DB22-T 422-2005 消毒产品中三氯新高效液相色谱法测定

DB22T4222005消毒产品中三氯新高效液相色谱法测定1范围本标准规定了消毒产品中三氯新含量测定的高效液相色谱法。本标准适用于以三氯新为主要有效成分或含有三氯新成分的消毒产品，包括消毒剂、消毒湿巾、抗菌洗手液、抗菌肥皂等产品的含量测定。本方法测定三氯新的线性范围为0.5μg/mL～50μg/mL，检出限为0.1μg/mL，定量限为0.5μg/mL。2原理试样中的三氯新经甲醇超声提取后，用高效液相色谱仪进行分离测定，采用紫外检测器在280nm波长处检测，外标法定量。三氯新在C18色谱柱上得到良好分离，其色谱峰面积与浓度在一定范围内呈线性关系，据此进行定量分析。3试剂与材料3.1甲醇：色谱纯。3.2乙腈：色谱纯。3.3冰乙酸：分析纯。3.4三氯新标准品：纯度≥99.0%。3.5三氯新标准储备液：准确称取三氯新标准品0.1000g，用甲醇溶解并定容至100mL，配制成浓度为1000μg/mL的标准储备液，于4℃冰箱中避光保存，有效期3个月。3.6三氯新标准工作液：准确吸取适量三氯新标准储备液，用甲醇逐级稀释成浓度为0.5μg/mL、1.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL的标准工作系列溶液，临用现配。3.70.1%乙酸溶液：量取1.0mL冰乙酸，用水稀释至1000mL，混匀。3.8提取液：甲醇水（80:20，V/V）。3.90.45μm有机滤膜。4仪器与设备4.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。4.2色谱柱：C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）或性能相当者。4.3分析天平：感量0.0001g。4.4超声波清洗器：功率250W，频率40kHz。4.5离心机：转速≥4000r/min。4.6涡旋混合器。4.7微量进样器：50μL、100μL。4.8容量瓶：10mL、25mL、50mL、100mL。4.9具塞刻度试管：10mL、25mL。4.10移液管：1mL、5mL、10mL。5分析步骤5.1试样制备5.1.1液体试样：准确称取约1.0g（精确至0.0001g）试样于25mL具塞刻度试管中，加入提取液定容至刻度，涡旋混合1min，超声提取20min，取出冷却至室温，经0.45μm有机滤膜过滤，滤液供高效液相色谱分析。5.1.2半固体试样（如膏体、凝胶）：准确称取约1.0g（精确至0.0001g）试样于25mL具塞刻度试管中，加入10mL提取液，涡旋混合2min，超声提取30min，取出冷却至室温，用提取液定容至刻度，混匀，以4000r/min离心10min，取上清液经0.45μm有机滤膜过滤，滤液供高效液相色谱分析。5.1.3固体试样（如抗菌肥皂）：将试样研磨成细粉，准确称取约1.0g（精确至0.0001g）试样于25mL具塞刻度试管中，加入15mL提取液，涡旋混合3min，超声提取40min，取出冷却至室温，用提取液定容至刻度，混匀，以4000r/min离心15min，取上清液经0.45μm有机滤膜过滤，滤液供高效液相色谱分析。5.2色谱条件5.2.1流动相：甲醇0.1%乙酸溶液（75:25，V/V）。5.2.2流速：1.0mL/min。5.2.3柱温：30℃。5.2.4检测波长：280nm。5.2.5进样量：20μL。5.2.6运行时间：15min。5.3标准曲线绘制分别吸取5.6中配制的三氯新标准工作系列溶液各20μL，按5.2规定的色谱条件进行测定，以三氯新浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。标准曲线相关系数应不小于0.999。5.4试样测定吸取5.1中制备的试样溶液20μL，按5.2规定的色谱条件进行测定，记录色谱峰面积，根据标准曲线计算试样中三氯新的含量。若试样溶液中三氯新浓度超出标准曲线线性范围，应将试样溶液适当稀释后重新测定。6结果计算试样中三氯新的含量按式（1）计算：X=(c×V×D)/m式中：X——试样中三氯新的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）或毫克每升（mg/L）；c——从标准曲线上查得的三氯新浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；V——试样定容体积，单位为毫升（mL）；D——稀释倍数；m——试样质量，单位为克（g）或毫升（mL）。计算结果保留三位有效数字。7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。8回收率本方法的三氯新加标回收率为90.0%～105.0%。9注意事项9.1三氯新标准品应避光保存，标准工作液应临用现配。9.2色谱柱使用后应按规定进行清洗和保存，以保证柱效和分离效果。9.3流动相应经0.45μm滤膜过滤并超声脱气后使用。9.4不同类型的消毒产品应根据其基质特性选择合适的提取方法和时间。9.5分析过程中应