T-CITS 324-2025 循环肿瘤细胞检测技术质量保证要求

ICS11.100CCSC05CITST/CITS324—2025前言 12规范性引用文件 13术语和定义 14风险管理 14.1新建立或者变更引发的风险管理要求 14.2运行中的风险管理要求 15通用要求 25.1标本采集要求 25.2检验质量控制要求 25.3结果报告要求 25.4检验后标本保存和处置要求 36检测技术要求 36.1正确度 36.2重复性 36.3线性（适用时） 36.4最低检测限 36.5检测特异性 37检测结果判读 37.1通用要求 47.2免疫荧光染色判读 47.3荧光原位杂交判读 4参考文献 6T/CITS324—2025本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中国医学科学院肿瘤医院、杭州华得森生物技术有限公司和国军标（北京）标准化技术研究院提出。本文件由中国检验检测学会归口。本文件起草单位：中国医学科学院肿瘤医院、杭州华得森生物技术有限公司、国军标（北京）标准化技术研究院、南方医科大学南方医院、中国食品药品检定研究院、国家纳米中心、安徽省胸科医院、安徽医科大学第二附属医院、安徽医科大学第一附属医院、北京航空航天大学杭州研究院、北京水木济衡生物技术有限公司、北京医学检验学会、重庆大学城医院、重庆医科大学附属第三医院、大连医科大学附属第二医院、福建医科大学附属协和医院、广州安方生物科技有限公司、广州医科大学附属第二医院、哈尔滨医科大学附属第六医院、哈尔滨医科大学附属肿瘤医院、河南省肿瘤医院、华中科技大学协和深圳医院、江苏省肿瘤医院、陆军军医大学大坪医院、南京鼓楼医院、美纳里尼（中国）投资有限公司、山东大学齐鲁医院、山东大学齐鲁医院（青岛）、山东第二医科大学附属医院、上海交通大学医学院附属新华医院、潍坊市第二人民医院（潍坊呼吸病医院）、武汉大学中南医院、新疆医科大学附属肿瘤医院、粤北人民医院、云南省第一人民医院检验科、云南省肿瘤医院、浙江大学附属邵逸夫医院、浙江大学附属第二医院、郑州大学第一附属医院、中国医学科学院北京协和医院、中国康复研究中心、中国中医科学院西苑医院、中山大学附属第一医院、中山大学附属孙逸仙纪念医院、珠海圣美生物诊断技术有限公司。本文件主要起草人：崔巍、张开山、刘万阳、张玉娟、刘明洋、郭志敏、田华、郑磊、郭世富、祝捷敏、胡志远、刘周、王琴、王中新、高阳、王冰、刘定华、邓昆、王琪、杜小慧、曹颖平、韩超、周强、许青霞、高海燕、孙轶华、罗迪贤、严枫、黄庆、杨军、吴帆、杜鲁涛、张义、王谦、杨桂茂、周韵斓、曲梅花、汪付兵、马秀敏、郭文佳、杜日昌、孙鹥、周永春、张钧、陶志华、李晟磊、王屹、陈倩、李琦、冯品宁、段朝晖、张京璐。T/CITS324—20251循环肿瘤细胞检测技术质量保证要求本文件规定了循环肿瘤细胞检测技术质量保证过程中的风险管理、通用要求、检测技术要求和结果判读要求。本文件适用于医疗机构开展循环肿瘤细胞检测技术的质量保证工作。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB39707医疗废物处理处置污染控制标准GB/T42060医学实验室样品采集、运送、接收和处理的要求3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1循环肿瘤细胞circulatingtumorcell；CTC从实体肿瘤病灶（原发灶或转移灶）脱落并进入外周血液循环的肿瘤细胞。[来源：T/CITS235—2025，3.1]3.2质量保证qualityassurance；QA质量管理的一部分，致力于提供质量要求会得到满足的信任。[来源：GB/T19000—2016，3.2.11]3.3医学决定水平medicaldecisionlevel；MDL对疾病诊断、治疗或排除起决定作用的某一被测成分的浓度（数量）。4风险管理4.1新建立或者变更引发的风险管理要求实验室应对新建CTC检测系统进行全面验证，当主要检测系统发生改变或实验室环境发生较大改变时，应重新进行性能验证/确认，验证方案应进行充分的风险评估。4.2运行中的风险管理要求4.2.1实验室运行CTC检测时，应评估各项风险，并作出风险管理措施。不应出现不正确的检测结果、延迟的检测结果和不正确的随附结果信息。4.2.2识别导致风险增加的原因包括但不限于以下方面。T/CITS324—20252a)异常故障状态：1)批内或批间不一致性；2)赋值的不可溯源性；3)试剂的非特异性；4)标本或试剂的携带污染；5)材料的不稳定性（如运输、贮存或使用不当）；6)系统故障；7)数字故障；8)软件应用故障。b)正常使用中发生的潜在风险：1)定量检测程序相关的测量不确定度；2)结果错误分类为“异常”或超出参考区间；3)标本中干扰物质的影响；4)标本基质的多变性；5)仪器配置不足或仪器性能受限。c)医学实验室错误使用可能包括的事件：1)忽视特殊要求；2)未按顺序执行操作，包括检测前和检测后的过程；3)数据输入错误（如患者姓名等）；4)标本量不足；5)试剂未正确装载。5通用要求5.1标本采集要求标本采集依据GB/T42060的规定执行，包括但不限于：a)应选择适合检测方法的抗凝采血管（常用的抗凝剂有EDTA-K2、ACD等）或收集装置，并确认采血器皿的洁净；b)采集标本时应做好防护，采集工作结束后应脱掉手套并洗手；c)标本采集后应尽快送检和处理，必要时，根据操作说明书进行标本保存；d)实验室应制定标本接收和拒收标准，必要时，重新采集标本；e)临床医生可根据患者治疗周期、治疗方案等实际情况选择相应的采血部位和采血时间点；f)诊疗过程中标本采集条件相对固定。5.2检验质量控制要求开展CTC检测的实验室质量控制要求至少应涵盖：a)实验室应制定检测前、检测中、检测后全过程的标准操作规程（standardoperationprocedure，SOP并定期审核、修订、培训；b)检验设备、设施、试剂、耗材及环境等的质量、数量及安全性应满足检测的需要；c)检验人员应定期进行能力评估；d)检验前应进行CTC检测方法学的性能验证；e)每批次试验应设立阳性对照和阴性对照，对照的设置应合理、有效；f)应通过参加室间质量评价或实验室间比对评估检测结果的准确性，必要时，可通过临床诊疗状态评估检测结果的准确性；g)涉及图像自动判读分析时，图像采集及分析软件应纳入质量控制，包括但不限于荧光显微镜所选通道与采集系统的匹配、荧光光源的使用时间、电脑系统运行情况等，每次图像采集前应将本次采集的相关参数进行保存。5.3结果报告要求3T/CITS324—2025报告内容应包括患者信息、标本信息、数值报告、必要的图像报告及解释性注释等。5.4检验后标本保存和处置要求检验后标本保存和处置要求包括但不限于：a)应规定检验后标本的保存时限及储存条件；b)应明确检验后保存标本的来源识别；c)应明确标本用于附加检测的适宜性；d)检验后标本废弃处理应按照《医疗废物管理条例》执行，并符合GB39707的要求。6检测技术要求6.1正确度6.1.1正确度由系统测量误差决定，可采用回收试验进行CTC检测系统的正确度评价。6.1.2通过标准品模拟血样确定CTC富集表征全流程的回收率，至少检测低（医学决定水平范围内）、中（＜100个）、高(≥100个）三个浓度水平的样品，每个浓度水平重复检测3次。低值水平样品最低回收率应不低于50中、高值样品的最低回收率应不低于75％。6.1.3标准品细胞宜采用相应癌种细胞系制备，常用癌种细胞系示例见表1。表1常见癌种细胞系示例6.2重复性将低（医学决定水平范围内）、中（＜100个）、高(≥100个）数量的标准品细胞分别投入到表观健康人全血上机量的标本中，按照SOP进行CTC检测，每个浓度水平重复检测至少10次，计算CV值或极差。低浓度水平样品极差应不高于1/2的医学决定水平或CV不高于45％，中值和高值浓度水平样品的CV应不高于15％。6.3线性（适用时）将标准品从高到低稀释5个～7个细胞水平，最高水平为1000个～2000个、最低水平为1个～9个。通过CTC计数检测，评估回收检测数量和投入数量之间的线性，相关系数应不小于0.975。6.4最低检测限将不同数量的标准品细胞投入到表观健康人全血上机量的标本中，按照SOP进行CTC计数检测，可获取最低检测数量。6.5检测特异性将不具备CTC检测特征的细胞投入到表观健康人全血上机量的标本中，或者直接采用表观健康人全血标本，按照SOP进行CTC计数检测，结果应为阴性未检出。7检测结果判读T/CITS324—202547.1通用要求通用要求包括但不限于：a)每例标本宜至少由两名有资质的检测人员判读计数，结果采用盲法进行比对，差异较大时应由第三人复检并记录；b)对于异常或可疑结果，应及时进行复查和验证，复查方法应能够排除因操作失误或设备故障等原因导致的错误结果。7.2免疫荧光染色判读7.2.1通用型免疫荧光化学染色的判读包括但不限于：a)应采用免疫荧光染色与细胞核形态相结合的方式综合判读；b)观察细胞核形态，排除核型为U型或马蹄型的白细胞；c)应使用稳定性较高的固态光学质控品调节荧光显微镜的设置；d)实验室应建立干扰物质的检测清单和避免措施，并在检测报告中注明可能的干扰因素，如患者标本中不应存在带有荧光的干扰物（如链霉素）；如患者正在使用含荧光的药物，进行CTC检测前应至少停药7d以上。7.2.2特殊表型（如PD-L1、Her2等）免疫荧光化学染色的判读包括但不限于：a)特殊表型蛋白标志物的判读，应参照通用型判读标准；b)如果特殊表型蛋白标志物是在通用型标志物的基础上追加染色，应注意临近荧光通道的干扰；c)如果需要对表达量定性分析，应设置参考标准，如根据细胞的相对荧光强度区分强阳性、中阳性和弱阳性（如Her2+++、++、+）d)细胞的相对荧光强度可采用公式（1）计算：细胞的相对荧光强度=A/B.........................（1）式中：A——各滤光器通道中的采集的细胞平均荧光强度；B——背景荧光强度。7.3荧光原位杂交判读7.3.1通用型荧光原位杂交判读标准包括但不限于：a)应在一定数量的细胞中计数杂交信号，当具有阳性信号的细胞数达到一定数值（即为阈值，cut-off值）时，视为阳性，阈值设定应参照对应CTC试剂使用说明书、行业指南/共识，经实验室验证后使用；b)检测结果判读前应确认杂交探针信号清晰、明亮且易于分辨，背景无点状或朦胧荧光干扰；c)细胞核应完整、边界清晰，无过度重叠或聚集，如可判读细胞核数量不足，应重复检测；d)根据不同的检测目的和探针特性，应选用试剂使用说明书标明的方案设立相应的阳性、阴性和异常结果的判断标准，并经过验证和评估：1)正常（阴性）信号：每个探针对应染色体区域显示2个信号点；2)异常（阳性）信号：—缺失：单个探针仅显示1个信号点；—扩增：单个探针显示≥3个信号点；—分裂信号：如两个信号通过可见的链接相连，计为1个信号点；—弥散信号：如信号弥散且连续，计为1个信号点。e)重叠细胞团中单个细胞核数量应明确记录，单个完整细胞计为1个，重叠细胞团按实际可分辨的细胞核数量计数。7.3.2特殊荧光原位杂交判读标准包括但不限于：a)扩增探针：应结合细胞核大小，区分多倍体与异常扩增；b)缺失探针：如有部分片段缺失，应仔细观察信号点大小，必要时应进行分子生物学检测确认是否为有效片段缺失；c)融合探针：单信号点基本重合判定为阳性信号，有小片段插入时，应使用单色荧光通道观察确T/CITS324—20255认；d)分离探针：信号点之间的距离应大于单信号点大小的2倍及以上可判定为阳性，有小片段丢失时，应使用单色荧光通道观察鉴别；e)针对特定基因位点或染色体异常的探针组合（如3p22.1/10q22.3和3q29/CEP10等判读应结合探针特性及临床意义，并参照试剂说明书建立判读标准。T/CITS324—20256参考文献[1]GB/T19000—2016质量管理体系基础和术语[2]GB/T43278—2023医学实验室风险管理在医学实验室的应用[3]WS/T402—2024临床实验室定量检测项目参考区间的制定[4]WS/T408—2012临床化学设备