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152024-01-25发布本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定术创新中心有限公司、巴彦淖尔市现代农牧事业发展中心、内蒙古自治区林业和草原监测规I苜蓿镰刀菌根腐病室内抗性鉴定技术规程本文件规定了苜蓿抗镰刀菌根腐病的接种体制备、抗病性鉴定、病情调查和抗病性评在实验室条件下培养的用于人工接种的病原菌繁殖体或营养选取内蒙古苜蓿种植区发病株上分离获得的具有中等致病力的根腐病优势菌株—锐顶镰刀菌):126mm菌饼3~5块,接种于灭菌的麦麸培养基上将种子在3%次氯酸钠溶液中浸泡2min,转至75%乙醇溶液中消毒30s,无菌水冲洗5遍,播种于装有灭菌营养土的穴盘中。置于温度24℃~26℃,空气相对湿度30%~40%的温室条件下,待苜蓿幼苗生5.3接种采用蘸根接种法进行接种(详见参考文献1)。将幼苗从穴盘中取出,根系冲洗干净后完全浸泡于接种悬浮液中,30min后将幼苗重新移植于装有灭菌营养土的营养钵(高10cm,直径10cm)中,每钵将营养钵置于24℃~26℃,光照10h~12h温室条件下生长,保持基质湿润。病情级别划分见表1(引自参考文献2)。病情级别1021根颈部出现少量黑褐色、较小斑点32根颈被黑褐病斑包围3表1苜蓿镰刀菌根腐病抗性室内鉴定病情级别的划分(续)病情级别4354656.2调查方法接种35d后,按病情级别调查并记录接种株发病情况,计算病情指数(DI)。病情指数按公式(1)计算:式中:DI——病情指数;S——各病情级别代表数值;n——各病情级别病株数;N——调查总株数;S——最高病情级别代表值。7抗病性评价7.1抗病性评价标准依据病情指数(DI)的平均值评价其抗性水平,划分标准见表2(引自参考文献3)。表2苜蓿镰刀菌根腐病抗性评定标准病情指数(DI)抗病类型免疫(Immune,I)高抗(HighResistant,HR)中抗(Mid-Resistant,MR)中感(Mid-Susceptible,MS)高感(HighSusceptible,HS)7.2有效性判别对照高感品种病情指数大于60(DI>60),该批次根腐病抗性鉴定视为有效。8鉴定结果根据本文件6和7,将不同病情级别的株数、病情指数、3个重复的平均病情指数、抗性评价等鉴定结果填入附录A。012345ⅠⅡⅢ):4oflettucediseases[M].StPau
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