《食品微生物检验技术》课程作业要求

《食品微生物检验技术》课程作业要求

班级：—食生111_学号：53—姓名：樊继国分数

黄豆酱中微生物的检验

一、国家标准中鱼类罐头需检测的微生物种类及标准微生物种类菌落

总数酵母霉菌金黄色葡萄球菌国家标准

<100cfu/ml^l00cfu/ml^30cfu/ml不得检出二、黄豆酱中菌落总数的检

测1、实验原理

菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温

度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。菌落是指

细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数

以万计相同的细菌集合而成。当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，

在一定培养条件下，每一个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成

一个可见的菌落。

菌落总数测定是月来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映

食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学

评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。本方法

规定的培养条件下所得到的结果，仅包括在培养琼脂上面生长的嗜中温性

的菌落总数。

2、实验器材2.1仪器：

冰箱：2℃~5℃。

恒温培养箱：28℃±1℃O均质器。恒温振荡器。

显微镜：10某〜100某。电子天平：感量0.1g。

无菌锥形瓶:容量500niLs250niLo无菌广口瓶：500mLo

无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（A0.1mL刻度）。菌平皿：直

径90mm。无菌试管:10皿某75mm无菌牛皮纸袋、塑料袋。

2.2培养基：平板计数琼脂培养基⑴组成成份

1.0g葡萄糖

2.5g酵母浸膏

5.0g胰蛋白陈

15.0g琼脂

IOOOIIIL蒸储水

PH7.0±0.2

⑵营养琼脂培养基的配置

①取20g营养琼脂培养基放到三角瓶并且加入1000mL的蒸储水，然

后震荡摇匀。②然后用脱脂棉做成棉塞塞到三角瓶口，用牛皮纸包扎好。

③放到高压锅内以高温、十五分钟杀菌

④杀菌后，取出培养基，自然冷却到40c摆布备用

⑶琼脂培养基做法

把组成成份里面的成份加入到蒸偏水中煮沸溶解，然后调节PH,装

到试管里面和三角瓶中，在高温杀菌十五分钟摆布。

2.3磷酸盐缓冲液2.31成份

34.0g磷酸二氢钾

500.OniL蒸储水

PH7.2

贮存：取34g的磷酸二氢钾放入烧杯中，并倒入500mL蒸储水，用

lmol/L的氢氧化钠溶液调节PH,然后再用蒸谭水将其稀释到1000mL存到

冰箱。

稀释：将贮存液中取1.25mL,用蒸偏水将其稀释到1000mL,装到三

角瓶中高压灭菌锅中灭菌十五分钟。

2.4无菌生理盐水

8.5g氯化钠

1000mL蒸储水

做法：将氯化钠溶于1000mL蒸储水中，高温杀菌十五分钟。3、操作

步骤(1)样品处理

在无菌操作将取黄豆酱25mL放到225mL的灭菌生理盐水中，经充分

的震荡并研磨制成1：10的均匀稀释液。

(2)具体操作方法

用1mL灭菌吸管1：10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水试管

中，用定量移液器在试管内鼓气使其均匀，做成1：100的稀释液。

稀释液在移入平皿后，注入冷却到451c营养琼脂将平皿底覆盖，放

在桌上徐徐振摇，使培养基和检样混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入

加有1mL稀释液的灭菌平皿中做空白实验对照。待平皿中的营养琼脂凝固

后，将平板翻过来，放到35到37度的培养箱中培养两天摆布。

菌落计数的方法：在做平板计数的时候，可以用肉眼观察，必要的时

候用放大镜观察，以防止遗漏。在记下各个平板的菌落数后，求出同稀释

度的各平板平均菌落总数。

4、结果处理

2

稀释度平板菌落数1210-13平均1210-23平均1210-33平均三、酵母

的检测1.实验原理霉菌和酵母菌菌数的测定是指食品检样经过处理，在

一定条件下培养后，所得1g或者1mL检样中所含的霉菌和酵母菌菌落数。

2.实验器材2.1仪器和材料恒温培养箱冰箱天平均质器恒温振荡器无

菌吸管无菌锥形瓶无菌广口瓶无菌平皿无菌试管

2.2培养基和试剂

马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基、孟加拉红培养基3.检样程序及方法3.1

检样I

25g(mL)样品+225mL无菌水，均质I

10倍系列稀释I

选择2-3个适宜稀释度的样品匀液，各取1mL分别加入无菌培养皿内

I

每皿加入15-20ml马铃薯-葡萄糖-琼脂涪养基或者孟加拉红培养基

!培养28±1℃,5dI菌落计数I报告3.2样品稀释

3.2.1固体和半固体样品：称取25g样品至盛有225mL灭菌蒸偏水的

锥形瓶中，充分振摇，即为1:10稀释液。或者放入盛有225mL无菌蒸储

水的均质袋中，用拍击式均质器拍打2min,制成1:10的

3

样品匀液。

3.2.2液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL无菌蒸储

水的锥形瓶中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。

3.2.3取lmLl:10稀释液注入含有9mL无菌水的试管中，另换一支1mL

无菌吸管反复吹吸,此液为1:100稀释液。

3.2..4按3.2.2操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀

释一次，换用1次1mL无菌吸管。在进行10倍递增稀释的同时，每一个

稀释度分别吸取1mL样品匀液于2个无菌平皿内。同时分别取1mL样品

稀释液加入2个无菌平皿作空白对照。

工2.5及时将15曲「20mL冷却至46℃的马铃薯-葡萄糖-琼脂或者孟

加拉红培养基（可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转

动平M使其混合均匀。

3.3培养

待琼脂凝固后，将平板倒置，28℃±1℃培养5d,观察并记录。3.4

菌落计数肉眼观察，必要时可用放大镜，记录各稀释倍数和相应的霉菌和

酵母数。以菌落形成单位（CFU）表示。

选取菌落数在10CFU^150CFU的平板，根据菌落形态分别计数霉菌和

酵母数。霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为多不可计。菌落数应采用

两个平板的平均数。

4.结果报告霉菌测定结果稀释度平板霉菌菌落数123平均123平均

123平均每mL菌液中霉菌数o

酵母菌测定结果酵母菌测定结果稀释度平板酵母菌落数123平均123

平均123平均每mL菌液中酥母菌数o四、金黄色葡萄球菌的检

测1.实验原理葡萄球菌在自然界分布极广，空气、土壤、水、饲料、食

品以及人和动物的体表粘膜等处均有存在，大部份是不致病，也有一些致

病的球菌，金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一个种。可引起皮肤组织炎症，

还能产生肠毒素。如果在食品中大量生长繁殖，产生毒素，人误食了含有

毒素的食品，就会发生食物中毒，故食品中存在金黄色葡萄球菌对人的健

康是一种潜在危（wei）险，检查食品中金黄色葡萄球菌及数量具有实际

意义。

金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多数致病菌株能产生溶

血毒素，使血琼脂平板菌落周围浮现溶血环，在试管中浮现溶血反应。这

些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。

2.实验器材

4

恒温培养箱：36℃±l℃o冰箱：2℃^5℃o

恒温水浴箱：37℃、65℃。天平：感量0.1g。均质器。振荡器。

无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、IftnL（具0.1mL刻度）或者微量移

液器及吸头。无菌锥形瓶：容量100mL、500mLo无菌培养皿：直径90mmo

注射器：0.5mLo

pH计或者pH比色管或者精密pH试纸。2.1培养基和试剂10%胰酪

陈大豆肉汤7.5%氯化钠肉汤血琼脂平板

Baird-Prker琼脂平板脑心浸出液肉汤(BHI)兔血，

营养琼脂小斜面无菌生理盐水。3,检样程序及方法

25g(mL)样品十225mL7.5%氯化钠肉汤或者10%胰酪陈大豆肉汤，

均质36±1℃I18-24h

Baird-Prker平板，血平板36±1℃I18-24h

涂片染色观察溶皿BHI肉汤和营养琼脂小斜面36±1℃I18-24h血浆

凝固酶试验I报告3.1检样处理

称取25g固体样品；吸取25mL液体样品，加入225mL灭菌生理盐水,

固体样品研磨或者置均质器中制成混悬液。

3.2增菌及分离培养

吸取5mL卜.述混悬液，接种于7.5%氯化钠肉汤或者胰酪陈大豆肉汤

50mL培养基内，置36±1℃温箱培养24h,转种血平板和Baird-Parker

平板，36±1℃培养24h,挑取金黄色葡萄球菌菌落进行革兰氏染色镜检

及血浆凝固酶试验。

3.3鉴定

(1)染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，罗列是葡萄球

状，无芽胞，无荚膜，直径约为

(2)血浆凝固酶试验：吸取1：4新鲜兔血浆0.5mL,放入小试管中,

再加入培养24h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培养物0.5