DB44T 1239-2013 油桐尺蛾核型多角体病毒杀虫剂生产技术规程

油桐尺蛾核型多角体病毒杀虫剂生产技术规程2013-12-06发布2014-03-06实施本标准按GB/T1.1-2009的规定编写。本标准由广东省林业厅科技与交流合作处提出。本标准由广东省林业厅归口。本标准主要起草单位：茂名市林业科学研究所。本标准主要起草人：马沛沛、柯沛强、林思诚、卜蜜源、林明辉。本标准首次发布。1本标准规定了油桐尺蛾核型多角体病毒杀虫剂的生产、质量检测、包装及贮存等技术要求。本标准适用于油桐尺蛾核型多角体病毒杀虫剂的生产。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。核型多角体病毒nucleopolyhedrovirus核型多角体病毒由多角体蛋白和病毒粒子共同组成。以油桐尺蛾活体为宿主并对其具有专一致病性，在油桐尺蛾血、脂肪等细胞的细胞核内增殖的核型多角体病毒。病毒增殖reproductionofvirus以病毒核酸为模板，在DNA多聚酶或RNA多聚酶及其他必要因素作用下，合成子代病毒的核酸和蛋白质，装配成完整病毒颗粒并释放至细胞外。一般可分为吸附、穿入、脱壳、生物合成及装配与释放5个阶段。病毒经过增殖产生大量的子代病毒，宿主细胞的生物合成则受到不同程度的抑制和破坏。病毒对宿主致死作用大小的指标之一，是病毒对宿主所具有的内在致死能力。通常用致死中浓度(LC₅0)表示。林间病毒增殖forestreproductionofvirus在油桐尺蛾虫口密度较高的林中喷洒病毒种源，感染油桐尺蛾林间种群，使病毒在林间增殖的方2为改善油桐尺蛾核型多角体病毒杀虫剂的生产过程，提高质量和产量，或赋予油桐尺蛾核型多角体病毒杀虫剂某种特有的应用性能或形态所添加的辅助化学品。3生产3.1病毒来源林间采集或室内饲养的病死虫，经分离、纯化后多角体含量达10⁹PIB/ml以上，-6℃恒温保存。3.2病毒增殖3.2.1林间增殖用作增殖病毒的林地，应满足以下条件：——桉树等被油桐尺蛾为害的纯林分，面积10hm²以上，交通方便；——树高6m～8m,树叶丰富，树下植被一般；——近3年内未使用油桐尺蛾核型多角体病毒；——平均虫口密度40头/株～100头/株，虫体发育正常，无明显的流行病迹象。接种宜在油桐尺蛾幼虫4龄～5龄，天气晴朗的傍晚进行，虫口密度较高时可适当提前。用机动喷雾器作常量喷雾，均匀喷洒，喷后第2d重喷一次。病毒多角体浓度为5×10¹⁰PIB/ml,每公顷用量75ml～90ml,即每公顷用量达3.75×10¹PIB～4.5×10¹¹PIB。第一次喷药后，从第2d开始抽查林间油桐尺蛾幼虫食叶量、虫体颜色和虫身硬度的变化。第3d~5d,幼虫活动停止，濒死或已死幼虫倒挂于树枝或树叶、树叉处，此时用摄子轻轻采收感病幼虫即可。3.2.2套笼增殖用尼龙网围成长×宽×高为200cm×150cm×80cm的围栏，四角用插杆固定，下方用土压实，上方设尼龙网。栏内架设长160cm的横杆2根(离地面高60cm),横杆上悬挂有丰富新鲜的树叶，树柄处包裹湿润的棉花球来保持树叶的新鲜度及含水量。自林间采集油桐尺蛾4龄～5龄幼虫，投入围栏内饲养，每栏投入约300头。用10⁸PIB/ml的病毒悬浮液喷洒叶片，至产生液滴为止，第二天换新鲜桉树叶按同等浓度再次进行接毒。3从第2d开始抽查油桐尺蛾感病情况，当染病虫体色变成深褐色即可采收。从林间采集油桐尺蛾卵块，待卵变深色后，在洁净工作间用1%甲醛水溶液消毒，无菌水漂洗、晾干，放入盛有人工饲料的养虫盒内。室内温度25℃~26℃,湿度60%～70%。幼虫孵化1d~3d后将用10⁶PIB/ml的病毒悬浮液喷洒于已盛有人工饲料的养虫杯内，喷洒均匀即可。放入4龄～5龄油桐尺蛾幼虫，每杯3头～5头，并内置爬虫网。将感病幼虫虫体按照重量1:2比例加入清水，放入碎肉机内研磨。经过粉碎的虫体病毒混合液加入10倍清水置于搅拌机内，以80r/min～100r/min的速度搅拌30放出虫体病毒混合液，用120目尼龙纱滤网过滤，滤液进入贮藏罐，滤渣经脱水机脱水10min,用水泵将贮藏罐中的滤液抽至漏斗型沉降塔，静置。沉降塔设透明的观察窗，当观察到塔内液体明显分层时，可放出漏斗上层清液进入离心机离心；漏斗下层浊液用240目绢纱过滤，并对滤渣进行无害化处理；滤液重回搅拌机，与后面的初滤液一起再次沉降。当天最后一次沉降产生的下层浊液，经240目绢纱过滤后，滤液直接进入离心机离心。4在离心沉淀物中加入等质量10%NaCl或等量中性甘油，匀浆机搅匀。待该批次虫体加工完毕后，将所有离心沉淀物混合，用磨浆机磨碎，逐次调低磨浆机的间隙，重复磨浆三次，最终的细度应达到油桐尺蛾核型多角体病毒加填料抽空脱水，加入填充剂和湿润剂，制成20%可湿性粉剂。每批次制剂多角体含量在5×10⁹PIB/g以上为合格。在测定每批次的油桐尺蛾核型多角体病毒含量后，按3×10⁹PIB/g～5×10⁹PIB/g,常规用量1.5×10¹⁰PIB/公顷，深色塑料或玻璃瓶，500g/瓶规格进行分装及包装，每公顷用量为60g。在包装说明上标明产品名称、厂名、厂址、批号、净重、毛重、执行标准、质检人、出厂日期、置于阴凉、干燥、通风处，保存期1年。置于-6℃以下冷库或冰柜中，保存期3年。生产人员应做好生产记录，将有关数据记入附录A的记录表。5(规范性附录)油桐尺蛾核型多角体病毒杀虫剂生产情况记录表病虫来源：接种时间：增殖方法：接种虫龄：接种浓度：采收时间：日期量(kg)沉淀时间生产班组：质检人员：检验时间：6(规范性附录)油桐尺蛾幼虫饲料配方按重量份数计，该饲料由如下组分组成：麦胚粉120份～160份、黄豆粉25份~35份、酵母粉12份~18份、