿素的微生物：芽孢杆菌、小球菌、棒状杆菌等细菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。土壤取样制备培养基样品稀释与取样涂布微生物的培养与观察菌落计数（1）无菌操作：（2）做好标记：（3）规划时间：本实验使用的平板和试管较多，为避免混淆，最好在使用前做好标记。对于耗时较长的生物实验，需要事先规划时间，以便提高实验效率，在操作时有条不紊。如在标记培养皿时应该注明组别、培养日期和平板上培养样品的稀释度等取土样的用具在使用前都需要灭菌。（二）操作提示

视频示范土壤中分解尿素的细菌的分离与计数（三）实验过程土壤取样制备培养基样品稀释与取样涂布微生物的培养与观察菌落计数①土壤要求：酸碱度接近中性且潮湿。②取样部位：距地表约3～8cm的土壤层(绝大部分细菌分布)。制备选择培养基(尿素为唯一氮源)。制备牛肉膏蛋白胨培养基对照作用为什么还要制备牛肉膏蛋白胨培养基？取土样时用的铁铲和取样袋在使用前都需要灭菌。操作完成后，一定要洗手。注意测土壤中细菌数量，一般选用1x104、1x105和1x106倍的稀释液进行平板培养。不同微生物在土壤中含量不同，分离不同的微生物采用不同的稀释度，以保证获得菌落数在30～300、适于计数的平板。测细菌数：一般用104、105、106稀释液测放线菌：一般用103、104、105稀释液测真菌数：一般用102、103、104稀释液（三）实验过程土壤取样制备培养基样品稀释与取样涂布微生物的培养与观察菌落计数在初次实验中，对于稀释的范围没有把握，怎样做才能保证从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数？

选择一个比较宽的范围，将1×103～1×107倍稀释的稀释液分别涂布到平板上培养，以保证能从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数注样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落数目①每个浓度设置了

个平板，1、2、3平板是选择培养基（

实验），4为

培养基；用以判断选择培养基是否具有选择作用若牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目大于选择培养基上的数目，则说明选择培养基具有筛选作用。（三）实验过程土壤取样制备培养基样品稀释与取样涂布微生物的培养与观察菌落计数4重复牛肉膏蛋白胨②如何验证培养基中是否含有杂菌？设置2个平板作为对照：不涂布稀释液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基。若对照的培养基中无菌落生长，则说明未被杂菌污染。①培养：②观察：根据不同微生物的需要，控制适宜的培养温度和培养时间。细菌一般在30～37℃的温度下培养1～2d。a．观察方法：每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足而遗漏部分菌落。b．记录菌落的特征：包括菌落的形状、大小和颜色等。得到的菌落一定是分解尿素的细菌吗？不一定；因为有些微生物可以利用能分解尿素的细菌的代谢物进行生长繁殖。（三）实验过程土壤取样制备培养基样品稀释与取样涂布微生物的培养与观察菌落计数组别具体组别具体操作作用实验组实验组1实验组2实验组3实验组4对照组对照组1对照组2实验结果涂布接种的选择培养基涂布接种的牛肉膏蛋白胨培养基不涂布接种的选择培养基不涂布接种的牛肉膏蛋白胨培养基三次重复减少偶然因素对实验结果的影响，用以分离并计数能分解尿素的细菌。用以判断选择培养基是否具有选择作用用以验证选择培养基中是否含有杂菌用以验证牛肉膏培养基中是否含有杂菌实验组1、2、3分离得到尿素分解菌的单菌落；实验组4得到多种菌落；对照组1、2正常情况下无菌落。（四）实验结果分析与评价实验结果分析（四）实验结果分析与评价1.在稀释涂布平板法中，为何需至少涂布3个平板？提示作为重复实验，统计时取平均值，以减少偶然因素对实验结果的影响，增强实验结果的说服力。2.为什么要选取菌落数目稳定时的记录作为结果？提示尽量缩小统计的菌落数与实际活菌数的差值，因为繁殖慢的菌体开始看不出明显的菌落特征。3.某同学在三种稀释度下吸取0.1mL的菌液涂布平板，统计菌落数，得到以下数据，试计算1g样品中的细菌数是

个。

平板稀释度平板1平板2平板31053203603561062122342561072123182.34×109（四）实验结果分析与评价4.结合对照组，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落？提示如果没有接种的培养基上没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。

如果接种后的完全培养基上的菌落数明显多于选择培养基上的菌落数，说明选择培养基筛选出了一些尿素分解菌。5.你统计的每克土壤中含有能分解尿素的细菌的菌落数是多少？与其他同学的结果接近吗？如果差异很大，可能是什么原因引起的？提示

若选取同一种土样，统计结果应该相近；若结果相差太远，则需要从各项操作过程中去分析、寻找可能的原因。如何进一步鉴定选择培养基上的菌落是分解尿素的细菌？方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。CO（NH2）2+H2O CO2+2NH3

脲酶原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→酚红变红→脲酶阳性①液体培养基可以直接看液体的变色情况；②固体培养基上可以观察菌落周围是否出现红色环带。

（红色环带直径与菌落直径比值越大，说明分解能力越强）鉴别培养基土壤中分解尿素的细菌的鉴定进一步探究呈碱性，遇酚红指示剂呈红色。土壤中分解尿素的细菌的分离、计数与鉴定任务2案例：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。1.甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。2.乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。3.丙同学认为乙同学应该将21舍去，然后取平均值。你认为这三位同学的做法正确吗？如果有问题，错在哪？如何改进？甲：没有重复实验（至少涂布3个平板）。为增加实验的说服力与准确性，应设置重复实验，在同一稀释度下至少涂布3个平板，统计结果后计算平均值。乙和丙：其中一个平板计数结果与其他两个相差太大，操作过程可能出现了错误。微生物计数时，如果实验中出现重复实验的结果差别很大的情况，应分析实验过程中可能的影响因素，找出差异的原因，而不能简单地将结果舍弃后进行计数。土壤中分解尿素的细菌的分离、计数与鉴定任务23.尝试完成表中对微生物的分离与计数实验结果的分析。目的现象结论是否有杂菌污染的判断____________________________未被杂菌污染培养物中菌落形态多样，菌落数偏高被杂菌污染选择培养基是否起筛选作用牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目______选择培养基上的数目选择培养基具有筛选作用样品稀释评价得到

3个或3个以上菌落数目在___________的平板操作成功重复组的结果比较各重复组，若选取同一种土样，统计结果应_______操作成功对照组的培养基中无菌落生长大于30—300接近核心归纳微生物的筛选方法单菌落挑取法利用平板划线法或稀释涂布平板法接种到固体培养基表面，直接根据微生物菌落的特征（菌落的形状、大小、隆起程度和颜色）利用单菌落挑取的方法获得目的微生物选择培养法利用选择培养基对微生物进行选择培养，直接获得目的微生物鉴定培养法利用鉴别培养基使目的微生物菌落呈现特有的特征，然后筛选目的微生物核心归纳项目选择培养基鉴别培养基原理用途举例图示加入不影响甚至促进目标微生物生长，而抑制或阻止其他种类微生物生长的化学物质加入某种指示剂或化学药品(不影响微生物正常生长)，使微生物的某种代谢产物与培养基中的特定指示剂或化学药品发生反应培养、分离出目标微生物鉴别不同的微生物培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素，抑制细菌生长；用以尿素作为唯一氮源的培养基来培养尿素分解菌可用伊红—亚甲蓝琼脂培养基鉴定饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈深紫色，并有金属光泽)(1)测定不同微生物数量时，接种的土壤稀释液的稀释度相同(

)提示土壤中各种微生物的数量不同，因此分离不同的微生物要采用不同的稀释度。(2)利用稀释涂布平板法统计菌落数目时，统计的菌落数就是活菌的实际数(

)提示当两个或多个菌落连在一起时，只能观察计为一个菌落，因此利用稀释涂布平板法统计的菌落数目往往比活菌的实际数目少。(3)菌落特征是鉴别菌种的重要依据(

)××√跟踪训练3.(多选)下列关于“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验操作的叙述，正确的是A.利用稀释涂布平板法准确估计菌落数目的关键是有恰当的稀释度B.若要判断选择培养基是否起到了选择作用，需要设置未接种的牛肉膏

蛋白胨培养基作为对照C.该实验应采用稀释涂布平板法D.用以尿素为唯一氮源且添加了酸碱缓冲剂的培养基来培养该细菌后会

使酚红指示剂变红√√跟踪训练4.(2023·江苏连云港高二期末)在做“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”的实验时，甲同学从对应稀释倍数为106的培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只筛选出大约50个菌落。下列有关叙述错误的是A.甲同学出现这种结果的原因可能是土样不同，也可能是操作过程出了问题B.将甲同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养作为空白对照，

可以证明培养基是否受到污染C.让其他同学用与甲同学一样的土壤进行实验，如果结果与甲同学一致，

则可以证明甲同学操作无误D.B、C选项的实验思路都遵循了实验的

对照原则√B选项的实验思路遵循了实验的对照原则，C选项的实验思路遵循了实验的重复原则，D错误。跟踪训练4.(2022·福建莆田高二期中)餐余垃圾在垃圾集中点采用生化＋雾化＋膜过滤技术处理后，可以达到无次污染的标准。为筛选对抗生素有抗性、高效降解淀粉的微生物，提高“生化”处理的效率，研究人员将餐余垃圾机械化处理后加入装有无菌水的锥形瓶中制备餐余垃圾浸出液，然后进行如图所示操作。下列说法错误的是

A.餐余垃圾浸出液在接种前通常需要进行湿热

灭菌处理B.可用稀释涂布平板法将餐余垃圾浸出液接种

在X培养基上C.X培养基含有淀粉和抗生素，Y培养基是不含琼脂的液体培养基D.图中降解淀粉最高效的微生物是⑤，可根据菌落特征初步判断微生物类型√跟踪训练5.(2020·江苏，31)产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题：(1)常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是_____(填编号)。编号①②③④物品培养基接种环培养皿涂布器灭菌方法高压蒸汽火焰灼烧干热臭氧④(2)称取1.0g某土壤样品，转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，经__________后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0.1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌__________________个。等比稀释4.6×105(或460000)(3)为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行______育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以______为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径______的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。诱变脂肪较大课堂小结Briefsummary微生物的数量测定选择培养基的作用微生物选择培养获取纯培养物的方法-稀释涂布平板法微生物的选择培养和计数选择培养基微生物的选择培养科学实例筛选原则选择培养基的概念及举例稀释涂布平板法的操作过程间接计数法—稀释涂布平板法直接计数—计数板计数法土壤中分解尿素的细菌的分离与计数培养基的制备实验设计（1）土壤取样（2）样品的稀释（3）稀释涂布平板法接种（4）微生物的培养与观察五分钟查落实1.选择培养基是指在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。2.稀释涂布平板法不仅是分离和纯化微生物的重要方法，也是测定微生物数量的重要方法。该方法通过统计平板上的菌落数来推测样品中的活菌数，其原理是当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。3.平板划线法可用于分离纯化菌种，获得单菌落，但不能进行微生物计数。4.一般来说，在一定的培养条件下(相同的培养基、温度及培养时间)，同种微生物表现出稳定的菌落特征。这些特征包括菌落的形状、大小和颜色等方面。5.土壤中分解尿素的细菌的分离与鉴定(1)尿素分解菌的筛选：以尿素为唯一氮源的选择培养基可以筛选能分解尿素的细菌。(2)尿素分解菌的鉴别：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，接种并培养初步筛选的菌种，若菌落周围出现红色环带，则可说明该菌种能够分解尿素。【长句表达】1.在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌的原因：_____________________________________________________________________________________________________________________________。2.为了筛选能分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择

(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素＋NH4NO3”)作为氮源，不选择其他两组的原因是_______________________________________________________________________________________________。3.尿素分解菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是__________________________________________________。由于生物与环境的相互依存关系，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对较高，从这种土样中获得目的微生物的概率高于普通环境尿素

其他两组都含有NH4NO