DB43∕T 1825-2020 茄果类蔬菜黄瓜花叶病毒病综合防控技术规程

ICS65.020B16DB43湖南省地方标准DB43/T18252020茄果类蔬菜黄瓜花叶病毒病综合防控技术规程RegulationsforIntegratedpreventionandcontrolTechnologyofthesolanaceousvegetablecucumberMosaicDiseases2020-08-25发布2020-11-25实施湖南省市场监督管理局发布DB43/T18252020DB43/T18252020本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由湖南省农业农村厅提出。本标准由湖南省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位:湖南省植物保护研究所、湖南省蔬菜研究所、东北农业大学、澧县农业农村局、新化县植保植检站、保靖县农业农村局、江华瑶族自治县农业农村局、永州市农业科学研究所、安乡县植保植检站、武冈市农业农村局植保植检站、泸溪县农业农村局。本标准主要起草人:刘勇、张德咏、彭静、张战泓、程晓非、张强鑫、廖基常、王俊华、赵明平、周涛、潘求一、廖用信、陈湘云、高阳、张卓、张松柏、朱春晖、谢钢、彭谦泽。DB43/T18252020茄果类蔬菜黄瓜花叶病毒病综合防控技术规程本标准规定了茄果类蔬菜黄瓜花叶病毒病的术语和定义、发生规律、病害诊断、防治方法、档案管理等技术要求。本标准适用于茄果类蔬菜由黄瓜花叶病毒(clcumberMosaicvirus,CMV)侵染引起的花叶病毒病的综合防控。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB4285农药安全使用标准NY/T1276农药安全使用规范总则3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1黄瓜花叶病毒病cucumberMosaicvirusDisease由黄瓜花叶病毒(clcumbermosaicvirus,CMV)引起的可在自然条件下,通过田间机械摩擦及蚜虫进行传播的一类严重危害植物的病毒病。3.2非持久型传毒Non-persistentTransmission介体昆虫取食病毒后,病毒不进入虫体的血淋巴和唾液腺即可被传播,病毒在虫体内的持毒时间只有几秒或几分钟,一般昆虫蜕皮后即失去传毒力。4发生规律黄瓜花叶病毒通过侵染蔬菜生产农事活动中机械损伤造成的微伤口感染植株。自然条件下,黄瓜花叶病毒通过蚜虫以非持久型传毒方式传播,有60多种蚜虫可传播该病毒。黄瓜花叶病毒病最适发病温度为20℃,病毒主要在越冬蔬菜、多年生树木及农田杂草上越冬,不能在病残体上越冬。冬季及早春气温低,越冬蚜虫数量少,CMV发病较轻。如春比较干旱,植株旺长前温度出现较大波动,有干热风,可导致CMV大流行。此外,如果阴雨天较多,环境相对湿度大,蚜虫发生少,则CMV发病较轻。5病害诊断5.1田间诊断DB43/T18252020黄瓜花叶病毒病在茄果类蔬菜的整个生育期均可发生。植株感病后,叶片呈深绿与浅绿相间的花叶状、不同程度的皱缩、畸形,严重时叶片反卷;茎部节间缩短,茎畸形,严重时病株叶片枯萎、重病株簇生小叶,植株矮化甚至萎缩枯死。症状特征详见附录A。5.2室内检测采用TRIzol法提取植株叶片总RNA,反转录合成CDNA,通过特异性PCR扩增获得目的片段,凝胶电泳及分子测序鉴定目的片段的大小及准确性。扩增片段与阳性对照样品比对一致,表明植物叶片中携带该病毒,具体方法和检测结果见附录B。6防治方法6.1防治原则坚持"预防为主,综合防治"的植保方针和"经济、有效、安全、简易、规范"的原则,从农田生态系统整体出发,保护生物多样性,合理管理生产环境,减少病毒病原来源,协调运用农业防治、物理防治、生态调控和生物防治等各种防控技术,改变病原物的最适生存条件,提高农作物抗病能力。当农业防治、物理防治、生物防治无法将病害控制在经济阈值以下时,适当使用高效、低毒、低残留和低污染的药剂控制病原物的为害,尽量减少化学农药的使用,安全、经济、有效地将病害造成的损失控制在经济允许水平以下。6.2农业防治6.2.1品种选择与种子消毒选择抗病或耐病主栽品种。茄果类蔬菜种子播种前用55℃温开水浸种15min,去除种子表明的病原菌和黏液,用10%的磷酸三钠溶液浸种0.5h左右,捞出后用清水冲洗3次后播种;或采用包衣种子。6.2.2田间卫生保持田间清洁,清理田间杂草及周边带虫杂草;及时摘除病叶,拔除病株,病叶和病株移至远离种植田的地方集中销毁6.2.3肥水管理科学进行肥水管理,控制化学肥料的使用。在作物的不同生育期喷施300倍光合细菌菌剂,增强其对病害的抵抗力。6.3物理防治6.3.1设置防虫网使用40目以上的防虫网隔离传毒介体6.3.2色板诱杀定植后在田间悬挂30cmx40CM的诱虫黄板,黄板密度为每亩20-30块,黄板底部略高于植株顶端3cm-5CM,粘满害虫或失去粘性后及时更换2DB43/T182520206.4生物防治可选用农用微生物生防菌剂或氨基寡糖素等防治茄果类蔬菜黄瓜花叶病毒病。一般零星发病田块连续喷施2次,轻病症田块连续喷施3-4次,中度以上发病田块连续喷施5-6次,每次喷施间隔5d-7d。药剂及用法见附录C。6.5化学防治6.5.1黄瓜花叶病毒病以预防为主,定期喷施高效低毒农药进行防治,严禁使用国家明令禁止使用的高毒、高残留化学农药,化学农药交替使用。通常在苗期开始喷施药剂,之后连续喷施3-4次,每次喷施间隔7-10d,进行病毒病预防与防治。农药的安全隔离期要符合GB4285的规定,常用药剂及用法见附录C。6.5.2防治传毒介体昆虫。田间蚜株率≥5时,选择使用高效、低毒、易降解农药进行防治。一般零星发病田块连续喷施2次,轻病症田块连续喷施3-4次,中度以上发病田块连续喷施5-6次,每次喷施间隔7-10d。农药的安全隔离期要符合GB4285的规定,常用药剂及用法见附录C。6.5.3根据田间定点系统调查和普查调查情况,结合气象因素分析,及时对病虫害进行预测预报,当病虫害达到影响经济阈值时,对整片作物进行科学的病虫害防治。7档案管理田间防治黄瓜花叶病毒病防治方法应如实做好记载,及时检查药剂使用情况及效果,建立防控档案。具体调查内容及评估方法参见附录D和E。3DB43/T182520204附录A(资料性附录)茄果类蔬菜黄瓜花叶病毒病症状茄果类蔬菜感染黄瓜花叶病毒后,症状表型多样,苗期幼叶呈深绿与淡绿相间的花叶状、不同程度的皱缩、畸形。成株染病新叶呈黄绿相间的花叶状,病叶扭曲畸形,叶片变厚,严重时叶片反卷;茎部节间缩短,茎畸形,严重时病株叶片枯萎、重病株簇生小叶,植株矮化甚至萎缩枯死。在田间普通花叶病与黄瓜花叶病很相似,难以区别,结合分子生物学方法鉴定。番茄植株感染黄瓜花叶病毒的典型症状见图A1,辣椒植株感染黄瓜花叶病毒的典型症状见图A2。图A1番茄植株感染黄瓜花叶病毒症状图A2辣椒植株感染黄瓜花叶病毒症状DB43/T182520205附录B(规范性附录)茄果类蔬菜黄瓜花叶病毒分子生物学鉴定(1)取约0.1g叶片于2mLRNase-free离心管,液氮速冻后研磨至样品为均匀粉末。(2)在样品解冻前,加入1MlTrizol,充分混匀,室温静置5min,加入0.2Ml三氯甲烷,涡旋震荡15S,静置1-2min,至出现明显分层,4℃12000g离心15min。(3)小心吸取离心后上清液于1.5mlRNasefree离心管,加入等体积75%乙醇,-20℃沉淀1-2h,4℃12000g离心10min,弃上清。(4)1mL75%乙醇重悬沉淀,-80℃长时间保存或4℃7500g离心5min。(5)重复操作(4),弃上清后瞬离离心管,使管壁上的液体集中于离心管底部。(6)移液枪小心吸出多余液体,风干5-10min。加入50-100μL去RNase水溶解。(7)凝胶电泳和NanoDrop检测RNA的质量和浓度,-80℃保存备用。2.RT-PCR扩增目的片段(1)使用HiscriptII1ststrandCDNASynthesiskit试剂盒逆转录,反应体系见下表:表B1逆转录反应体系试剂体积(uL)TotalRNA1.010XRTMix2.0HiscriptIIEnzymeMix2.0Reverseprimer(10UM)1.0RNasefreEH20定容至20反应程序:25℃:5min(2)引物序列50℃:45min,85℃:2Min。CDNA产物直接使用或-20℃保存;表B2引物序列病毒引物名称引物序列片段长度(bp)CMV-FCMV-RCGGTCGTATTGCTTCCTTCTTTTAACCACCTGCGGTCTGAA(3)PCR扩增,反应体系见下表:表B3PCR扩增反应体系成分体积(μ10xransstartToPbuffer2.5MMdNTPTransstartToPDNAPolymeraseForwardprimer(10UM)Reverseprimer(10UM)CDNA模板ddH20定容至50DB43/T18252020反应程序:94℃预变性10min,94℃变性30s,58℃退火30s,72℃延伸2min30S,循环30次;最后72℃延伸20min,4℃保存。2.PCR产物凝胶电泳检测1%琼脂糖凝胶电泳检测,取5uL扩增产物与2uLSYBRGreenI染料、3μLloadingbuffer混匀,点入点样孔,加入电泳缓冲液,100V,电泳30min。电泳结束后,凝胶成像系统观察并拍照记录。扩增片段与阳性样品大小一致,则说明植株被CMV侵染,结果见附录图B1。图B1植株叶片携带CMV检测M:Mark,1-7:植株样品,+:阳性对照。:阴性对照DB43/T18252020附录D(资料性附录)茄果类蔬菜黄瓜花叶病毒病田间调查表D1防治档案记录表格前茬作物病害发生情况曾使用过防治方法防治病毒病或传毒害虫当茬作物当前使用防治方法病情指数发病率(%)防治效果(%)8DB43/T18252020附录E(资料性附录)茄果类蔬菜黄瓜花叶病毒病防控效果评估E1植株病情分级标准(以株为单位)每块田,5点取样法,每个点选择20株以上的植株 0级:全株无病毒病症; 1级:心叶脉明或轻微花叶,病株无明显矮化; 3级:1/3片花叶但不变形,或病株矮化为正常株高的3/4以上; 5级:1/31/2叶片花叶,或少数叶片变形,或主脉变黑,或病株矮化为正常株高的2/3~3/4; 7级:1/2~