《结核病患者外周血淋巴细胞亚群检测及临床应用专家共识》2020要点

《结核病患者外周血淋巴细胞亚群检测及临床应用专家共识》(2020)要点结核病(TB)是严重威胁人类健康的呼吸道传染病。TB发生、发展及转归取决于入侵结核分枝杆菌(MTB)的数量、毒力及机体免疫抵抗力。因此，对TB患者免疫状况的评估和了解其临床免疫学特征是近年来研究的热点之一。通过流式细胞术(FCM)分析患者外周血淋巴细胞亚群是目前临床评估免疫功能的方法之一，有助于了解患者当前的免疫状态、免疫功能和免疫平衡，为临床制定免疫干预措施、观察疗效及判断预后等方面提供实验室检测依据。该项目在免疫性疾病、血液病、肿瘤和艾滋病等临床应用广泛，但在TB临床的应用较有限，认识不足。淋巴细胞亚群分析涉及多个指标，各指标之间关系复杂，如何正确解读、客观分析、科学判断结果，指导TB临床诊断和治疗，对于TB防控具有现实意义。临床常用的淋巴细胞亚群分析项目目前，临床常规分析的人类外周血淋巴细胞亚群根据其细胞表面或细胞内独特的分化抗原(CD)的表达可分为：T淋巴细胞((CD3+)、B淋巴细胞(CD19+)和自然杀伤(NK)细胞(CD3-CD16+CD56+)。一、检测原理应用各种荧光染料标记的单克隆抗体分别结合待检测血液标本中各类淋巴细胞膜表面或胞内独特的CD，然后通过流式细胞仪将染色后的血液细胞制成单细胞悬液，用一定压力将待检测样品压入流式细胞仪流动室彳寺测细胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过流式照射室检测区域。二、检测方法1.淋巴细胞亚群相对计数法：2.淋巴细胞亚群绝对计数法：三、检测报告内容应用FCM常规分析下列淋巴细胞亚群：T细胞(CD3+、CD4+、CD8+、DPT、DNT和NKT)、NK细胞和B细胞后，建议报告各个细胞亚群细胞的相对计数(百分比)和绝对计数。四、检测注意事项1.流式检测仪器及抗体试剂的质量保证：2.标本采集：3.审核内容：4.报告结果的参考值范围：淋巴细胞亚群分析在TB患者临床诊疗中的应用一、评估TB患者的免疫状况下列TB患者有必要进行淋巴细胞亚群分析，以辅助临床客观评价患者免疫状况，合理制定治疗方案，适时进行免疫干预，调节患者的免疫功能，促进患者早日康复。1.老年TB患者：建议在老年TB患者中进行淋巴细胞亚群分析以了解其免疫状况，更好地应对和控制TB。2.活动性AB患者：建议病情严重的活动性TB患者进行淋巴细胞亚群分析，以判断是否需进行免疫干预。3.糖尿病并发活动性肺结核患者：建议糖尿病并发活动性TB患者进行淋巴细胞亚群分析。4.HIV与MTB双重感染者：建议HIV与MTB双重感染者进行淋巴胞亚群分析，以了解患者的免疫状况和监测治疗效果。5.其他：二、监测肺结核患者的治疗效果建议上述活动性TB患者治疗前、后进行淋巴细胞亚群分析，以作为制定免疫治疗方案的实验依据和监测疗效的指标。三、TB患者进行外周血淋巴细胞亚群检测的指征鉴于以上观点，建议活动性TB患者在治疗前后进行外周血淋巴细胞亚群检测的指征为：(1)老年活动性TB患者；(2)复治、久治不愈的TB患者；(3)病变范围广泛的、病情严重的TB患者；(4)并发反复感染、严重感染，尤其并发HIV感染的TB患者；(5)并发糖尿病的活动性TB患者；(6)并发肿瘤、贫血、低蛋白血症的活动性TB患者；(7)有免疫缺陷病家族史、长期使用免疫抑制剂的活动性TB患者。TB患者淋巴细胞亚群检测结果的判读及其临床意义1.总T淋巴细胞(CD3+)：T淋巴细胞参与机体细胞免疫应答，外周血CD3+百分比或绝对计数值低于参考范围，说明T淋巴细胞数可能减少，提示可能存在免疫功能低下。活动性TB患者CD3+T细胞的百分比和绝对计数值可能没有明显变化，也可能降低，而且病情越严重，下降越明显；如低蛋白血症、贫血、并发糖尿病、耐多药或病变广泛的TB患者，其外周血CD3+T细胞数明显降低；>60岁TB患者的CD3+T细胞百分比或绝对计数可能明显低于<60岁的患者。CD3+T细胞的百分比或绝对计数值明显下降，说明患者出现明显的免疫抑制。2.辅助性/诱导性T淋巴细胞(CD3+CD4+CD8-):活动性TB患者CD4+T细胞百分比或绝对计数可能低于健康人，病情越严重，下降越明显如低蛋白血症、贫血、并发糖尿病、耐多药或病变广泛的TB患者CD4+T细胞绝对计数明显降低；此外，>60岁TB患者的CD4+T细胞百分比或绝对计数可能明显低于<60岁的患者。CD4+T细胞百分比或绝对计数明显下降，表明CD4+T细胞功能缺失，将削弱机体抗MTB的保护性防御机制，是TB患者免疫状态恶化的一种表现形式。潜伏性结核感染者若出现外周血CD4+T细胞耗竭，就易导致MTB再活化。3.细胞毒/抑缶!]性T淋巴细胞(CD3+CD8+CD4-):CD8+T细胞绝对计数明显下降，表明机体调动(CD8+T细胞直接杀灭胞内外MTB而导致CD8+T细胞大量消耗，是TB患者免疫状态恶化的一种表现形式。若发病早期不及时对患者进行治疗和免疫干预，可能导致CD8+T细胞计数不断下降，从而导致病情加重或呈慢性感染。CD8+T细胞绝对计数增高可能是患者MTB负荷高所致，可能预示患者对化疗反应迟缓。4.CD4+/CD8+比值:若CD4+/CD8+比值彳氐于健康人,表明CD4+T细胞较CD8+T细胞下降明显；病情严重的患者CD4+/CD8+比值可能高于病情较轻的患者，可能是因为CD8+T细胞较CD4+T细胞下降明显所致。5.双阴性T淋巴细胞(DPT细胞，CD3+CD4+CD8+)：肺结核患者外周血DPT细胞具有抗结核免疫力，活动性TB患者DPT细胞百分比可能正常、增高或减少，其绝对计数可能明显降低，提示抗结核免疫力下降，其变化的临床意义尚需进一步探讨。6.双阴性T淋巴细胞(DMT细胞，CD3+CD4-CD8-)：活动性TB患者DNT细胞百分比和绝对计数可能减少，病情越严重，下降越明显，可能是因为机体通过DNT数量下降使机体免疫抑制功能降低，以提高MTB清除能力；260岁TB患者的DNT细胞绝对计数可能明显低于<60岁的患者。7.NKT细胞(CD3+CD56+CD16+)：原发性肺结核NKT细胞数一般无明显变化，其他类型的活动性TB尤其是血行播散性肺结核患者NKT细胞百分比或绝对计数明显增高，糖尿病并发TB患者的NKT细胞百分比或绝对计数明显高于没有糖尿病的TB患者，这可能是由于体内MTB含量高、分布广泛，诱导机体产生NKT细胞抗结核。但随着病情加重NKT细胞会逐渐减少。8.NK细胞(CD3-CD56+CD16+)：原发性S市结核NK细胞百分比和绝对计数一般无明显变化，其他类型的活动性TB患者NK细胞绝对计数可能明显减少，其自然杀伤功能也可能明显降低；而且病情越严重，下降越明显；复治肺结核患者的NK细胞绝对计数明显低于初治肺结核患者；血行播散性S市结核及肺外结核患者NK细胞百分比或绝对计数降低的发生率和降低程度均明显高于单纯肺结核患者。9.B淋巴细胞(CD3-CD19+)：活动性TB患者病情严重时(如并发糖尿病、贫血、低蛋白血症或病变广泛的患者)B淋巴细胞百分比和绝对计数均明显下降，而且随着患者年龄增长而逐渐降低，尤其是60岁以上的患者下降明显。对TB患者淋巴细胞亚群检测与分析的建议和展望1.合理选择淋巴细胞亚群检测与分析的方法：只分析各淋巴细胞亚群的百分比不能客观、准确地反映TB患者的免疫功能状况，建议同时检测与分析淋巴细胞亚群的相对计数和绝对计数。2.TB患者进行淋巴细胞亚群检测的建议：建议活动性TB患者尤其是存在下列情况的患者应进行淋巴细胞亚群分析：(1)并发反复感染、严重感染及多种病原体与特殊病原体感染者，尤其是并发HIV感染的患者；(2)常规抗结核治疗效果不佳的患者，除了考虑耐药等原因外还应考虑是否存在宿主免疫功能受损；(3)并发严重的过敏性疾病或自身免疫性疾病的患者，可能存在免疫自稳和耐受功能受损；(4)并发血液系统肿瘤或者其他肿瘤