新冠病毒pcr考试试题及答案

新冠病毒pcr考试试题及答案一、单项选择题（每题2分，共30分）1.新冠病毒PCR检测中，逆转录步骤的主要作用是：A.将DNA转为RNAB.将RNA转为cDNAC.扩增DNA片段D.标记荧光基团答案：B2.荧光定量PCR中，Ct值的定义是：A.扩增产物达到平台期的循环数B.扩增产物荧光信号达到设定阈值的循环数C.扩增反应结束时的总循环数D.荧光信号首次检测到的循环数答案：B3.新冠病毒PCR检测实验室分区中，禁止带入扩增产物的区域是：A.试剂准备区B.样本处理区C.扩增区D.产物分析区答案：A4.采集新冠病毒检测样本时，咽拭子应擦拭的部位是：A.扁桃体及咽后壁B.舌尖C.上颚D.牙龈答案：A5.下列哪种情况会导致PCR检测出现假阴性？A.样本中病毒载量过低B.扩增产物污染C.引物与靶序列非特异性结合D.荧光探针降解答案：A6.新冠病毒PCR检测中，内参基因（如RPP30）的主要作用是：A.增加扩增效率B.监测样本采集和提取过程是否有效C.提高检测灵敏度D.区分不同病毒亚型答案：B7.用于新冠病毒RNA提取的离心管，最关键的质量要求是：A.透明B.无RNA酶C.耐高温D.可重复使用答案：B8.荧光定量PCR反应体系中，Taq酶的主要功能是：A.结合引物B.水解探针释放荧光C.催化dNTP聚合D.稳定反应体系pH答案：C9.新冠病毒PCR检测样本若需48小时后检测，应保存于：A.4℃B.20℃C.80℃D.室温答案：C10.扩增曲线出现“拖尾”现象，最可能的原因是：A.引物二聚体B.模板浓度过高C.探针浓度过低D.反应体系Mg²+浓度不足答案：A11.新冠病毒ORF1ab基因和N基因同时阳性时，结果应判为：A.阳性B.阴性C.不确定D.需重测答案：A12.实验室进行PCR检测时，空气消毒最常用的方法是：A.75%乙醇喷洒B.紫外线照射（波长254nm）C.含氯消毒剂擦拭D.臭氧熏蒸答案：B13.下列哪项不属于PCR实验室生物安全防护的基本要求？A.穿防护服B.戴N95口罩C.实验后立即处理废弃物D.在普通实验室进行样本处理答案：D14.提取新冠病毒RNA时，加入β巯基乙醇的主要目的是：A.裂解细胞B.抑制RNA酶活性C.沉淀RNAD.提高离心效率答案：B15.若某样本Ct值为38，且内参基因Ct值正常，应如何处理？A.直接判为阳性B.判为阴性C.重复检测，若仍为38则判阳性D.报告“检测结果不确定”答案：C二、多项选择题（每题3分，共30分，多选、少选、错选均不得分）1.新冠病毒PCR检测的样本类型包括：A.鼻咽拭子B.痰液C.血液D.粪便答案：ABCD2.影响PCR扩增效率的因素有：A.引物设计特异性B.dNTP浓度C.退火温度D.模板纯度答案：ABCD3.实验室质量控制应包括：A.阴性质控品检测B.阳性质控品检测C.人员培训记录D.仪器校准记录答案：ABCD4.假阳性结果可能的原因有：A.扩增产物交叉污染B.样本间交叉污染C.引物二聚体D.内参基因缺失答案：ABC5.荧光定量PCR与普通PCR的区别包括：A.可实时监测扩增过程B.需荧光标记物C.可定量检测模板D.无需电泳检测答案：ABCD6.样本采集时需注意的事项有：A.严格无菌操作B.避免样本被唾液污染C.标注样本信息（姓名、时间等）D.采集后立即放入病毒保存液答案：ABCD7.RNA提取失败的表现可能有：A.内参基因Ct值＞35B.扩增曲线无指数增长期C.样本OD260/OD280比值＜1.8D.产物电泳无条带答案：ABCD8.实验室分区管理的目的是：A.避免交叉污染B.提高检测效率C.规范操作流程D.符合生物安全要求答案：ABCD9.结果报告应包含的信息有：A.检测方法（PCR）B.检测基因（ORF1ab、N）C.Ct值D.检测机构名称及时间答案：ABCD10.生物安全柜使用时需注意：A.操作前开机运行15分钟B.物品摆放避免遮挡出风口C.操作后用75%乙醇消毒台面D.手臂频繁进出柜内答案：ABC三、判断题（每题1分，共10分，正确打“√”，错误打“×”）1.PCR技术只能检测DNA，不能检测RNA。（×）2.Ct值越小，样本中初始病毒载量越高。（√）3.样本反复冻融不会影响RNA质量。（×）4.内参基因阴性时，检测结果仍可报告为阴性。（×）5.荧光染料法（如SYBRGreen）的特异性高于探针法。（×）6.扩增区可以进行样本核酸提取操作。（×）7.RNA提取时，离心速度过低可能导致核酸丢失。（√）8.假阳性仅由扩增产物污染引起。（×）9.结果报告需经双人审核后签发。（√）10.PCR实验室需配备独立的空调系统。（√）四、简答题（每题5分，共30分）1.简述新冠病毒PCR检测的基本流程。答案：样本采集→样本运输→样本处理（灭活、核酸提取）→逆转录（RNA→cDNA）→配制PCR反应体系→扩增（荧光定量PCR仪运行）→结果分析（读取Ct值，判读阴阳性）→报告审核与签发。2.为什么PCR实验室需严格分区？常见分区有哪些？答案：分区是为避免交叉污染（如试剂区被样本或扩增产物污染）。常见分区：试剂准备区（配制反应体系）、样本处理区（核酸提取）、扩增区（PCR扩增）、产物分析区（结果判读）。3.简述Ct值的临床意义及判读标准（以新冠检测为例）。答案：Ct值是扩增产物荧光信号达到阈值的循环数，与初始病毒载量负相关。判读标准：Ct≤37（双靶标阳性）为阳性；Ct≥40为阴性；37＜Ct＜40需重复检测，若仍在此范围可判阳性（需结合临床）。4.列举3种PCR检测中常见的污染类型及预防措施。答案：（1）扩增产物污染：分区操作，使用一次性器材，设置阳性对照在最后处理；（2）样本间交叉污染：严格无菌操作，每样本更换枪头；（3）试剂污染：使用专用试剂，避免反复冻融。5.简述RNA提取的关键步骤及注意事项。答案：关键步骤：样本裂解（破坏病毒结构释放RNA）、去除蛋白（如离心或磁珠吸附）、RNA洗涤（去除杂质）、RNA洗脱（溶于无RNA酶水）。注意事项：全程无RNA酶（使用DEPC水、专用器材），避免RNA降解（冰上操作，缩短提取时间）。6.内参基因在新冠病毒PCR检测中的作用是什么？若内参基因阴性说明什么？答案：作用：监测样本采集、运输、提取过程是否有效（如样本是否被稀释、提取是否失败）。内参阴性提示样本可能采集不合格（如拭子未接触到感染部位）、提取过程失败（RNA丢失或降解），需重新采样检测。五、案例分析题（每题10分，共20分）1.某实验室检测一批样本时，发现多份样本内参基因Ct值均＞35（正常范围为2530），但新冠病毒靶基因均为阴性。分析可能原因及处理措施。答案：可能原因：（1）样本采集量不足（如拭子未充分接触咽后壁）；（2）病毒保存液失效（RNA降解）；（3）核酸提取效率低（试剂过期、操作失误）；（4）内参引物/探针失效。处理措施：（1）核查样本采集记录，确认是否规范；（2）检查病毒保存液及提取试剂有效期；（3）用阳性参考品验证提取试剂有效性；（4）更换内参引物/探针并重新检测；（5）所有内参异常样本需重新采样检测。2.某样本检测结果显示ORF1ab基因Ct=35，N基因Ct=39，内参基因Ct=28（正常）。如何判读结果？需进一步做哪些验证？答案：判读：ORF1