公共场所卫生检验方法 第3部分：空气微生物指标-编制说明

公共场所卫生检验方法

第3部分：空气微生物指标

编制说明

一、工作简况，包括任务来源、协作单位、主要工作过程、国家标准主要起草人及其所做的

工作等

（一）任务来源

2021年11月1日，中国疾病预防控制中心根据《国家卫生健康委法规司关于下达卫生

健康标准体系升级改造项目计划的通知》和《中国疾病预防控制中心关于落实卫生健康标准

体系升级改造相关工作的通知》要求，下达了公共卫生标准体系升级改造项目中17项环境

健康标准修订项目计划，其中包括本标准。

GB/T18204.3《公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生物指标》是公共场所卫生

检验方法标准的一个组成部分，本文件为第二次修订

（二）起草单位和起草人

本标准由中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所负责，参加起草单位江苏省

疾病预防控制中心、深圳市疾病预防控制中心、常州市卫生监督所(见表1)。

表1GB/T18204.3主要起草单位和起草人

姓名工作单位

姚孝元中国疾病预防控制中心环境所

唐宋中国疾病预防控制中心环境所

李霞中国疾病预防控制中心环境所

丁珵中国疾病预防控制中心环境所

丁震江苏省疾病预防控制中心

周连江苏省疾病预防控制中心

余淑苑深圳市疾病预防控制中心

丁培中国疾病预防控制中心环境所

毛怡心中国疾病预防控制中心环境所

石晓路深圳市疾病预防控制中心

谈立峰常州市卫生监督所

马恺江苏省疾病预防控制中心

（三）主要工作过程

2021年11月1日，中国疾病预防控制中心下发关于2021年度国家卫生健康标准环境

健康专业修订项目的通知，确定公共卫生标准体系升级改造项目中17项环境健康标准修订

项目，本文件涵盖其中。

11月10日，环境健康标准专业委员会召开2021年度国家卫生健康标准修订启动会。

唐宋主任汇报了本项标准的修订计划及相关事宜。

11月19日，标准起草组组织召开本标准修订起草组第一次会议，确定修订原则，讨论

原标准主要问题、修订内容、任务分工、工作进度等问题。

2021年11月，在全国范围内组织开展GB/T18204.3—2013《公共场所卫生检验方法第

3部分：空气微生物指标》使用情况调查工作，开展追踪评价；同时通过资料查询，了解国

内外空气中细菌总数、真菌总数、β-溶血性链球菌、嗜肺军团菌指标的标准检验方法，综合

考虑我国经济技术可行性、标准的先进性及与国际标准的可比性，起草组成员各自确定方法

研制的技术路线。

2021年12月上旬，召开GB/T18204.3《公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生

物指标》修订工作专家研讨会，研讨修订的主要工作方向。

2021年12月下旬，进行方法验证。在全国范围内组织3个单位进行方法验证，形成征

求意见稿。

2022年1月，标准起草组召开第二次讨论会议，起草组成员对各自负责修订的标准内

容进行了介绍并与参会专家讨论，形成第二稿标准文本及编制说明

2022年2月，征求意见稿在全国范围内广泛征求了标准主管部门、各级卫生行政部门、

各级疾控机构、科研院所、卫生监督执法机构、检验机构、行业协会等23家相关单位的意

见。收到反馈意见共计148条，采纳了105条合理科学的意见，对10条意见部分采纳，对

33条涉及法律法规、标准内容理解有偏差的意见未采纳。标准起草组按照反馈意见汇总处

理表对GB/T18204.3《公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生物指标》征求意见稿进

行修改和进一步完善，形成送审稿，并起草编制说明。

2022年3月，标准起草组组织召开预评审会议对送审稿、编制说明等相关资料进行预

审核，共提出17条意见，采纳15条，部分采纳1条，不采纳1条理解偏差的意见；标准起

草组根据预评审专家意见修改相关资料，形成《公共场所卫生检验方法第3部分：空气微

生物指标》（报批稿）、编制说明（报批稿）及相关资料，通过中国疾病预防控制中心协同

办公系统将相关资料上报环境健康标准专业委员会秘书处。环境健康标准专业委员会秘书处

于2022年7月8日组织召开会审会议，对《公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生物

指标》进行评审，专家一致同意《公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生物指标》通

过评审。

（四）国家标准主要起草人及其所做的工作（见表2）

表2主要起草人及其承担的工作

主要起草人（单位）承担的工作

项目负责人，负责项目立项、整体构思、编制思路

姚孝元、唐宋（中国疾病预防控制中心环境所）及整体定位、项目技术把控、项目的整体组织和推

进等。

用SET2020软件对GB/T18204.3文档进行编辑；

按GB/T1.1—2020要求对GB/T18204.3进行修改

李霞、丁培（中国疾病预防控制中心环境所）与撰写；按专家提出的意见修改标准文本；汇总和

撰写编制说明，汇总征求意见，撰写标准解读、上

报函等技术资料

负责GB/T18204.3中第4章“细菌总数”的实验方

李霞、毛怡心（中国疾病预防控制中心环境所）法评价以及方法文本、编制说明的撰写并征集意见

等工作

负责GB/T18204.3中第5章“真菌总数”的实验方

丁珵、丁培（中国疾病预防控制中心环境所）法评价以及方法文本、编制说明的撰写并征集意见

等工作

负责GB/T18204.3中第6章“β-溶血性链球菌”的实

余淑苑、石晓路（深圳市疾病预防控制中心）验方法评价、补充、方法验证以及方法文本、编制

说明的撰写等工作

丁震、周连、马恺（江苏省疾病预防控制中心）；负责GB/T18204.3中第7章“嗜肺军团菌”的实验方

谈立峰（常州市卫生监督所）法评价以及方法文本、编制说明的撰写等工作

二、国家标准编制原则和确定国家标准主要内容（如技术指标、参数、公式、性能要求、试

验方法、检验规则等）的论据（包括试验、统计数据），修订国家标准时，应增列新旧国家

标准水平的对比

（一）国家标准编制原则

1.贯彻国家的有关方针、政策、法律、法规

2.积极采用国际标准和国外先进标准

3.坚持技术先进性原则

推动公共场所检验检测技术发展，增加了一些公共场所卫生检测必需的先进技术方法

（如嗜肺军团菌检测新增荧光PCR法）。

4.系统性原则

公共场所卫生检验检测技术方法应便于公共场所卫生监督和检验人员使用，并以物理性

指标、化学性指标、空气微生物指标、公共用品用具微生物指标、集中空调、卫生监测构成

检验方法体系。

5.配套性原则

检验方法应与卫生要求指标配套，增加了空气中β-溶血性链球菌的生化鉴定试验步骤，

并将先进与传统方法、实验室与现场方法相结合，适应不同卫生监督和卫生检验部门的需求。

6.实用性原则

同一指标保留多种检验方法，如空气中细菌总数、真菌总数检测有撞击法和自然沉降法。

（二）标准体系

本次修订的公共场所卫生标准系列仍然包括《公共场所卫生指标及限值要求》、《公共

场所设计卫生规范》、《公共场所卫生管理规范》、《公共场所卫生学评价规范》和《公共

场所卫生检验方法》五个系列。

其中GB/T18204《公共场所卫生检验方法》分为如下6个部分：

第1部分：物理性指标；

第2部分：化学性指标；

第3部分：空气微生物指标；

第4部分：公共用品用具微生物指标；

第5部分：集中空调通风系统；

第6部分：卫生监测技术规范。

本文件为GB/T18204《公共场所卫生检验方法》的第3部分。

（三）确定国家标准主要内容的论据

本文件依据现行的GB/T18204.3《公共场所卫生检验方法第3部分：室内空气微生物》

标准检验方法进行修订，以2014年以来国内外发布的相关空气指标标准检验方法、发表的

文献资料空气微生物指标检验领域的新技术、新方法为基础，确定技术路线，从样品采集和

保存要求、试剂配制和使用要求、实验条件的选择、仪器参数的优化、实际样品测定以及干

扰去除等方面开展实验研究，建立检验方法。同时在全国范围内选择3个单位开展方法验

证，进一步确认方法的有效性和适用性。

本次修订了原有四项指标的标准检验方法，补充了β-溶血性链球菌的生化鉴定试验部

分，补充了嗜肺军团菌的定量检测方法和荧光PCR快速筛查方法，现将修改技术内容的依

据分述如下：

1.范围

本文件适用于公共场所空气中细菌总数、真菌总数、β-溶血性链球菌和嗜肺军团菌的测

定，适用范围与现行GB/T18204.3—2013《公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生物

指标》保持一致（以下简称GB/T18204.3—2013），其它场所可参照执行。补充了第一法为

仲裁法。

2.规范性引用文件

本标准依据GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规

则》给出的规则补充了规范性引用文件，所列规范性引用文件构成本标准必不可少的条款，

规范性引用文件主要为微生物指标检测所需培养基、试剂和实验室用水质量要求的我国现行

国标，以及实验室生物安全的国标要求，具体引用文件为：

GB4789.28食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

3.术语和定义

本文件依据《伯杰细菌手册》中定义将β-溶血性链球菌的英文表述修改为β-hemolytic

Streptococcus，根据GB4789.11—2014《食品安全国家标准食品微生物学检验β型溶血性链

球菌检验》修改其定义；根据《人间传染的病原微生物名录》修改嗜肺军团菌的英文表述为

Legionellapneumophila。

GB/T18204.3—2013“撞击法”定义有误，因空气中微生物可以采集到的介质不仅限于

营养琼脂平板，也可以是滤膜、液体等，所以将“撞击法”定义修改为：“采用撞击式空气

微生物采样器，使空气通过惯性撞击，从而将悬浮在空气中的微生物采集到采样介质上的采

样方法”。

GB/T18204.3—2013“自然沉降法”定义有误，因空气中微生物通过重力作用，不仅仅

沉降营养琼脂平板上，还有沙氏培养基平板，所以将“自然沉降法”定义修改为：“将培养

基平板暴露在空气中，微生物依靠重力作用自然沉降到平板上的采样方法”。

4.细菌总数

细菌总数检测的采样方法为撞击法和自然沉降法。撞击法是采用撞击式空气微生物样

器，通过抽气动力作用，使空气通过狭缝或小孔产生高速气流，使悬浮在空气中的带菌粒

子撞击到营养琼脂平板上，经37℃，48h培养后，计算出每立方米空气中所含的细菌菌落

数。依室内空气微生物污染程度确定采样体积。固体撞击法普遍适用于各级微生物实验

室，通过抽样泵主动抽入空气，可获得准确空气采样量评估室内菌落总数浓度，该方法现

为使用范围最广的方法，GB15982—2012《医院消毒卫生标准》、GB/T18883—2002《室

内空气质量标准》、GB/T34012—2017《通风系统用空气净化装置》、GB/T38517—2020

《颗粒生物气溶胶采样和分析通则》、T/CECS873—2021《室内空气微生物污染控制技

术规程》等均采用此方法来检测空气中细菌总数。

自然沉降法是将营养琼脂平板暴露在自然环境下，通过室内空气自然流动，采集沉降

在平板上的微生物颗粒，经37℃，48h培养后，计算出每皿所含的细菌菌落数。该方法适

用于室内空气微生物较少、室内环境较洁净的场所，GB50333—2013《医院洁净手术部建

筑技术规范》、GB15982—2012《医院消毒卫生标准》等均采用此方法来检测空气中细菌

总数。

本次修订无新增方法，仍沿用原标准中撞击法和自然沉降法，但补充了撞击法中计算

公式和结果的报告方式、采样环境条件要求和质量控制内容。

（1）撞击法结果计算公式

室内空气中细菌总数浓度按下式计算。

6

1000

Ni

C=i1

vt

式中：

C——细菌总数，单位为菌落形成单位每立方米（CFU/m3）；

Ni——每级平板菌落数，单位为菌落形成单位（CFU）；

v——采样流量，单位为升每分钟（L/min）；

t——采样时间，单位为分钟（min）；

i——平板数量。

（2）计算结果的科学表达

撞击法和自然沉降法计算得出的细菌总数的值均应四舍五入到整数。

（3）采样环境条件

在相对封闭的公共场所（如宾馆、旅店、招待所等）采样时，应关闭门窗、空气净化

设备及新风系统，若采样前空调处于使用状态，则采样时应仍保持空调正常运转。在相对

敞开的公共场所（如商场、候车室等）采样时，应保持当时的环境状态。所以修改采样条

件为：采样时关闭门窗15min～30min，在难以关闭门窗的公共场所（如商场、候车室

等）采样时，应保持当时的环境状态。记录室内空调等设备运行状况、门窗状况、人员数

量、温湿度及天气状况等。

（4）质量控制

每批培养基平板配置后需做无菌检查，可每批选定3块平板培养观察，结果应无菌落

生长。

采样器需定期在负载条件下用检定合格的流量计进行校准，相对偏差不得超过5％；

在采样前应对采样系统的气密性进行检查，不得漏气；采样前需用酒精棉擦拭采样头，待

酒精挥发后采样。

在采样开始前，确保所用试剂和材料为无菌状态，操作过程和样品运输中应无菌操

作，避免人为污染。

为避免运输和保存过程中的污染，需同时进行现场空白对照试验，每次或每个区域取

一个对照平板，与采样平板同法操作但不需暴露采样，然后与采样后的平板一起放入培养

箱培养，结果应无菌落生长。如空白对照有菌生长，则本批次样品作废，需重新采样检

测。

补充实验人员个体防护和检测废弃物的处理应依据GB19489进行

5.真菌总数

室内空气中真菌的检测是一种应用广泛且技术成熟的方法，卫生部2006年颁布实施的

WS394—2012《公共场所集中空调通风系统卫生规范》中就包括真菌总数的检测方法，在全

国疾病预防控制机构中已推广应用近5年，本次公共场所卫生检验方法修订等同采标并更

新为现行有效版本。

（1）采样方法选择

增加检验方法的选择原则。室内空气中微生物有多个方法的，可根据实验室的实际情况

选择合适的检验方法，第一法为仲裁法。

空气微生物采样方法有主动采样的惯性撞击类【射流撞击式采样器（固体撞击式采样器

和液体撞击式采样器）、离心撞击式采样器】、过滤阻留类、静电沉着类、温差迫降类、生

物类；被动式采样的自然沉降法。其优缺点见表3。

自然沉降法——利用空气微生物粒子的重力作用，在一定的时间内，让所处区域的空气

中微生物颗粒逐步沉降到带有培养介质的平皿内的一种采样方法。本法虽然古老，但由于其

所需设备简单，方法易行，能对空气污染情况作初步了解，因此在相当长的时期内是空气微

生物指标检测的一种最常用的方法，该方法多用于因现场条件所限的某些特定场所，在我国

广大基层医疗卫生部门仍被广泛利用。

固体撞击式采样器——是当今微生物采样器中应用最广泛、品种最多的一类采样器。它

是利用各种抽气装置，以每分钟恒定气流量，使空气通过狭小喷嘴，以便空气和悬浮于其中

的微生物粒子形成高速气流，在离开喷嘴时气流射向采集面，气体沿采集面拐弯而去，而颗

粒则按惯性继续直线前进，撞击并粘附于采集面上，从而被捕获。目前用于该方法的固体撞

击式采样器在国内外已有很多成熟的相关产品，并被广泛使用。撞击法由于受环境因素影响

小，准确可靠，且其计数结果的变异系数较小，平行样相对离散程度较低，重复试验的结果

较稳定，故被作为一种国际通用的空气采样法被广泛使用。GB18204.3—2013采用的六级

筛孔式采样器采样，该检验方法是采集空气中可培养微生物的经典方法。撞击器由六层有微

小孔眼的铝合金圆盘组成，圆盘下放采样平板，每圆盘间有密封胶圈，在通过三个弹簧挂钩

把圆盘牢固地联在一起。每个圆盘上有400个成环行排列、逐层减小、尺寸精确的小孔，标

准采样流量为1m3（28.3L/min）。当含有微生物粒子的气流进入最上层的采样口后，由于

气流的逐层增高，不同大小的微生物粒子按空气动力学特征分别撞击在相应的培养基表面

上。捕获在各级上的粒子大小范围是由该级孔眼的气流速度和上一级的粒子截阻率而决定

的。捕获率≥98%。

液体撞击式采样器——同固体撞击式采样器一样，是利用喷射气流的方式将空气中的微

生物粒子收集在小体积的液体中。

离心撞击式采样器——是利用气体在旋转径路中运动时所产生的离心力，使粒子获得一

定动量，并因其惯性而偏离气体流线，撞击沉着在附近的采集面上。

过滤阻留类——过滤采样即是利用抽气装置，使空气通过滤材而使微生物粒子阻留在滤

材上，供进一步分析。

静电沉着类——利用高压静电场，使空气中的微生物粒子带上一定量的电荷后，被带相

反电荷的采集面所吸着，而将空气中微生物采集下来。其基本结构包括高压电源、放电电极、

采集电极（即采集面）和抽气装置医学。

温差迫降类——基于粒子的热泳原理，使空气中的微生物粒子沉着于采集面上。粒子从

温度高的区带向温度低的区带运动叫热泳。采样器结构包括加热面、冷却面和狭窄的空气通

道。

生物类——用敏感的动物和植物来进行空气微生物的检测。

表3各种采样法优缺点比较

采样法优点缺点

自然沉降法设备简单，方法易行，能对空气污染(1)由于地心吸引弱，小粒子很难在短时

情况作初步了解间内采集到，特别是对呼吸道感染有重要

意义的微粒，在空气中沉降速度慢、悬浮

时间长，沉降法对其捕获率低。(2)容易受

外界气流影响。(3)奥姆斯基公式未考虑沉

降量与颗粒的大小的关系，因此菌落计数

不能用体积单位表示，数据是半定量的

固体撞击式采样(1)采样粒径谱的范围广。(2)采样效率污染严重时采样时间过长，可发生菌落重

高，对呼吸道最易沉着的粒子大小逃叠生长。存在壁损失造成的粒子从采集面

失少。(3)微生物存活率高。(4)敏感性滑脱和粒子被打碎等所致的采样结果误

高。(5)操作简便。（6）受环境因素影差。采样时菌落有时会相互融合和产生静

响小，计数结果的变异系数较小，平电，影响捕获效率

行样的相对离散程度较低，重复试验

的结果较稳定

液体撞击式采样(1)适于高浓度的空气微生物采样。(2)(1)不适宜低温或长时间采样。(2)采样空

能将采集的样品分别分析。(3)采样时气流量小，微生物浓度低时，难于检测。

因气流冲击和采样液搅动，可将粒子(3)采样液易污染。(4)由于是玻璃制品携带

中的微生物释放并均匀分布于采样不便，不适宜现场多次采样

液，从而能测出空气中活微生物数量。

(4)采样液有保护作用，对脆弱的微生

物(如病毒、立克次氏体)也能采样。(5)

使用方便、价格低廉、易消毒、可反

复使用。

离心撞击式采样结构简单、体积小、重量轻、噪音小、无法判断采气量和有效采气量，有效采气

使用方便灵活，对空气微生物粒子捕量不恒定，对于呼吸道感染有重要意义的

获率较高，除能采到空气中的细菌，5pm以下的微生物粒子采样效率低，由于

还可采集到真菌、病毒及霉菌毒素问一部分细菌粒子会损耗于抽气叶轮的叶片

题上，而导致结果误差，采样片及外套难以

灭菌

过滤式采样器法在低温条件下采样，对微生物粒子的易使耐干燥能力低的微生物被气流吹干致

捕获率要高。死，且滤膜孔径易堵塞，难以保持稳定的

采气量。后续的洗脱过程会影响微生物的

活性，且滤膜容易堵塞，难以保持稳定的

采气量

静电沉着类采集空气标本容量大，浓缩空气倍数在电晕放电过程中会产生紫外线、臭氧和

高，对小粒子的捕获率高，实用性强氧化氮，这对微生物的存活不利；其次，

(适于空气中微生物浓度很低条件下空气的相对湿度≥85％时易漏电，采样效

的采样，尤其是空气中致病微生物的率低；另外设备大、结构复杂，使用维护

采集)和消毒均不便

温差迫降类采样器采集的样品可直接培养,采气量小,采样时间只能维持5min；采集

对低浓度气溶胶快速、简单、粒子损面需要冷水冷却，使用不便利，难以在现

伤小场中应用

生物类采样器具有一般空气微生物采样器所具有的由于动物的呼吸量较小，需要暴露的时间

功能外,还能为进入呼吸道的微生物长，所用动物量较多，携带管理不便，所

粒子提供生长繁殖场所,以实际无法推广应用。

（2）实验室检测方法选择

针对培养法，目前还没有一种统一的标准方法用于室内环境中真菌的检测和计数，经过

滤膜法或撞击法采集空气样本后进行人工计数是常见流程。培养和计数法受到多种因素的影

响，在定量分析中有一定的局限性。而非培养方法不受微生物生存活力的影响，通常通过滤

膜法或液体撞击法对空气样本进行采集。常用方法还包括使用玻璃载玻片狭缝嵌塞法和乳酚

蓝染色法对真菌孢子总浓度进行显微测定，但很难实现对样本中的微生物进行分类。应用电

子显微镜或扫描电子显微镜可以较好进行观察。此外，也可对微生物成分或代谢物（如真菌

毒素、内毒素等）进行测量以估计其暴露情况。随着分子生物学技术的发展，应用基于聚合

酶链反应的PCR方法、免疫分析法以及测序法等也为真菌的检测和鉴定开辟了新的途径。

PCR法和测序法能够不受微生物是否可培养的特性影响，对空气样本中的所有真菌进行检

测。还有针对真菌生物量评估的标志物进行检测的方法，如用气相色谱-质谱法测定麦角固

醇、特异酶免疫法测定真菌胞外多糖等，各种方法优缺点见表4。

表4各种实验室检验方法优缺点比较

实验室检测方法优点缺点

显微镜直接观察可以直接进行观察很难实现对样本中的微生物进行

分类

培养方法可确定活性时间长，受多种因素的影响，在

定量分析中有一定的局限性

生化检测检测抗原、麦角固醇、β-（1,3）-无法确定微生物活性

D-葡聚糖等

分子遗传学方法如PCR法和测序不受微生物是否可培养的特性影无法确定微生物活性

法响，对空气样本中的所有真菌进

行检测。

综上所述，本次修订等效采用GB/T18204.3，即撞击法测定空气中真菌总数的方法是使

用六级筛孔撞击式微生物采样器和沙氏琼脂培养基平皿，采样流量为28.3L/min，依室内空

气微生物污染程度确定采样时间为5min～15min；然后将采集真菌后的沙氏琼脂培养基平

皿置28℃培养观察并报告结果。

自然沉降法测定空气中真菌总数的方法是使用沙氏琼脂培养基平皿，在采样点位置暴露

5min；然后将采集真菌后的沙氏琼脂培养基平皿置28℃培养观察并报告结果。

（3）沙氏琼脂培养基

补充可采用符合GB4789.28要求的成品培养基；

补充沙氏琼脂平板制备方法。

（4）仪器设备

补充所需主要仪器设备的技术参数，自然沉降法补充采样支架。

（5）试验步骤

a)采样点

等同采用GB18204.3—2013表达形式，在规范性附录A中做出相应规定。

b)采样环境要求

同细菌总数。

c)采样方法

GB18204.3—2013颁布实施以来，在全国公共场所监测项目中应用，收集2018年至今

的监测数据，在公共场所空气真菌总数监测中，使用六级筛孔撞击式微生物采样器，以28.3

L/min流量采集5min～10min，所得真菌总数在每级平皿上菌落数在可计数范围之内，采

样流量和采样时间切实可行，所以本次修订等同采用GB18204.3—2013的方法，即以无菌

操作，将沙氏琼脂平板逐级装入六级筛孔撞击式微生物采样器，以28.3L/min流量采集5

min～10min，采样器使用按照说明书要求进行。

d)样品运输和保存

补充样品运输和保存要求，即采集后的沙氏琼脂平板需储存于4℃，并于4h内返回实

验室进行培养。

e)实验室分析

GB/T18204.3—2013未明确采样后平板培养时正置还是倒置，且要求逐日观察，容易造

成次生菌生长，影响检测结果，所以本次修行规定：采集真菌后的沙氏琼脂平板倒置于28℃

±1℃的恒温培养箱中培养，第3天开始观察真菌生长情况，若真菌数量过多，可于第3天

计数结果并记录培养时间，否则于第5天记录结果。

f)实验数据处理

按照细菌总数结果计算方式进行。

根据GB/T18204.3—2013使用情况调查意见，保证报告结果的统一性，特做补充说明，

在所有平板均无菌生长时应检查仪器设备是否正常，在均无异常的情况下报告（未检出/m3）；

在有菌生长时，按照公式计算结果，小数点后的数字四舍五入并保留到整数位。

（6）补充质量控制部分

GB/T18204.3—2013无质量控制要求，本次修订，针对培养基平板配制、撞击法使用的

仪器设备、采样过程、检测过程提出质量控制措施，保证实验结果的可靠性。

撞击法质量控制要求：

a)每批沙氏琼脂平板配置后需做无菌检查，可每批选定3块平板培养观察，结果应无

菌落生长。

b)采样器需定期在负载条件下用检定合格的流量计进行校准，相对偏差不得超过5％；

在采样前应对采样系统的气密性进行检查，不得漏气；采样前需用酒精棉擦拭采样

头。

c)在采样开始前，确保所用试剂和材料为无菌状态，操作过程中避免人为污染。

d)为避免运输和保存过程中的污染，需同时进行现场空白对照试验，每次或每个区域

取一个对照平板，与采样平板同法操作但不需暴露采样，然后与采样后的平板一起

放入培养箱培养，结果应无菌落生长。

e)实验人员个体防护和检测废弃物的处理应依据GB19489进行。

（7）自然沉降法质量控制要求：

a)每批沙氏琼脂平板配置后需做无菌检查，可每批选定3块平板培养观察，结果应无

菌落生长。

b)在采样开始前，确保所用试剂和材料为无菌状态，操作过程中避免人为污染。

c)为避免运输和保存过程中的污染，需同时进行阴性对照试验，每次或每个区域取一

个对照平板，与采样平板同法操作但不需暴露采样，然后与采样后的平板一起放入

培养箱培养，结果应无菌落生长。

6.β-溶血性链球菌

本次修订增加触酶试验等生化鉴定试验，相应地增加了仪器和设备、培养基和试剂，原

培养基和试剂中具体列出血琼脂平板、革兰氏染色液和3%过氧化氢（H2O2）溶液的成分和

制法。

触酶试验是鉴定β-溶血性链球菌常用的生化鉴定方法，国家卫生和计划生育委员会

2015年实施的食品安全国家标准GB4789.11—2014《食品微生物学检验β型溶血性链球菌

检验》中就将触酶试验作为鉴定β-溶血性链球菌的生化方法。本次公共场所卫生检验方法

修订将其纳入。另外补充6.1.5.5其他检验使用生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡对可疑菌落

进行鉴定。增加此条可以更加准确的鉴定β-溶血性链球菌。

其他修改

（1）“6.1.2.1血琼脂平板”原文中血琼脂平板配制的pH7.4～7.6改为pH7.5±0.1，高

压灭菌121℃20min改成121℃15min。血琼脂平板制法增加了“6.1.2.1.2.1脱纤维羊血”

的配制方法。

（2）“6.1.3仪器和设备”中，“6.1.3.3普通培养箱”修改为CO2培养箱，增加了“6.1.3.4

普通显微镜：10倍～100倍”，用于革兰氏染色镜检；增加了“6.1.3.5电子天平”用于培养

基的配制。删除了“平皿：ø90mm”，因为平皿不属于仪器设备。

（3）“6.1.5.1培养方法”中的培养温度由35℃～37℃改为36℃±1℃，5%CO2培养

24h～48h。

（4）“6.1.5.3革兰氏染色镜检”中原文有“受培养与操作条件影响，链的长度在4个～

8个细胞至几十个细胞之间”，此句多余，删除。

（5）试剂的重量、体积为小数点后面保留一位有效数字，原来的未保留一位有效数字，

现统一增加。

7.嗜肺军团菌

本次修订保留培养法，同时新增荧光PCR法对嗜肺军团菌进行快速检测。原标准中的

检测方法—培养法被认为是检验嗜肺军团菌的金标准，在全国疾病预防控制机构中已推广

应用近8年，可以检测出所有军团菌，且特异性高，但存在检测耗时长、效率低、对试验

人员技术要求高、无法定量检测的局限性。

近年来，常用于空气中嗜肺军团菌的检测方法还有分子生物学检测，因其具有简便、快

速、经济等优点，在实时监控和及时预警上具有很大的优势，如常规PCR法、荧光PCR法、

EMA+qPCR法等。常规PCR法操作简便、快速，但敏感性较差，并且只能对军团菌进行定性

检测。荧光PCR法（qPCR）是在常规PCR法的反应体系中加入荧光基因，具有定性和定量的

优点，速度快耗时短，且特异度高，提高了军团菌的检出率，该方法也是除了细菌培养法外

唯一一项写入ISO技术规范的军团菌属和/或嗜肺军团菌检测标准。但是，该方法通过检测

DNA来检测军团菌，包括无致病性的死菌，可能导致假阳性的出现。EMA+qPCR法是用于定量

检测军团菌活菌的检测方法，EMA可以抑制死菌的PCR扩增，从而定量检测样品中军团菌活

菌浓度，但该方法在国内外均未标准化，方法技术尚不成熟。各种方法优缺点见表5。

军团菌检测的具有一定复杂性，分子检测法并不能完全取代传统的检测手段。根据需

要选择相应的检测方法，或联合使用多种检测手段，才能正确评估军团菌病暴发的风险因

素，对及时采取预防控制措施，预防军团病的发生具有重要意义。因此，本次修订保留培

养法并补充定量检测方法，同时新增荧光PCR法作为嗜肺军团菌快速检测方法。

表5各种实验室检验方法优缺点比较

实验室检测方法优点缺点

培养法可以检测出所有军团菌，且特异性敏感性低；培养时间长；对实验人员技

高，结果可靠。对于获得军团菌完整术要求较高；无法对样品中的嗜肺军团

信息，如研究其基因背景,耐药性或分菌进行定量测定

子分型十分必要

常规PCR法操作简便、快速，检出率相对较高敏感性较差，并且只能对军团菌进行定

性检测

荧光PCR法具有定性和定量的优点，特异性强，耗无法区分活菌和死菌，可能导致假阳性

时短，特异度高，提高了军团菌的检出

率

EMA+qPCR法具有定性和定量的优点，特异性强，速方法技术未标准化，尚不成熟

度快耗时短，提高了对有致病潜力的菌

株检测的准确性

（1）仪器设备

液体冲击式采样器是利用喷射气流的方式捕获空气中的微生物粒子。这是WHO和美

国CDC目前推荐的空气微生物采样方法，也是目前大量国外文献报道中采用的空气微生

物采样方法；目前已有的流量达到100L/min的气溶胶采样器可以避免固体撞击式采样器

的重叠效应，可以将一次采集的样品采用不同的方法进行分析，捕集效率高，可捕获0.5μ

m的小粒子，采样液对脆弱微生物有保护作用，使用方便，可反复消毒使用，适用于空气

中浓度较低的嗜肺军团菌的采集，尚无其他可替代的方法。故仍嗜肺军团菌的采集方法。

a)原标准中6.2.4平皿改为无菌平皿，90mm改为直径9cm。

b)为了格式标准，CO2培养箱培养温度35℃-37℃改为36℃±1℃

c)原标准中6.2.5紫外灯改为紫外线灯

d)因实验过程中需要使用无菌接种环，故增加无菌接种环：直径3mm。

e)因实验过程中需要使用微量移液器，故增加微量移液器：100μL、200μL。

（2）试剂和培养基

a)增加革兰氏染色液的成分和革兰氏染色法的操作步骤。

b)因为实验过程中有氧化酶实验、硝酸盐还原实验、尿素酶实验、明胶液化实验和

水解马尿酸实验，而原标准试剂和培养基中没有这些生化试剂，故需加上生化试

剂和成分。

c)因原标准6.3.9军团菌分型血清试剂和6.5.6中嗜肺军团菌诊断血清名称不一致，

故名称统一为嗜肺军团菌诊断血清。

（3）检验步骤

a)为了格式标准，原标准6.5.3，6.5.5中温度35℃-37℃改为36℃±1℃，孵育改为培

养。

b)为了表达标准，原标准6.5.4中菌落整齐改为菌落边缘整齐。

c)因原标准6.5.4中对紫外线灯观察菌落描述不详细，参考GB/T40392-2021《循环

冷却水中军团菌的检测》，在原标准6.5.4中增加荧光的颜色有助于区分样品中

军团菌的不同种类。为了避免军团菌的死亡，不能将平板长时间暴露在紫外灯

下，宜在数秒内完成。

d)因为培养基上2天之内生长的均不是军团菌，参考GB/T40392-2021《循环冷却

水中军团菌的检测》，故需在原标准6.5.5加上在GVPC培养基上2d内生长的菌

落均不是军团菌。

e)因为军团菌的颜色形态各异，培养基上每种颜色形态均有可能是军团菌，参考

GB/T40392-2021《循环冷却水中军团菌的检测》，故需在原标准6.5.5加上如果

有不同类型的疑似军团菌菌落，则每种类型应至少选择3个疑似菌落进行培养验

证。

f)原标准6.5.5中L-半光氨酸缺失的BCYE琼脂平板与6.3.6的BCYE-Cys琼脂平板

名称不一致，故名称统一为BCYE-Cys琼脂平板。

g)原标准6.5.6中缺少革兰染色形态观察，参考GB/T40392—2021《循环冷却水中

军团菌的检测》，故需加上革兰染色形态观察。

h)原标准6.5.6中生化实验没有具体操作步骤和结果观察，参考GB/T40392-2021

《循环冷却水中军团菌的检测》，故需加上生化实验具体步骤和结果观察。

i)原标准6.5.6中缺少嗜肺军团菌革兰染色判定结果，故需在文字修订6.5.6.7加上

染色镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌。

j)原标准6.5.6中血清学实验缺少相应的实验步骤，已补充。

k)本次新增荧光PCR法对嗜肺军团菌进行快速检测的相关内容。

（4）补充质量控制部分

GB/T18204.3—2013无质量控制要求，本次修订，针对原料选择，配制方法，质量检

查、生物安全提出控制措施，保证实验结果的可靠性。

要求如下：

a)原料选择

培养基和试剂需符合GB4789.28的质量要求，采用国内生产的成品培养基需有FSDA

（中国食品药品监督管理局）批准的生产文号。

b)配制方法

每次制备培养基均应严格按照实验操作标准规定的方法与剂量配制，灭菌，并且要记

录配制量与操作者、日期，并于包装上标明使用期限。

c)质量检查

用嗜肺军团菌和非嗜肺军团菌标准菌株接种BCYE和BCYE-CYE琼脂平板进行质控

试验，看其长势，以保证各种培养基能培养分离出相应致病菌。

d)生物安全

嗜肺军团菌是致病菌，实验操作人员应有二级生物安全防护实验室工作的实践经验，

实验人员在处理或检测可疑致病菌时应采取适当的预防措施，减少职业暴露，并保证符合

国家有关法规规定的条件。

8.附录A

以附录形式列出现场采样布点要求，具体技术内容如下：

（1）范围

本附录规定了公共场所空气中微生物撞击法和自然沉降法现场采样点布置的基本要求。

（2）采样点数量

依据GB/T18204.6进行布点。

（3）布点方式

为体现公共场所内空气微生物浓度，使采样检测结果接近真实情况，采用均匀布点原则。

同时强调采样点应避开通风口、通风道和热源，离墙壁距离应大于0.5m，离门窗距离应大

于1m，如同时采集其他空气样品，与其它采样器距离应大于1m。

（4）采样点高度

室内空气采样点高度和人呼吸带的高度保持一致。

三、主要试验（或验证）的分析、综述报告，技术经济论证，预期的经济效果

本次修订新增方法主要验证数据及报告见验证报告附件。

本次制修订的过程中，考虑我国目前国情，部分地区经济条件以及技术条件有所差异，

对方法的可行性和适用性均进行了充分考虑。通过本次修订，希望能够更好地满足各级检验

机构的实际应用需求，切实保障新版GB37488《公共场所卫生指标及限值要求》、GB37487

《公共场所卫生管理规范》、GB37678《公共场所卫生学评价规范》的实施。

本次修订补充了β-溶血性了链球菌的生化鉴定步骤，为此在三家单位进行实验室比对

实验，选取17株β-溶血性链球菌的临床分离株，β-溶血性链球菌的标准菌株ATCC21059

作为阴性对照，金黄色葡萄球菌ATCC25923作为阳性对照，于2021年11月25日～30日，

分别在三家单位（深圳市疾病预防控制中心、宝安区疾病预防控制中心和龙华区疾病预防控

制中心）开展β-溶血性链球菌的触酶试验的比对。比对结果见表6，实验结果符合预期。

表6β-溶血性链球菌触酶试验三家临床单位比对结果

单位菌株数（株）阴性（株）阳性（株）

深圳市CDC17170

宝安区CDC17170

龙华区CDC17170

中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所受国家卫健委委托起草《公共场所环

境样品嗜肺军团菌定量检验方法》标准，项目编号20140901。该项目建立荧光定量PCR方

法检测军团菌，于2014年11月分别在辽宁省疾病预防控制中心、杭州市疾病预防控制中

心、无锡市疾病预防控制中心开展方法验证。三家疾控中心的验证结果均符合预期。因实验

中用到的荧光定量PCR方法不仅能够定量，其最基本的功能就是定性。本标准的制定引用

该项目中荧光PCR的引物和探针及扩增体系，只需要定性判读结果即可，对于判断空气中

是否存在军团菌的污染，具有初筛和快速确认的功能。因此这三家单位的验证试验适用于本

标准的方法验证。

四、采用国际标准和国外先进标准的程度，以及与国际、国外同类标准水平的对比情况，或

与测试的国外样品、样机的有关数据对比情况

(一)细菌总数

韩国《公用设施室内空气质量控制法》规定了医疗机构，培育机构，老人福利机构，商

业教育机构内空气中细菌总数的限值，为强制性标准。使用的安德森级联采样器，采样体积

为200L～1000L。

WHO、美国、日本、澳大利亚、加拿大、芬兰、德国室内空气标准中都没有细菌总数指

标规定。

(二)真菌总数

本次修订广泛收集了以来国内外发布的空气中真菌总数的检验方法及发表的文献资料，

包括但不限于WHO的《WHOGuidelinesforIndoorAirQuality:DampnessandMold》、国际

标准化组织ISO发布的空气真菌检验方法、新加坡空气质量指引等检验方法以及文献资料

中报道或使用的空气中真菌检验方法。

WHO

WHO在2009年发布了《WHOGuidelinesforIndoorAirQuality:DampnessandMold》。

2010年发布了《WHOguidelinesforindoorairquality:selectedpollutants》以及2014年发布了

《WHOguidelinesforindoorairquality:householdfuelcombustion》。

WHO曾在1990年提出的真菌总数限值1500CFU/m3，2009年WHO在《WHOGuidelines

forIndoorAirQuality:DampnessandMold》中没有提出真菌的限值，只提出了一些预防室内

真菌污染的建议。

针对真菌的检测方法，提出如下建议：

1.环境采样的方法主要分为两类：通过空气采样直接监测空气中真菌颗粒数量；直接在培

养材料上通过真菌生长特征进行识别。

2.影响生物气溶胶分散、沉积、收集和回收的因素主要包括：空气动力学、潮湿、静电效

应以及电磁辐射。

3.空气采样方法主要包括：

（1）体积空气采样（Volumetricairsampling）：空气采样仪将生物颗粒从空气中分离出

来，收集并浓缩颗粒物并对其进行测量，收集方法分为撞击法、过滤法，常用仪器为撞

击式采样器；

a)惯性采样器（Inertialsamplers）：大多数采样仪器基于撞击原理，最常见的撞击法

采样器是指直接撞击至琼脂（培养基）的采样器，空气通过狭缝或圆形吸入节流孔

进入并撞击至琼脂平面，其他类型采样器还包括离心撞击采样器和液体撞击采样器；

b)过滤采样器（Filtrationsamplers）：使用滤膜捕获和收集生物气溶胶的方法，膜具

有多种成分和特性，从而影响收集效率，滤膜样品可结合培养基观察或培养基方法

进行分析，也可结合生化、免疫化学、分子遗传或光谱分析，该方法在常规空气采

样中并未得到广泛应用；

（2）被动空气采样（Passiveairsampling）：

a)沉降法（Settleplates）：将培养皿中的琼脂培养基暴露于环境空气中一段时间，通

常为0.5-1小时，孵育平板，计数并识别生物群落，该方法无法确定采样空气的有

效体积，因此菌落计数不能用体积单位表示，数据是半定量的；

b)粉尘采样（Dusts）：研究表面沉降粉尘是生物颗粒的主要来源，因此可对室内灰尘

进行分析，与空气采样的暴露测量值相比，该测量值更少受到时间和空间变化的影

响，此外常见的分析污染物（如过敏原、内毒素和葡聚糖）可在灰尘中长期保持稳

定，并可重复测量。

4.分析方法主要包括：

a)显微镜直接观察（Directmicroscopicmethods）；

b)基于培养的方法（Culture-basedmethods）；

c)生化检测（Biochemicaldetectionoffungalextrolites），检测物质包括抗原、麦角固

醇（Ergosterol）、β-（1,3）-D-葡聚糖（Beta-(1,3)-D-glucan）等；

d)分子遗传学方法（Moleculargeneticmethods），如基于PCR技术的方法。

国际组织

ISO16000-20—2017《Обнаружениеиподсчетплесневыхгрибков.Определениеобщего

количестваспор》《霉菌的检测和计数。孢子总数的测定》中用孢子总数反应空气中真菌污

染程度。采样时采用撞击式微生物采样器，如带有可拆卸载玻片、空气流速约为30cm3/min

的采样器，例如PS301和MBASS302；带有可更换载玻片、空气流速约为15cm3/min的

采样器，例如AllergencoMKZ3，采样量依据污染程度采集50cm3、100cm3或200cm3空

气，空气中孢子因惯性作用撞击到采样器内的粘性玻片上，经乳酚蓝或棉籽蓝的乳酸溶液染

色，并在显微镜下以400倍或1000倍的放大倍数进行检查计数。

美国：美国政府工业卫生工作者协会于1985年提出室内空气中的真菌的限值为1000

CFU/m3，参考由美国工业卫生学会于1996年出版的《实地测定环境样本的生物污染物指

引》（FieldGuidefortheDeterminationofBiologicalContaminantsinEnvironmentalSamples），

采用Andersen多孔采样器、Reuter离心采样器（RCS）、SurfaceAirSystem（SAS）气溶胶

采样器和气旋粗梳机旋风洗涤等的采样仪器进行采样检测。

澳大利亚：澳大利亚于2002年提出室内霉菌及真菌是已知的空气污染物，具有潜在危

害，会降低室内空气质量。然而，许多生物物种的准确建模、采样、测试和测量的方法并未

得到普遍认同。包括屋尘螨、霉菌和真菌、过敏原、细菌和病毒污染物在内的生物污染物均

不在IAQ验证方法范围内（注意：随着该领域知识的增加，未来版本的NCC可能会考虑

包含生物污染物和将验证方法扩展到性能要求）。因此在合理范围内，建议借鉴WHO的规

定。

加拿大：环境部于1989年提出室内空气中的真菌指标的限值为500CFU/m3。

新加坡：1996年《办公室内良好空气质量指引》中规定可接受的室内空气质量中真菌

总数限值为500CFU/m3，所采用的采样装置为旋风分离器或撞击式采样器，平均切割尺寸

为4µm，后续同样采取培养方法进行计数。

韩国：在《생활공간의공기질개선을위한법제연구》（2010）中对教室和医疗机

构、托儿机构、养老机构、办公场所给出总悬浮菌的限值（800CFU/m3），但对真菌无限值

及检验方法。

其他国家暂无其他室内空气中真菌检验方法。

(三)β-溶血性链球菌

本次修订广泛收集了以来国外发布的空气中微生物指标的检验方法及发表的文献资料，

还包括食品中的β-溶血性链球菌的检验方法和标准。

新加坡:1996年《办公室内良好空气质量指引》对室内空气质量评价参数中涉及细菌