微生物的培养技术及应用（第2课时 微生物的选择培养和计数）

1.2微生物的培养技术及应用

第2课时微生物的选择培养和计数

一、单选题

1.以下有关生物技术实践的叙述中，不正确的是（）

A.在酵母菌的分离和培养熨验中，划线后盖好培养皿，再将培养皿倒置培养

B.分离土壤中的纤维素分解菌，一般先进行选择培养，增大细菌浓度

C.在酿酒生产上，常I可发酵罐中加少量尿素，其目的是作为氮源，用于酵母菌

合成蛋白质和核酸

D.不能用稀释涂布平板法来测定土壤溶液中某活菌数目

2.下列有关微生物分离、纯化及计数的叙述，错误的是（）

A.常用富含纤维素的培养基富集培养纤维素分解菌

B.平板划线法通过连续划线将聚集的菌种分散并计数

C.稀释涂布平板法通过系列梯度稀释可将微生物分散

D.用血细胞计数板计数微生物时，实验结果往往比稀释涂布平板法得到的结果

偏大

3.下列关于微生物分离和培养的叙述，不无碰的是（）

A.微生物培养基中加入牛肉膏和蛋白腺可同时提供碳源和氮源

B.测定土壤样品中的活菌数目，常在固体培养基上用平板划线法接种

C.以尿素为唯一氮源的培养基可用于分离得到能分解尿素的细菌

D.经刚果红染色的以纤维素为唯一碳源的培养基可用于相关菌种鉴定

4.下列有关微生物分离、纯化及计数的叙述中，•错•误的是（）

A.常用富含纤维素的培养基富集培养纤维素分解菌

B.平板划线法通过连续划线将聚集的菌种分散并计数

C.稀释涂布平板法通过系列梯度稀释可将微生物分散

D.用血细胞计数板计数微生物时，实验结果往往偏大

5.下图中甲是稀释涂布平板法中的部分操作，乙是平板划线法的操作结果。

下列叙述中错误的是（）

A.甲中涂布前要将涂布器灼烧，冷却后才能涂布菌液

B.对于浓度较高的菌液，如甲中的稀释倍数仅为IO?,则所得的菌落不一定是由

单一的细胞或徇子繁殖而成

C.乙培养皿中所得的菌落都是目的菌落，无需进行进一步的鉴定筛选

D.乙中的连续划线的起点是上一次划线的末端

6.下列有关微生物培养或纯化的叙述，错误的是（）

A.微生物在培养前要先对培养基进行灭菌处理再接种

B.培养液中溶氧量的变化会影响醛母菌的繁殖和代谢途径

C.分离自养型微生物的方法是用纤维素作为唯一碳源的培养基进行培养

D.分离纯化微生物的常用方法是平板划线法和糅释涂布平板法

7.下列关于微生物培养和利用的叙述，错误的是（）

A.接种前要了解固体培养基是否被污染可接种蒸储水来培育检测

B.接种时连续划线的目的是将聚集的菌体逐步稀释获得单个菌落

C.以尿素为唯一氮源且含酚红的培养基可选择和鉴别尿素分解菌

D.利用刚果红培养基上是否形成透明圈可筛选纤维素分解菌

8.下列有关微生物实验的叙述，不氐砸的是（）

A.获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染

B.平板划线法可用于微生物的计数

C.分离不同的微生物要采用不同的稀释度

D.观察菌落的特征可以用来进行菌种的鉴定

9.在自然环境中常常是多种微生物混杂在一起，要对其中的某种微生物进行研究,

就必需获得其纯化培养物，以排除其他微生物的干扰。下列关于微生物纯化培养

的叙述中，不正确的（）

A.分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源

B.平板划线法和稀释涂布平板法是常用的两种方法

C.分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度

D.平板划线法可以采取连续划线的方法使微生物均匀分布

10.尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利

用。下列有关土壤中尿素分解菌的分离和培养的叙述，正确的是（）

A.培养基中加入尿素作为唯一碳源，该培养基是鉴别培养基

B.测定土壤中分解尿素的细菌数量和测定土壤中其他细菌的数量可采用相同的

稀释度

C.细菌合成的麻酶能将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高

D.利用稀释涂布平板法可以直接完成土壤中分解尿素的细菌的分离计数和纯化

鉴定

11.如图甲为纤维单胞菌（能产生纤维素酶）的获取过程。下列有关叙述错误的

是（）

A.①②③④培养基都应以纤维素为唯一碳源

B.图中所用培养基灭菌常用的方法是高压蒸汽灭菌

C.④所用的接种方法可对培养的微生.物进行计数

D.可用刚果红染料鉴定，看菌落周围是否出现透明圈

12.从某污水处理系统中分离出多种细菌，经进一步筛选获得具有高效降低污水

中有机污染物（COD为有机污染物分解时化学需氧量）能力的菌株，过程如图

所示。下列相关说法错误的是（）

菌液稀择1伊倍挑取小菌落.

资种35€

分离出35c获揖菌株.亦得高效降低

一h*：检测降低一*COD能力的

的细菌培养5天培养1人△培养2大COD能力赭株

牛肉面蛋白陈

灭幽的污水阎拗养基牛肉膏笈白陈

液体培笄基

A.牛肉膏蛋白脓培养基可用高压蒸汽灭菌法灭菌

B.为确定接种时菌液的最佳稀释倍数可先用显微镜直接计数法统计菌液中的细

菌数目

C.图中平板划线法获得的菌落具有不同的菌落特征

D.挑取单菌落后接种到液体培养基中培养，目的是扩大化培养菌株

13.用稀释涂布平板法测定微生物数量时，下列统计菌落数的方法，最合理的是

（）

A.培养至有菌落出现时进行统计并作为结果

B.培养至不再有新菌落出现时进行统计并作为结果

C.培养后每隔一段时间统计一次，取菌落数目稳定时的数值作为结果

D.培养后每隔一段时间统计一次，取连续且最接近的三个数值的平均值作为结

果

14.关于土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验的叙述，不正确的是（）

A.除活菌计数法外,显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法

B.对土壤中分解尿素的细菌计数，应直接对土壤溶液进行稀释涂布平板

C.选择菌落数在30〜300间的所有平板进行计数，以平均数为实验结果

D.应该设置对照以排除非测试因素对实验结果的干扰，提高可信度

15.如图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验中样品稀释示意图。据图

分析正确的是（）

—168个菌落

一►175个菌落

—167个菌落

A.3号试管中的菌落稀释倍数为KF倍

B.4号中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数可能是5号的10倍

C.5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7x107个

D.该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要高

16.用纸片扩散法测定其病原菌对各种抗生素敏感性的实验，是在某病原菌均匀

分布的平板上，铺设含有不同种抗生素的纸片后进行培养。图示为培养的结果,

其中抑菌圈是在纸片周围出现的透明区域。下列分析正确的是（）

-抑菌圈

含抗生素知压片

A.在图示固体培养基上可用平板划线法或涂布法接种病原菌

B.未出现抑菌圈可能是病原菌与抗生素接触后发生抗性变异

C.形成的抑菌圈较小的原因可能是微生物对药物较敏感

D.不同抗生素在平板上的扩散速度不同会对实验结果造成影响

17.下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是（）

A.用蒸储水配制牛肉膏蛋白腺培养基，经高温、高压灭菌后倒平板

B.取10,10八105倍的土壤稀释液和无菌水各01mL,分别涂布于各组平板上

C.将实验组和对照组平板倒置，37c恒温培养24〜48小时

D.确定对照组无菌后，选择菌落数在30〜300的实验组平板进行计数

18.下列属于涂布分离法和划线分离法共同点的是（）

A,接种工具需保存在70%酒精中

B.接种前需对菌液进行不同浓度稀释

C.可用于单菌落的分离

D.可以对样液中的细菌进行计数

二、识图作答题

19.下列是与细菌培养有关的问题，请回答：

（1）细菌培养前需要制备培养基。某培养基的配方有：NaNCh、KH2Po4、Na2HPO4>

MgSO4-7H2O.H2O,若此培养基用于培养分解尿素的细菌，则应除去上述_______

成分，并加入，以补充源。

（2）对培养基进行灭菌，通常采用的方法是_________________法。

（3）下图是利用法进行菌种接种，把聚集的菌种逐步分散到培

养基的表面。

（4）若要测定某培养液中选定菌种的菌体数，既可在显微镜下用

直接计数，也可选用法统计活菌数目，一般前者得到的结果

（填或“<”）后者。

20.酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母

可以利用工'业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可.减少污染又可降低生产成本。

研究人员拟从土壤样品中分离该类醉母，并进行大量培养。下图所示为操作流程,

请回答下列问题：

①称届七样②梯度挎驿③平板浇注分离④划线纯化⑤炉大培养

（1）配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调

节培养基的,及时对培养基进行分装，并进行温度为℃

的灭菌。

（2）取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，在步骤③中将

温度约（在25℃、50℃或80℃中选择）的培养基倒入培养皿混匀,

冷凝后倒置培养。

（3）挑取分离平板中长出的单菌落，按步骤④所示进行划线。下列叙述合理的

有。

a.为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌

b.划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落

c.挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醵的含量

d.可以通过逐步提高涪养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株

（4）步骤⑤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和

供应。为监测酵母的活细胞密度，可用稀释涂布平板法计数，菌落数

与实际细胞数有误差，原因是

参考答案

一、单选题

1.D

【解析】

A.在大肠杆菌的分离和培养实验中，划线后盖好培养皿，再将培养皿倒置培养,

A正确；

B.分离某种细菌，一般先用选择培养基进行选择培养，增大细菌浓度，B正确;

C.在酿酒生产上，常向发酵罐中加少量尿素，其目的是作为氮源，用于酵母菌合

成蛋白质和核酸，C正确；

D.可用稀释涂布平板法来测定土壤溶液中某活菌数目，D错误。

2.B

【解析】

纤维素是纤维素分解菌的碳源，因此常用富含纤维素的培养基富集培养纤维素分

解菌；平板划线法通过连续划线将聚集的菌种分散，但不能用于微生物的计数;

稀释涂布平板法通过系列梯度稀释可将微生物分散并计数；用血细胞计数板计数

微生物时，会将死的微生物计数在内，因此导致实验结果往往偏大。

3.B

【解析】

A.牛肉膏能提供碳源、氮源、磷酸盐、维生素，蛋白陈提供的是碳源、氮源、生

长因子，所以微生物培养基中加入牛肉膏和蛋白陈可以同时提供碳源和氮源，A

正确；

B.测定土壤样品中的细菌数目，常用稀释涂布平板法，而不用平板划线法，平

板划线法常用于微生物的分离、提纯，B错误；

C.以尿素作为唯一氮源的培养基可以分离得到能分解尿素的细菌，C正确；

D.经刚果红染色的以纤维素为唯一碳源的培养基可用于鉴定纤维素分解菌，D正

确。

4.B

【解析】

A.纤维素是纤维素分解菌的碳源，因此常用富含纤维素的培养基富集培养纤维素

分解菌，A正确；

B.平板划线法通过连续划线将聚集的菌种分散，但不能用于微生物的计数，B错

误；

C.稀释涂布平板法通过系列梯度稀释可将微生物分散并计数，C正确；

D.用血细胞计数板计数微生物时，会将死的微生物计数在内，导致实验结果往往

偏大，D正确。

5.C

【解析】

A.甲中涂布前要将涂布器灼烧，冷却后才能进行涂布操作，否则会杀死菌种，A

正确；

B.对于浓度较高的菌液，如甲中的稀释倍数仅为则由于稀释倍数不够，所

得菌落也有可能是多个菌连在一起，会导致所得的菌落不一定是由单一的细胞或

抱子繁殖而成，B正确；

C.乙中所得菌落不一定都是目的菌落，需要进行进一步的鉴定筛选，C错误；

D.在划线时，每次划线应该从上一次划线的末端开始，D正确。

6.C

【解析】

A.微生物在培养前要先对培养基进行灭菌处理再接种，防止其他微生物混入，A

正确；

B.酵母菌是兼性厌氧的，因此培养液中溶氧量的变化会影响酵母菌的繁殖和代谢

途径，B正确；

C.用纤维素作为唯一碳源的培养基是用来分离纤维素分解菌的，分离自养型微生

物要用不加有机碳源的培养基，C错误；

D.分离纯化微生物的常用方法是平板划线法和稀释涂布平板法，D正确。

7.A

【解析】

A.检测培养基被污染的方法是：将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时

间，观察培养基上是否有菌落产生，A错误；

B.接种换上的菌液经过连续划线，菌液中的菌体越来越少，最后容易形成单菌落,

B正确；

C.鉴定尿素分解菌培养基不是无氮，有唯一氮源尿素，尿素分解菌分解尿素形成

了氨气，氨气会使培养基的碱性增强，用酚红试剂即可鉴定出，c正确；

D.当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红-纤维素的复合物就无法形成，培养基中

会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，可通过是否产生透明圈来筛选纤维素分

解菌，D正确。

8.B

【解析】

A.微生物培养获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染，A正确；

B.稀释涂布平板法可用于微生物的计数，B错误；

C分离微生物时涂布接种需要对培养液进行梯度稀释，分离不同的微生物要采用

不同的稀释度，C正碓；

D.不同的微生物具有不同的菌落特征，观察菌落的特征可以用来进行菌种的鉴定,

D正确。

9.D

10.C

【解析】

A、培养基中加入尿素作为唯一碳源，该培养基是选择培养基，A错误；

B、因为土壤中各类微生物的数量不同，故为获得不同类型的微生物，要按不同

的稀释倍数进行分离，B错误；

C、细菌合成的服酶能将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，可

加入酚红指示剂进行检测，C正确；

D、鉴定分解尿素的细菌应该用加酚红的鉴别培养基，D错误。

11.C

【解析】

A.要筛选纤维素酶高产菌株，平板内的固体培养基和锥形瓶中的液体培养基应以

纤维素作为唯一碳源，A正确；

B.对培养基的灭菌利用的是高压蒸汽灭菌法，对接种环采用火焰灼烧法进行灭菌,

B正确；

C.图④采用的接种方法是平板划线法，而对培养的微生物进行计数采用稀释涂布

平板法，C错误；

D.刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合

物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透明

圈来筛选纤维素分解菌，D正确。

12.C

【解析】

A.牛肉膏蛋白陈培养基一般用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，A正确；

B.用显微镜直接计数法统计菌液中的细菌数目，可以帮助估算接种时的稀释倍数,

B正确；

C.根据平板中菌落分布情况可以判断接种采用的是稀释涂布平板法，C错误；

D.挑取单菌落后接种到液体培养基中，培养目的是扩大化培养菌株，D正确。

13.C

14.C

【解析】

A.除活菌计数法外，显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法，A正确；

B.对土壤中分解尿素的细菌计数，应直接对土壤溶液进行稀释涂布平板，B正确；

C.由于稀释倍数不同，计算时不能简单相加，应乘上相应稀释倍数再取平均值，

C错误；

D.应该设置对照以排除非测试因素对实验结果的干扰，提高可信度，D正确。

15.B

【解析】

A.3号试管是稀释104倍，A错误；

B.4号中稀释液进行平板培养，稀释倍数比5号的低10倍，如果稀释倍数适当，

得到的菌落平均数可能是5号的10倍，B正确；

C.5号试管进行稀释涂布平板法计数的结果表明每克土壤中的菌株数为

(168+175+167)+3xl06xio+l0R.7x108个，c错误；

D.稀释涂布平板得到的菌落可能存在两个或多个细菌细胞长成一个菌落，使该实

验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要低，D错误。

16.D

【解析】

A.据图中菌落的分布状况，在图示固体培养基上采用的是涂布.法接种病原菌，A

错误；

B.不是因为病原菌与抗生素接触后发生抗性变异，变异是不定向的，在未与抗生

素接触之前，病原菌种群中就己经存在有抗性变异个体，B错误；

C.形成的抑菌圈较小的原因可能是微生物对药物较不敏感，C错误；

D.不同抗生素在平板上的扩散速度不同会对实验结果造成影响，D正确。

17.B

【解析】

A.首先要进行培养基的制备、用蒸储水配制牛肉膏蛋白陈培养基，经高温、高压

灭菌后倒平板，A正确；

B.培养细菌时，应取©、IO，、106倍的土壤稀释液和无菌水各分别涂

布于各组平板上，B错误；

C.将实验组和对照组平板倒置，37c恒温培养24〜48小时，C正确；

D.确定对照组无菌后，选择菌落数在3（）〜30（）的进行计数，求平均值，再通过计

算得出土壤中细菌总数，D正确。

18.C

【解析】

A.接种环灭菌一般用灼烧法，A错误；

B.涂布分离法接种前需配制不同浓度稀释液，划线分离法不需要，B错误；

C.涂布分离法和划线分离法都可用于单菌落的分离，C正确；

D.划线分离法不能用于计数活菌，只能用于分离菌种，涂布分离法可以用来计数

活菌，D错误。