2025年中国生物兰州生物技术开发有限公司招聘笔试历年常考点试题专练附带答案详解试卷2套

2025年中国生物兰州生物技术开发有限公司招聘笔试历年常考点试题专练附带答案详解（第1套）一、单项选择题下列各题只有一个正确答案，请选出最恰当的选项（共30题）1、在蛋白质电泳中，决定蛋白质迁移速率的主要因素是：

A．蛋白质的电荷数量

B．蛋白质的分子大小

C．缓冲液的pH值

D．蛋白质的形状与电荷的综合影响2、下列哪种酶常用于PCR反应中以耐受高温环境？

A．DNA连接酶

B．逆转录酶

C．TaqDNA聚合酶

D．限制性内切酶3、在微生物培养中，高压蒸汽灭菌的标准条件通常是：

A．100℃，30分钟

B．121℃，15-20分钟

C．160℃，2小时

D．75℃，10分钟4、ELISA检测中，常用于检测抗体的方法是：

A．直接法

B．竞争法

C．双抗体夹心法

D．间接法5、下列关于质粒的描述，错误的是：

A．质粒是环状双链DNA分子

B．质粒可独立于染色体进行复制

C．质粒是细菌生存所必需的遗传物质

D．质粒常携带抗生素抗性基因6、在蛋白质电泳中，SDS的主要作用机制是使蛋白质分子带上均匀的负电荷，从而按照什么进行分离？A．蛋白质的等电点

B．蛋白质的形状

C．蛋白质的分子质量

D．蛋白质的溶解度7、下列哪种酶常用于PCR反应中以扩增特定DNA片段？A．DNA连接酶

B．逆转录酶

C．TaqDNA聚合酶

D．限制性内切酶8、在细胞培养过程中，防止微生物污染最常用的抗生素是？A．青霉素和链霉素

B．庆大霉素和红霉素

C．四环素和氯霉素

D．头孢唑林和万古霉素9、下列哪种方法最适合用于测定溶液中蛋白质的浓度？A．琼脂糖凝胶电泳

B．紫外分光光度法（280nm）

C．PCR扩增

D．高效液相色谱（HPLC）10、单克隆抗体是由哪种细胞产生的？A．B淋巴细胞

B．T淋巴细胞

C．杂交瘤细胞

D．浆细胞11、在重组DNA技术中，用于连接目的基因与载体DNA的酶是：A．限制性内切酶

B．DNA聚合酶

C．DNA连接酶

D．逆转录酶12、下列哪种细胞器是真核细胞中蛋白质合成的主要场所？A．高尔基体

B．线粒体

C．核糖体

D．溶酶体13、在ELISA检测中，常用的标记酶是：A．碱性磷酸酶

B．过氧化氢酶

C．溶菌酶

D．淀粉酶14、下列哪种培养基常用于细菌的分离与纯培养？A．液体培养基

B．半固体培养基

C．固体培养基

D．选择培养基15、在PCR反应中，退火温度主要取决于：A．模板DNA长度

B．引物的GC含量和长度

C．Taq酶活性

D．循环次数16、在蛋白质电泳中，SDS的主要作用机制是使蛋白质分子按什么分离？A.电荷大小B.形状差异C.分子质量D.等电点17、下列哪种酶常用于PCR反应中以耐受高温环境？A.DNA连接酶B.逆转录酶C.TaqDNA聚合酶D.限制性内切酶18、在细胞培养过程中，常用于防止细菌污染的抗生素是？A.青霉素-链霉素双抗B.放线菌素DC.秋水仙素D.嘌呤霉素19、下列哪种方法最适合用于检测特定蛋白质的表达水平？A.RT-PCRB.WesternblotC.琼脂糖凝胶电泳D.ELISA20、单克隆抗体的制备主要依赖于哪类细胞的融合？A.B细胞与肿瘤细胞B.T细胞与骨髓瘤细胞C.B细胞与骨髓瘤细胞D.巨噬细胞与脾细胞21、在蛋白质电泳中，SDS的主要作用机制是使蛋白质分子按照何种特性进行分离？A．等电点

B．形状

C．分子质量

D．电荷密度22、下列哪种酶常用于PCR反应中的DNA扩增？A．DNA连接酶

B．逆转录酶

C．TaqDNA聚合酶

D．限制性内切酶23、在细胞培养过程中，防止微生物污染最常用的抗生素是？A．青霉素和链霉素

B．庆大霉素和红霉素

C．四环素和氯霉素

D．卡那霉素和万古霉素24、ELISA实验中，用于检测未知抗原的最常用方法是？A．间接法

B．竞争法

C．夹心法

D．直接法25、下列哪种物质是常用的蛋白浓度测定方法——BCA法的关键试剂？A．考马斯亮蓝G-250

B．双缩脲试剂

C．二喹啉甲酸

D．酚试剂26、在重组DNA技术中，常用于连接目的基因与载体DNA的酶是？A.限制性内切酶B.DNA聚合酶C.DNA连接酶D.RNA聚合酶27、在蛋白质电泳中，SDS主要用于测定蛋白质的哪项特性？A.等电点B.三维结构C.分子量D.生物活性28、下列哪种方法最适合用于检测特定DNA序列的存在？A.WesternblotB.ELISAC.SouthernblotD.Northernblot29、在微生物培养中，高压蒸汽灭菌的常用条件是？A.60℃维持1小时B.100℃维持30分钟C.121℃维持15-20分钟D.160℃维持2小时30、下列哪种细胞器是真核细胞中蛋白质糖基化的主要场所？A.线粒体B.核糖体C.高尔基体D.溶酶体二、多项选择题下列各题有多个正确答案，请选出所有正确选项（共15题）31、在蛋白质电泳实验中，影响蛋白质迁移率的主要因素包括哪些？A．蛋白质的分子大小

B．蛋白质的电荷数量

C．电泳缓冲液的pH值

D．电场强度32、下列关于PCR技术的描述，正确的是哪些？A．需要耐高温的DNA聚合酶

B．引物通常是单链DNA片段

C．变性步骤使双链DNA解旋为单链

D．延伸过程在72℃左右进行33、下列哪些属于微生物培养中的无菌操作措施？A．使用前对接种环进行灼烧灭菌

B．在超净工作台内进行接种操作

C．培养基高压蒸汽灭菌后立即倒入平板

D．实验前后用酒精擦拭工作台面34、下列关于单克隆抗体的叙述，正确的是哪些？A．由单一B淋巴细胞克隆产生

B．具有高度特异性和均一性

C．可通过杂交瘤技术制备

D．能识别多个不同抗原表位35、在酶动力学研究中，影响酶促反应速率的因素包括哪些？A．底物浓度

B．酶浓度

C．温度

D．抑制剂的存在36、在重组蛋白药物的生产过程中，常用的宿主细胞系统包括哪些？A.大肠杆菌表达系统B.酵母表达系统C.哺乳动物细胞表达系统D.昆虫细胞表达系统37、下列关于单克隆抗体制备的描述，正确的是哪些？A.杂交瘤技术是制备单克隆抗体的经典方法B.B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞C.HAT培养基用于筛选未融合的亲本细胞D.单克隆抗体具有高度特异性和均一性38、在生物制品质量控制中，常用的理化检定项目包括哪些？A.蛋白质含量测定B.纯度分析（如SDS）C.残余宿主DNA检测D.无菌检查39、以下哪些技术可用于基因克隆中的目的基因获取？A.PCR扩增法B.基因文库筛选C.化学合成法D.Westernblotting40、在疫苗研发中，佐剂的作用机制包括哪些？A.增强抗原的免疫原性B.延长抗原在体内的释放时间C.促进抗原提呈细胞的活化D.直接杀灭病原微生物41、在蛋白质纯化过程中，下列哪些方法主要依据分子大小差异进行分离？A．凝胶过滤层析

B．离子交换层析

C．透析

D．SDS电泳42、下列关于PCR技术的描述，哪些是正确的？A．需要耐高温的DNA聚合酶

B．变性步骤通常在95℃左右进行

C．引物为双链DNA片段

D．扩增产物可通过琼脂糖凝胶电泳检测43、在细胞培养过程中，下列哪些措施有助于防止微生物污染？A．使用超净工作台进行无菌操作

B．在培养基中添加抗生素

C．定期在普通室温下敞口观察细胞状态

D．对培养器皿进行高压蒸汽灭菌44、以下哪些技术可用于检测特定蛋白质的表达水平？A．Westernblot

B．RT-qPCR

C．ELISA

D．流式细胞术45、下列关于单克隆抗体的制备过程，哪些描述是正确的？A．使用抗原免疫小鼠以激活B淋巴细胞

B．骨髓瘤细胞具有无限增殖能力

C．杂交瘤细胞由B细胞与T细胞融合形成

D．可通过HAT培养基筛选杂交瘤细胞三、判断题判断下列说法是否正确（共10题）46、在蛋白质电泳过程中，SDS能使蛋白质变性并带上负电荷，其迁移率主要取决于分子大小。A.正确B.错误47、PCR反应中，退火温度过高会导致引物无法与模板结合，从而降低扩增效率。A.正确B.错误48、革兰氏阳性菌的细胞壁含有较厚的肽聚糖层和外膜结构。A.正确B.错误49、酶的最适pH值是酶的固有特性，不会因底物浓度变化而改变。A.正确B.错误50、在微生物培养中，高压蒸汽灭菌法适用于所有耐热物品的灭菌，包括培养基和金属器械。A.正确B.错误51、在蛋白质电泳过程中，分子量越大的蛋白质在凝胶中迁移速度越快。A.正确B.错误52、PCR反应中，退火温度过高可能导致引物无法与模板DNA结合，从而影响扩增效率。A.正确B.错误53、革兰氏阳性菌的细胞壁含有较厚的肽聚糖层和外膜结构。A.正确B.错误54、酶的最适pH是指酶活性最高时所对应的pH值，不同酶的最适pH可能不同。A.正确B.错误55、在微生物培养中，高压蒸汽灭菌法通常采用121℃、15–20分钟的条件。A.正确B.错误

参考答案及解析1.【参考答案】D【解析】蛋白质在电泳中的迁移速率受分子大小、电荷数量和分子形状共同影响。虽然分子量小或电荷多会加快迁移，但实际迁移行为是三者综合作用的结果。例如，球状蛋白比纤维状蛋白迁移更快。因此，最准确答案为D，强调综合影响。2.【参考答案】C【解析】PCR反应需在高温下进行变性、退火和延伸，因此必须使用耐热的DNA聚合酶。Taq酶来源于水生嗜热菌，能在95℃以上保持活性，是PCR中最常用的酶。其他酶如连接酶、逆转录酶和限制酶均不耐高温，无法胜任PCR全过程。3.【参考答案】B【解析】高压蒸汽灭菌利用高温高压饱和蒸汽杀灭所有微生物，包括芽孢。标准条件为121℃、103.4kPa（约15psi）下维持15-20分钟，可有效灭菌。100℃为常压沸水，无法杀灭芽孢；160℃用于干热灭菌；75℃属巴氏消毒，均不符合彻底灭菌要求。4.【参考答案】D【解析】间接ELISA用于检测样本中的抗体。其原理是将抗原包被在固相载体上，加入待测抗体与之结合，再用酶标二抗识别并显色。该法灵敏度高，广泛用于血清抗体检测。双抗体夹心法用于检测抗原，直接法较少用，竞争法则适用于小分子抗原检测。5.【参考答案】C【解析】质粒是存在于细菌中的小型环状双链DNA，能自主复制，常用于基因工程载体。其携带的基因如抗生素抗性基因有助于筛选，但并非细菌生存所必需。在无选择压力下，细菌可丢失质粒仍正常生长，因此C项错误。6.【参考答案】C【解析】SDS（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）中，SDS是一种阴离子去垢剂，能破坏蛋白质的非共价键，使其变性并结合大量负电荷。由于SDS结合量与蛋白质分子量成正比，电荷密度趋于一致，电泳迁移率主要取决于分子大小，因此按分子质量分离。等电点影响等电聚焦，形状和溶解度在此体系中影响极小。7.【参考答案】C【解析】PCR（聚合酶链式反应）依赖耐热的DNA聚合酶，在高温下仍具活性。TaqDNA聚合酶源自水生嗜热菌，能在PCR变性温度（约95℃）下保持稳定，连续催化DNA链延伸。DNA连接酶用于连接DNA片段，逆转录酶用于RNA反转录，限制性内切酶用于DNA切割，均不参与PCR扩增的核心合成过程。8.【参考答案】A【解析】青霉素抑制细菌细胞壁合成，链霉素抑制蛋白质合成，两者联用可有效防控革兰氏阳性菌和阴性菌污染，是细胞培养中最常见的抗生素组合。其他抗生素虽具抗菌性，但因细胞毒性、稳定性或广谱性不足，较少用于常规细胞培养体系。9.【参考答案】B【解析】蛋白质在280nm处的吸光度主要来自色氨酸和酪氨酸残基，紫外分光光度法操作简便、快速，适用于粗略定量。琼脂糖凝胶电泳主要用于核酸分离；PCR用于DNA扩增；HPLC虽可定量但设备复杂、成本高，常用于纯度分析而非常规浓度测定。10.【参考答案】C【解析】单克隆抗体由杂交瘤细胞产生，该细胞由B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合而成，兼具抗体分泌能力和无限增殖特性。B细胞或浆细胞虽能产生抗体，但无法长期体外培养；T细胞不产生抗体。杂交瘤技术是单克隆抗体制备的核心，确保抗体的高度特异性和均一性。11.【参考答案】C【解析】DNA连接酶能催化两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，实现目的基因与载体的共价连接，是基因工程中构建重组DNA分子的关键酶。限制性内切酶用于切割DNA产生黏性末端或平末端；DNA聚合酶用于DNA复制；逆转录酶用于以RNA为模板合成cDNA。因此正确答案为C。12.【参考答案】C【解析】核糖体是细胞内负责蛋白质合成的细胞器，游离核糖体合成胞内蛋白，附着于内质网的核糖体合成分泌蛋白和膜蛋白。高尔基体参与蛋白质的修饰、分选与运输；线粒体是能量代谢场所；溶酶体含有水解酶，参与降解作用。因此，蛋白质合成的直接场所是核糖体，答案为C。13.【参考答案】A【解析】ELISA（酶联免疫吸附测定）常使用碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶作为标记酶，用于催化底物显色反应，从而检测抗原或抗体的存在。碱性磷酸酶应用广泛，灵敏度高。过氧化氢酶是清除过氧化氢的酶，不用于标记；溶菌酶和淀粉酶分别参与细菌裂解和糖类水解，非免疫检测常用酶。故正确答案为A。14.【参考答案】C【解析】固体培养基因含有琼脂，可形成菌落，便于分离和观察单个微生物菌落，是细菌分离纯化的首选。液体培养基用于扩增菌体，半固体用于观察运动性，选择培养基用于筛选特定微生物。虽然选择培养基也可用于分离，但“常用于”分离纯培养的仍是固体培养基，故答案为C。15.【参考答案】B【解析】PCR退火温度由引物的碱基组成决定，特别是GC含量（G-C间有三个氢键，更稳定）和引物长度，直接影响引物与模板的结合特异性。温度过高导致结合失败，过低则引起非特异性结合。模板长度、酶活性和循环次数影响扩增效率，但不决定退火温度设定。因此，正确答案为B。16.【参考答案】C【解析】SDS（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）中，SDS是一种阴离子去垢剂，能破坏蛋白质的非共价键结构，使其变性并均匀带上负电荷，消除电荷差异。同时，β-巯基乙醇可断裂二硫键，使蛋白质完全解聚。此时，蛋白质在电场中的迁移率主要取决于其分子质量大小，与原有电荷和形状无关。因此，该技术按分子质量进行分离，是测定蛋白质亚基分子量的常用方法。17.【参考答案】C【解析】PCR（聚合酶链式反应）需经历高温变性、退火和延伸三个步骤，其中延伸温度约为72℃，而变性温度可达95℃以上。普通DNA聚合酶在高温下易失活，而TaqDNA聚合酶来源于嗜热菌Thermusaquaticus，具有良好的热稳定性，能在反复高温循环中保持活性，因此被广泛应用于PCR反应。其他酶如DNA连接酶用于连接DNA片段，逆转录酶用于RNA反转录，限制性内切酶用于DNA切割，均不适用于高温延伸过程。18.【参考答案】A【解析】在体外细胞培养中，为防止细菌污染，常在培养基中添加青霉素和链霉素的混合制剂（双抗）。青霉素干扰细菌细胞壁合成，链霉素抑制细菌蛋白质合成，两者对细菌有广谱抑制作用，但对哺乳动物细胞影响较小。而放线菌素D、秋水仙素和嘌呤霉素属于细胞毒性试剂，常用于筛选或抑制细胞增殖，不用于常规防污染。因此，青霉素-链霉素是细胞培养中最常用的抗生素组合。19.【参考答案】B【解析】Westernblot（蛋白质免疫印迹）可特异性检测目标蛋白质的表达水平，通过SDS分离蛋白质，转膜后利用特异性抗体结合目标蛋白，再通过显色或化学发光检测信号，兼具定性和半定量功能。RT-PCR用于检测mRNA水平，反映基因转录情况，而非蛋白表达。琼脂糖凝胶电泳主要用于DNA或RNA分离。ELISA也可检测蛋白质，但通常用于体液中可溶性蛋白的定量，特异性依赖抗体质量。综合来看，Westernblot是实验室最常用的蛋白表达检测方法。20.【参考答案】C【解析】单克隆抗体制备采用杂交瘤技术，将能产生特异性抗体的B细胞（通常来自免疫小鼠的脾脏）与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞。该细胞既保留了B细胞分泌特异性抗体的能力，又具备骨髓瘤细胞的无限增殖特性，可长期稳定生产单一抗体。T细胞不分泌抗体，巨噬细胞与脾细胞融合非常规方法。因此，B细胞与骨髓瘤细胞的融合是制备单克隆抗体的核心步骤。21.【参考答案】C【解析】SDS即十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，SDS是一种阴离子去垢剂，能破坏蛋白质的空间结构并均匀地结合到蛋白质上，使其带负电荷且电荷量与分子量成正比，同时使蛋白质变性成杆状结构。因此，电泳迁移率主要取决于分子质量大小，与原有电荷和形状无关，实现按分子质量分离。该技术广泛用于蛋白质纯度鉴定和分子量测定。22.【参考答案】C【解析】PCR（聚合酶链式反应）需要耐高温的DNA聚合酶，以在反复加热变性过程中保持活性。TaqDNA聚合酶是从水生嗜热菌Thermusaquaticus中分离的耐热酶，能在72℃左右高效催化DNA链的延伸，是PCR技术的核心组分。其他酶如DNA连接酶用于连接DNA片段，逆转录酶用于RNA反转录，限制性内切酶用于DNA切割，均不适用于PCR扩增。23.【参考答案】A【解析】青霉素抑制细菌细胞壁合成，链霉素抑制细菌蛋白质合成，两者联合使用可有效抑制革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性菌，是细胞培养中预防细菌污染的常用组合。其他抗生素虽也有抗菌作用，但因细胞毒性较强或广谱性不足，较少用于常规细胞培养体系。无菌操作仍是根本，抗生素仅为辅助手段。24.【参考答案】C【解析】夹心ELISA适用于检测具有多个抗原表位的较大分子抗原。其原理是利用两种特异性抗体（捕获抗体与检测抗体）分别结合抗原的不同位点，形成“抗体-抗原-抗体”夹心结构，具有高特异性和灵敏度。间接法主要用于检测抗体，直接法灵敏度低，竞争法适用于小分子抗原。因此，检测未知抗原首选夹心法。25.【参考答案】C【解析】BCA法（二喹啉甲酸法）基于蛋白质在碱性条件下将Cu²⁺还原为Cu⁺，后者与BCA（二喹啉甲酸）形成紫色络合物，其吸光度与蛋白浓度成正比。该方法灵敏度高、抗干扰能力强，优于传统的Lowry法和Bradford法。考马斯亮蓝是Bradford法的染料，酚试剂用于Lowry法，双缩脲试剂用于测定肽键，但灵敏度较低。26.【参考答案】C【解析】DNA连接酶是重组DNA技术中的关键工具酶，能够催化两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，实现目的基因与载体的共价连接。限制性内切酶用于切割DNA产生粘性末端或平末端，DNA聚合酶主要用于DNA复制，如PCR扩增，而RNA聚合酶参与转录过程。因此，在构建重组质粒时，DNA连接酶不可或缺。27.【参考答案】C【解析】SDS（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）通过SDS使蛋白质变性并均匀带负电，消除电荷差异，使迁移率主要取决于分子大小。因此可用于估算蛋白质的相对分子质量。等电点通过等电聚焦测定，三维结构需X射线晶体学或NMR，生物活性需功能实验验证。28.【参考答案】C【解析】Southernblot用于检测特定DNA序列，通过凝胶电泳分离DNA，转膜后用标记探针杂交。Westernblot检测蛋白质，ELISA用于抗原或抗体检测，Northernblot用于RNA分析。因此，检测DNA序列应选Southernblot，具有高特异性和灵敏度。29.【参考答案】C【解析】高压蒸汽灭菌法利用高温高压饱和蒸汽杀灭所有微生物包括芽孢，标准条件为121℃、103kPa（约15psi）下维持15-20分钟。60℃为巴氏消毒温度，100℃无法杀灭芽孢，160℃干热灭菌用于耐高温但不耐湿物品。因此液体培养基等常用高压蒸汽在121℃处理。30.【参考答案】C【解析】蛋白质的糖基化修饰主要在内质网起始，随后在高尔基体中进一步加工和修饰，如寡糖链的剪切与添加，是分泌蛋白和膜蛋白成熟的关键步骤。线粒体参与能量代谢，核糖体合成多肽链，溶酶体含水解酶用于降解。因此，高尔基体是糖基化修饰的主要完成场所。31.【参考答案】ABCD【解析】蛋白质在电泳中的迁移率受多种因素影响：分子量越小，迁移越快（A正确）；所带净电荷越多，受电场力作用越强，迁移越快（B正确）；缓冲液pH影响蛋白质的解离状态，从而改变其电荷量（C正确）；电场强度越高，带电粒子迁移速度越快（D正确）。因此，四项均为影响因素。32.【参考答案】ABCD【解析】PCR扩增需使用TaqDNA聚合酶等耐高温酶（A正确）；引物为人工合成的单链DNA，用于特异性结合模板（B正确）；变性通过高温（约95℃）使双链DNA解离（C正确）；延伸时Taq酶在72℃附近活性最高，合成新链（D正确）。四项均符合PCR基本原理。33.【参考答案】ABD【解析】接种环需火焰灭菌（A正确）；超净台提供无菌环境（B正确）；酒精擦拭可减少污染（D正确）；但培养基灭菌后需冷却至约50℃再倒平板，防止冷凝水过多或烫伤（C错误）。故选ABD。34.【参考答案】ABC【解析】单克隆抗体由单一杂交瘤细胞克隆产生，来源单一（A正确）；只针对特定抗原表位，特异性强、成分均一（B正确）；常用B细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交瘤技术制备（C正确）；但仅识别单一抗原表位，D项错误。因此选ABC。35.【参考答案】ABCD【解析】底物浓度影响反应速率，符合米氏方程（A正确）；酶浓度越高，反应速率越快（B正确）；温度通过影响酶活性改变反应速率，过高则失活（C正确）；抑制剂可降低酶活性（D正确）。四项均为关键影响因素，故全选。36.【参考答案】ABCD【解析】重组蛋白药物生产中，大肠杆菌系统成本低、周期短，适用于结构简单的蛋白；酵母系统具备一定的翻译后修饰能力，适合中等复杂蛋白；哺乳动物细胞（如CHO细胞）能完成复杂修饰，常用于抗体类药物；昆虫细胞结合杆状病毒表达系统，适用于需要部分修饰的复杂蛋白。四种系统各有优势，广泛应用于生物制药领域。37.【参考答案】ABD【解析】单克隆抗体制备采用B细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交瘤技术，HAT培养基用于筛选融合成功的杂交瘤细胞，而非未融合细胞（未融合的B细胞无法增殖，骨髓瘤细胞因缺乏HGPRT被清除）。杂交瘤细胞可无限增殖并分泌特异性抗体，确保抗体的高度特异性和均一性，广泛应用于诊断与治疗。38.【参考答案】ABC【解析】理化检定包括蛋白质含量（如BCA法）、纯度（SDS、HPLC）、分子量、等电点及残余杂质（如宿主DNA、蛋白）检测。无菌检查属于生物学检定范畴，用于检测微生物污染。理化检定确保产品结构正确、纯度达标，是生物制品质量控制的关键环节。39.【参考答案】ABC【解析】PCR可从模板DNA中扩增特定基因片段；基因文库（基因组或cDNA文库）可用于筛选未知序列的目的基因；化学合成法适用于已知序列的短基因合成。Westernblotting用于蛋白质检测，不能用于基因获取，属于蛋白水平分析技术，不参与克隆的初始基因获取步骤。40.【参考答案】ABC【解析】佐剂通过增强免疫应答提高疫苗效果：可形成抗原储存库，延缓释放；激活树突状细胞等抗原提呈细胞，促进T/B细胞应答；刺激免疫信号通路（如TLR），增强抗原免疫原性。佐剂本身无直接杀菌作用，不等同于抗生素或消毒剂，其核心功能是免疫增强。41.【参考答案】A、C、D【解析】凝胶过滤层析利用多孔凝胶颗粒，小分子进入孔内、大分子先流出，实现按分子大小分离；透析通过半透膜使小分子溶质扩散到膜外，保留大分子蛋白质，也基于分子大小；SDS中蛋白质在电场中按分子量大小在凝胶中迁移速率不同而分离。离子交换层析则依据蛋白质表面电荷性质，与分子大小无直接关系，故不选B。42.【参考答案】A、B、D【解析】PCR依赖耐高温的TaqDNA聚合酶，避免每次循环重新加酶；变性通过高温（约95℃）使双链DNA解链；引物是人工合成的单链寡核苷酸，用于特异性结合模板两端，故C错误；扩增后的DNA片段常用琼脂糖凝胶电泳按大小分离并检测，D正确。43.【参考答案】A、B、D【解析】超净工作台提供无菌操作环境，有效减少空气微生物污染；抗生素可抑制细菌生长，但不能替代无菌操作；敞口操作会引入微生物，且室温不利于细胞维持，C错误；所有接触培养物的器皿必须经高压灭菌，确保无菌，D正确。44.【参考答案】A、C、D【解析】Westernblot通过特异性抗体检测目标蛋白的表达量和分子量；ELISA定量分析溶液中特定蛋白浓度；流式细胞术可检测细胞表面或内部蛋白表达水平，并实现单细胞分析。RT-qPCR用于检测mRNA水平，反映基因转录活性，而非直接测定蛋白质表达，故B不选。45.【参考答案】A、B、D【解析】单克隆抗体制备中，小鼠经抗原免疫后，脾脏B细胞产生特异性抗体；骨髓瘤细胞可无限分裂，提供永生性；B细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，而非T细胞，故C错误；HAT培养基可选择性杀死未融合的骨髓瘤细胞，仅杂交瘤细胞存活，实现有效筛选。46.【参考答案】A【解析】SDS（十二烷基硫酸钠）是一种阴离子去垢剂，可破坏蛋白质的非共价键结构，使其变性并均匀包裹负电荷，消除电荷差异对迁移的影响。此时，蛋白质在凝胶中的迁移速率仅与其分子量大小有关，分子越小迁移越快。该原理是SDS电泳的基础，广泛应用于蛋白质分子量测定。47.【参考答案】A【解析】PCR退火阶段依赖引物与模板DNA的特异性结合。若退火温度过高，引物与模板的互补区域难以形成稳定氢键，导致结合失败，扩增产物减少甚至无产物。适宜退火温度通常比引物Tm值低3-5℃，需通过实验优化，以平衡特异性与扩增效率。48.【参考答案】B【解析】革兰氏阳性菌细胞壁由厚肽聚糖层和磷壁酸组成，但无外膜；而革兰氏阴性菌才具有薄肽聚糖层和外膜结构。外膜含脂多糖（LPS），是内毒素的主要来源。此差异是革兰染色反应不同的主要原因，也是抗生素靶向设计的重要依据。49.【参考答案】A【解析】酶的最适pH由其空间结构和活性中心氨基酸残基的电离状态决定，属于酶本身的理化特性。虽然底物浓度影响反应速率，但不改变酶对pH的依赖性。不同酶最适pH不同，如胃蛋白酶约为1.8，胰蛋白酶约为8.0，偏离最适pH会导致酶活性下降甚至失活。50.【参考答案】A【解析】高压蒸汽灭菌（通常121℃、15-20分钟）利用高温饱和蒸汽杀死所有微生物及孢子，适用于耐高温高湿的物品，如玻璃器皿、金属器械、生理盐水和多数培养基。但对热敏感物质（如某些抗生素、血清）需采用过滤除菌等替代方法，避免成分破坏。51.【参考答案】B【解析】在SDS电泳中，蛋白质的迁移速率主要与其分子量成反比。SDS使蛋白质带负电且形状接近杆状，分子量越小的蛋白质越容易通过凝胶孔隙，迁移越快；分子量大的则迁移较慢。因此该说法错误。52.【参考答案】A【解析】退火温度决定引物与模板DNA的特异性结合。温度过高会使引物无法稳定结合模板，导致扩增失败或产量下降；过低则可能引发非特异性结合。通常退火温度设定为引物Tm值减去3–5℃，需精确优化。53.【参考答案】B【解析】革兰氏阳性菌细胞壁肽聚糖层厚，但无外膜；外膜是革兰氏阴性菌的特征结构，位于肽聚糖层之外。阳性菌含有大量磷壁酸，而阴性菌则有脂多糖。因此“含有外膜”说法错误。54.【参考答案】A【解析】酶的活性受pH影响显著，最适pH是其催化效率最高的环境pH。例如胃蛋白酶最适pH约为2，胰蛋白酶约为8。pH偏离最适值会影响酶空间结构或电荷分布，导致活性下降甚至失活。55.【参考答案】A【解析】高压蒸汽灭菌利用高温饱和蒸汽杀灭所有微生物，包括芽孢。121℃下维持15–20分钟是最常用且有效的条件，可确保彻底灭菌。此法适用于耐热物品如培养基、玻璃器皿等。

2025年中国生物兰州生物技术开发有限公司招聘笔试历年常考点试题专练附带答案详解（第2套）一、单项选择题下列各题只有一个正确答案，请选出最恰当的选项（共30题）1、在蛋白质电泳中，SDS的主要作用机制是什么？A.依据蛋白质的等电点进行分离B.依据蛋白质的分子大小进行分离C.依据蛋白质的电荷分布进行分离D.依据蛋白质的疏水性进行分离2、下列哪种酶常用于PCR反应中的DNA合成？A.DNA连接酶B.逆转录酶C.TaqDNA聚合酶D.限制性内切酶3、在细胞培养中，防止微生物污染最常用的抗生素是？A.青霉素和链霉素B.红霉素和克林霉素C.四环素和万古霉素D.氯霉素和庆大霉素4、ELISA实验中，常用的固相载体是？A.琼脂糖凝胶B.聚苯乙烯微孔板C.硝酸纤维素膜D.玻璃载片5、下列哪种方法最适合用于测定DNA浓度？A.Lowry法B.考马斯亮蓝法C.紫外分光光度法D.BCA法6、在重组DNA技术中，用于连接DNA片段的酶是：A.DNA聚合酶B.限制性内切酶C.DNA连接酶D.RNA聚合酶7、下列哪种细胞器是蛋白质合成的主要场所？A.高尔基体B.线粒体C.核糖体D.溶酶体8、在ELISA实验中，常用的酶标记物是：A.过氧化氢酶B.碱性磷酸酶C.淀粉酶D.脂肪酶9、下列哪种培养基常用于分离和培养真菌？A.LB培养基B.SS培养基C.沙保弱培养基D.血琼脂培养基10、PCR反应中，退火温度主要取决于：A.模板DNA长度B.引物的GC含量和长度C.Taq酶活性D.循环次数11、在重组DNA技术中，最常用的载体之一是质粒。下列关于质粒的描述，错误的是：A．质粒是双链环状DNA分子

B．质粒能独立于染色体外进行自我复制

C．质粒通常携带抗生素抗性基因作为筛选标记

D．质粒只能在原核细胞中存在和表达12、在蛋白质电泳中，SDS主要用于测定蛋白质的什么性质？A．等电点

B．空间构象

C．相对分子质量

D．电荷分布13、下列哪种酶常用于实时荧光定量PCR（qPCR）中的扩增反应？A．逆转录酶

B．DNA连接酶

C．热稳定DNA聚合酶

D．限制性内切酶14、在单克隆抗体制备过程中，哪一种细胞融合技术最为关键？A．B细胞与肿瘤细胞融合

B．T细胞与骨髓瘤细胞融合

C．B细胞与骨髓瘤细胞融合

D．巨噬细胞与脾细胞融合15、下列关于ELISA实验的描述，正确的是：A．ELISA只能检测抗原，不能检测抗体

B．实验中常用的酶标记物是辣根过氧化物酶（HRP）

C．ELISA结果必须通过荧光显微镜观察

D．该技术不适用于血清样本检测16、在蛋白质电泳中，SDS主要用于分离蛋白质的依据是下列哪一项？A．蛋白质的等电点

B．蛋白质的电荷密度

C．蛋白质的分子大小

D．蛋白质的空间构象17、下列哪种酶在PCR扩增过程中起关键作用？A．DNA连接酶

B．逆转录酶

C．TaqDNA聚合酶

D．限制性内切酶18、在微生物培养中，高压蒸汽灭菌的标准条件通常是？A．60℃，30分钟

B．100℃，20分钟

C．121℃，15-20分钟

D．160℃，2小时19、下列哪种方法最适合用于检测特定抗原与抗体的结合反应？A．PCR技术

B．WesternBlot

C．琼脂糖凝胶电泳

D．质谱分析20、在细胞培养过程中，防止细菌污染最常用的抗生素是？A．链霉素和青霉素

B．庆大霉素和利福平

C．红霉素和四环素

D．卡那霉素和万古霉素21、在蛋白质电泳中，SDS的主要作用机制是使蛋白质分子按照何种特性进行分离？A．等电点

B．形状

C．分子质量

D．电荷数量22、下列哪种酶常用于PCR反应中以耐受高温环境？A．DNA连接酶

B．限制性内切酶

C．TaqDNA聚合酶

D．逆转录酶23、在细胞培养过程中，防止微生物污染最常用的抗生素是？A．青霉素和链霉素

B．庆大霉素和红霉素

C．四环素和卡那霉素

D．氯霉素和万古霉素24、ELISA实验中，用于检测未知抗原最常用的方法是？A．间接法

B．竞争法

C．双抗体夹心法

D．直接法25、下列哪项不是影响酶促反应速率的因素？A．底物浓度

B．酶浓度

C．pH值

D．光照强度26、在蛋白质电泳中，SDS的主要作用原理是什么？A.利用蛋白质的等电点差异进行分离B.依据蛋白质分子大小在电场中迁移率不同进行分离C.通过蛋白质与特定配体的亲和性分离D.根据蛋白质的疏水性差异进行分离27、下列哪种酶常用于PCR反应中扩增DNA片段？A.DNA连接酶B.逆转录酶C.TaqDNA聚合酶D.限制性内切酶28、在细胞培养过程中，防止微生物污染最常用的抗生素是？A.青霉素和链霉素B.红霉素和万古霉素C.氯霉素和四环素D.庆大霉素和利福平29、以下关于单克隆抗体的叙述，正确的是？A.由多个B细胞克隆共同产生B.能识别多种不同抗原表位C.具有高度特异性和均一性D.通常通过多肽直接免疫动物获得30、在ELISA实验中，辣根过氧化物酶（HRP）常作为标记酶，其常用底物是？A.吖啶酯B.AMPPDC.鲁米诺D.TMB（四甲基联苯胺）二、多项选择题下列各题有多个正确答案，请选出所有正确选项（共15题）31、在重组蛋白表达系统中，原核表达系统常以大肠杆菌为主，其优点包括哪些？A.表达水平高，成本低B.可进行复杂的翻译后修饰C.遗传背景清晰，操作简便D.适合表达真核来源的膜蛋白32、以下关于PCR技术的描述，正确的是哪些？A.TaqDNA聚合酶最适作用温度约为72℃B.引物长度通常为15–30个碱基C.变性步骤一般在55℃左右进行D.延伸时间取决于模板长度33、在蛋白质纯化过程中，常用的层析技术包括哪些？A.凝胶过滤层析B.离子交换层析C.亲和层析D.聚丙烯酰胺凝胶电泳34、关于单克隆抗体的制备，以下说法正确的是哪些？A.由单一B细胞克隆产生B.具有高度特异性C.通过杂交瘤技术获得D.可识别多个抗原表位35、微生物培养中，影响发酵过程的主要因素包括哪些？A.温度B.pH值C.溶解氧浓度D.培养基透明度36、在蛋白质纯化过程中，以下哪些层析技术是基于分子表面电荷差异进行分离的？A.离子交换层析B.凝胶过滤层析C.疏水相互作用层析D.亲和层析E.反相层析37、以下关于PCR技术的描述，哪些是正确的？A.需要耐热的DNA聚合酶B.引物为双链DNA片段C.变性步骤通常在94–98℃进行D.可用于基因克隆和突变检测E.扩增产物量呈线性增长38、下列哪些因素会影响酶促反应速率？A.底物浓度B.酶浓度C.pH值D.抑制剂存在E.反应容器材质39、在细胞培养过程中，以下哪些操作有助于防止微生物污染？A.使用超净工作台进行操作B.添加抗生素至培养基C.定期在培养基中加入血清D.对培养器具进行高压灭菌E.频繁打开培养瓶观察细胞状态40、下列关于单克隆抗体的制备过程，哪些步骤是必需的？A.免疫动物以获得B淋巴细胞B.将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合C.在HAT培养基中筛选杂交瘤细胞D.进行有限稀释克隆化E.使用PCR鉴定抗体基因序列41、在基因工程中，常用的载体应具备的基本特征包括哪些？A.具有多个限制性内切酶识别位点B.能够在宿主细胞中自主复制C.携带易于筛选的标记基因D.具有较高的分子量以增强稳定性42、下列关于单克隆抗体的制备过程的描述，正确的是？A.使用B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合B.杂交瘤细胞具有无限增殖和分泌特异性抗体的能力C.筛选过程中常用HAT培养基选择融合成功的细胞D.单克隆抗体可由普通血清直接提取获得43、在蛋白质电泳中，SDS的主要作用和特点包括？A.依据蛋白质等电点进行分离B.使蛋白质带负电荷并按分子量大小分离C.加入SDS破坏蛋白质空间结构D.可用于测定蛋白质纯度和分子量44、下列哪些因素会影响PCR扩增的特异性和效率？A.引物设计的特异性与长度B.退火温度的设置C.模板DNA的纯度和浓度D.TaqDNA聚合酶的来源45、在细胞培养过程中，防止微生物污染的措施包括？A.使用超净工作台进行无菌操作B.培养基中添加抗生素C.定期对培养箱进行清洁和消毒D.提高培养液中血清浓度三、判断题判断下列说法是否正确（共10题）46、在蛋白质电泳过程中，分子量越大的蛋白质在凝胶中迁移速度越快。A.正确B.错误47、PCR反应中，退火温度过高可能导致引物无法与模板DNA结合，从而降低扩增效率。A.正确B.错误48、革兰氏阳性菌的细胞壁含有较厚的肽聚糖层和外膜结构。A.正确B.错误49、酶促反应的最适pH值是酶的固有特性，不会因底物浓度变化而改变。A.正确B.错误50、在微生物培养中，高压蒸汽灭菌法适用于所有热敏感性物质的灭菌处理。A.正确B.错误51、在PCR反应中，退火温度过高可能导致引物无法与模板DNA结合，从而影响扩增效率。A.正确B.错误52、单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的，具有高度特异性和均一性。A.正确B.错误53、在蛋白质电泳中，SDS主要根据蛋白质的等电点进行分离。A.正确B.错误54、限制性内切酶能够识别双链DNA中的特定序列，并在识别位点内或附近进行切割。A.正确B.错误55、细胞培养过程中，抗生素的常规添加可有效防止所有类型的污染。A.正确B.错误

参考答案及解析1.【参考答案】B【解析】SDS（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）通过SDS使蛋白质变性并均匀带上负电荷，消除电荷差异，使迁移率仅与分子量相关。蛋白质在凝胶中按分子大小分离，小分子迁移快，大分子迁移慢，因此可用于测定蛋白质分子量。该方法广泛应用于蛋白质纯度和分子量分析。2.【参考答案】C【解析】PCR（聚合酶链式反应）依赖耐热的DNA聚合酶在高温下合成新DNA链。TaqDNA聚合酶来源于嗜热菌，能在PCR变性高温（约95℃）下保持活性，是PCR最常用的酶。其他酶如DNA连接酶用于连接DNA片段，限制酶用于切割DNA，逆转录酶用于RNA反转录，均不适用于常规PCR扩增。3.【参考答案】A【解析】青霉素抑制细菌细胞壁合成，链霉素抑制蛋白质合成，两者联合使用可有效抑制革兰氏阳性和阴性细菌，是细胞培养中常用的双抗组合。其他抗生素虽具抗菌活性，但因细胞毒性或谱系限制，较少用于常规细胞培养。无菌操作仍是防止污染的核心，抗生素仅为辅助手段。4.【参考答案】B【解析】ELISA（酶联免疫吸附试验）通常使用聚苯乙烯微孔板作为固相载体，因其表面可非特异性吸附蛋白质（如抗原或抗体），结构稳定，适合高通量检测。硝酸纤维素膜多用于Westernblot，琼脂糖用于电泳，玻璃载片用于免疫荧光，均不适用于标准ELISA操作流程。5.【参考答案】C【解析】紫外分光光度法通过测定DNA在260nm处的吸光度，利用换算公式（1OD260≈50μg/mL双链DNA）快速计算浓度。Lowry、BCA和考马斯亮蓝法用于蛋白质定量，不适用于DNA。该方法简便快捷，但需注意RNA或蛋白质污染可能干扰结果，需结合A260/A280比值评估纯度。6.【参考答案】C【解析】DNA连接酶在重组DNA技术中起关键作用，能催化两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，从而实现DNA的连接。DNA聚合酶主要用于DNA复制过程中合成新链；限制性内切酶用于切割特定序列的DNA，产生黏性末端或平末端；RNA聚合酶参与转录过程，合成RNA。因此，正确连接DNA片段的酶是DNA连接酶。7.【参考答案】C【解析】核糖体是细胞内蛋白质合成的直接场所，存在于原核和真核细胞中，可游离于细胞质或附着于内质网上。高尔基体负责蛋白质的加工、分拣和分泌；线粒体是细胞能量代谢中心，主要进行有氧呼吸；溶酶体含有水解酶，参与细胞内物质降解。因此，蛋白质合成的起始与延伸均在核糖体上完成。8.【参考答案】B【解析】ELISA（酶联免疫吸附测定）常使用碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶作为标记酶，用于与抗体结合后催化底物显色。碱性磷酸酶在特定pH下催化底物产生颜色变化，便于定量检测抗原或抗体。过氧化氢酶、淀粉酶和脂肪酶不常用于免疫检测标记，因其缺乏特异性或信号放大能力弱。因此，碱性磷酸酶是常用且有效的标记酶之一。9.【参考答案】C【解析】沙保弱培养基（SabouraudAgar）是一种选择性培养基，含有较低pH（约5.6）和较高葡萄糖浓度，有利于真菌生长而抑制多数细菌。LB培养基用于细菌培养；SS培养基用于肠道致病菌分离；血琼脂培养基用于需氧和厌氧菌的培养。因此，分离真菌首选沙保弱培养基。10.【参考答案】B【解析】PCR退火温度由引物的碱基序列决定，尤其与GC含量和长度密切相关。GC碱基对形成三个氢键，比AT更稳定，因此GC含量越高，退火温度越高。通常退火温度设定为引物Tm值减去5℃左右。模板长度、Taq酶活性和循环次数影响扩增效率，但不决定退火温度设定。合理设计引物并计算Tm值是确保PCR特异性的关键。11.【参考答案】D【解析】质粒是广泛存在于原核和部分真核细胞（如酵母）中的小型双链环状DNA分子，可在宿主细胞内自主复制。常见的克隆质粒携带抗生素抗性基因，便于后续筛选阳性克隆。虽然质粒在大肠杆菌等原核系统中应用广泛，但经过改造的穿梭质粒可在原核和真核细胞中复制与表达，因此D项“只能在原核细胞中存在和表达”说法错误，故选D。12.【参考答案】C【解析】SDS（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）通过SDS使蛋白质变性并均匀带上负电荷，消除电荷差异对迁移率的影响，此时蛋白质的迁移速率主要取决于其分子大小。因此该方法可用于估算蛋白质的相对分子质量。等电点测定通常使用等电聚焦电泳，空间构象分析则需非变性电泳或圆二色谱等技术，故正确答案为C。13.【参考答案】C【解析】实时荧光定量PCR依赖于在高温下仍保持活性的DNA聚合酶，如Taq酶，以完成反复的变性、退火和延伸循环。该酶具备热稳定性，是PCR扩增的核心组分。逆转录酶用于将RNA反转录为cDNA，通常在RT-qPCR的第一步使用；DNA连接酶用于连接DNA片段；限制性内切酶用于DNA切割，均不参与PCR扩增过程。因此正确答案为C。14.【参考答案】C【解析】单克隆抗体制备采用杂交瘤技术，其核心是将能产生特异性抗体的B细胞（通常来自免疫小鼠脾脏）与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞。这种细胞既可持续增殖，又能分泌单一抗体。T细胞不分泌抗体，巨噬细胞和脾细胞融合无实际意义。因此，正确答案为C。15.【参考答案】B【解析】ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种高灵敏度的免疫检测技术，可用于检测抗原或抗体。实验中常用辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）标记抗体或抗原，通过底物显色反应进行定量分析，无需荧光显微镜。ELISA广泛应用于血清、血浆等生物样本检测，具有高通量和操作简便的优点。因此，只有B项描述准确，答案为B。16.【参考答案】C【解析】SDS（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）通过SDS使蛋白质变性并均匀带上负电荷，消除电荷差异的影响，此时蛋白质在凝胶中的迁移速率主要取决于其分子量大小，分子越小迁移越快。因此，该技术依据分子大小进行分离，C正确。等电点和电荷密度在等电聚焦或天然电泳中起主导作用，空间构象在变性条件下被破坏，不参与分离。17.【参考答案】C【解析】PCR（聚合酶链式反应）依赖耐高温的DNA聚合酶，在高温下合成新DNA链。TaqDNA聚合酶来源于嗜热菌，能耐受PCR变性步骤的高温（约95℃），在退火和延伸阶段催化dNTP聚合，是PCR的核心酶。DNA连接酶用于连接DNA片段，逆转录酶用于RNA反转录，限制酶用于DNA切割，均不参与常规PCR扩增过程。18.【参考答案】C【解析】高压蒸汽灭菌利用高温高压饱和蒸汽杀灭所有微生物，包括芽孢。标准条件为121℃、103.4kPa（15psi）下维持15-20分钟，可有效灭菌。60℃为巴氏消毒温度，不能彻底灭菌；100℃为常压沸水，无法杀灭芽孢；160℃干热灭菌用于耐高温但不耐湿的物品，如玻璃器皿，不适用于常规培养基灭菌。19.【参考答案】B【解析】WesternBlot（蛋白质免疫印迹）结合了SDS的分离能力和抗原-抗体特异性结合的检测原理，可用于检测特定蛋白质的存在。其流程包括蛋白分离、转膜、封闭、一抗结合、二抗标记及显色，特异性强。PCR用于核酸扩增，琼脂糖凝胶用于核酸分离，质谱用于分子量测定和结构分析，均不直接检测抗原抗体反应。20.【参考答案】A【解析】青霉素抑制细菌细胞壁合成，链霉素抑制蛋白质合成，两者联合使用可广谱抑制革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性菌，是细胞培养中最常用的抗生素组合。其他选项中抗生素虽具抗菌活性，但因毒性大、干扰细胞代谢或易产生耐药性，较少用于常规细胞培养。无菌操作仍是防污染的核心，抗生素为辅助手段。21.【参考答案】C【解析】SDS（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）通过SDS与蛋白质结合，使蛋白质带上均匀的负电荷并变性为线性结构，从而消除电荷和形状差异，仅依据分子质量大小进行分离。分子量较小的蛋白质迁移较快，反之则较慢，因此分离基础是分子质量。该技术广泛用于蛋白质纯度鉴定和分子量测定。22.【参考答案】C【解析】PCR（聚合酶链式反应）需经历高温变性步骤，因此必须使用耐热的DNA聚合酶。TaqDNA聚合酶来源于嗜热菌Thermusaquaticus，可在95℃以上保持活性，适用于反复加热冷却的循环过程。其他酶如DNA连接酶用于连接DNA片段，限制酶用于切割，逆转录酶用于RNA反转录，均不适用于常规PCR扩增。23.【参考答案】A【解析】青霉素抑制细菌细胞壁合成，链霉素抑制蛋白质合成，二者联合使用可有效抑制革兰氏阳性菌和阴性菌，是细胞培养中最常见的抗生素组合。其他抗生素虽具抗菌活性，但因细胞毒性或谱系局限，较少用于常规细胞培养。无菌操作仍是核心，抗生素仅作为辅助手段。24.【参考答案】C【解析】双抗体夹心法适用于检测大分子抗原，先用包被抗体固定抗原，再用酶标检测抗体识别，形成“抗体-抗原-抗体”复合物，特异性强、灵敏度高。间接法用于检测抗体，直接法灵敏度低，竞争法适用于小分子抗原。因此，检测未知抗原首选双抗体夹心法，广泛应用于临床和科研。25.【参考答案】D【解析】酶促反应速率受多种因素影响，包括底物浓度（符合米氏方程）、酶浓度（正比关系）、pH值（影响酶活性中心构象）、温度和抑制剂等。光照强度主要影响光合作用相关酶，对大多数非光依赖性酶无直接影响，故不属于普遍影响因素。在常规生化反应中，光照不作为关键调控参数。26.【参考答案】B【解析】SDS（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用的蛋白质分离技术。SDS是一种阴离子去污剂，能破坏蛋白质的非共价结构并使其变性，同时与蛋白质结合赋予其大量负电荷，使电荷差异对迁移率影响最小化。此时，蛋白质在凝胶中的迁移速率主要取决于其分子量大小，分子越小迁移越快。因此，该方法依据分子大小实现高效分离，广泛用于蛋白质纯度鉴定和分子量测定。27.【参考答案】C【解析】PCR（聚合酶链式反应）是一种体外扩增特定DNA片段的技术，其核心酶是TaqDNA聚合酶。该酶来源于嗜热细菌Thermusaquaticus，具有耐高温特性，能在PCR循环中的高温变性步骤后仍保持活性。它以单链DNA为模板，在引物引导下合成新的互补链，实现DNA的指数级扩增。其他酶如DNA连接酶用于连接DNA片段，限制酶用于切割DNA，逆转录酶用于RNA反转录，均不直接参与常规PCR扩增。28.【参考答案】A【解析】在哺乳动物细胞培养中，为防止细菌污染，常在培养基中添加青霉素和链霉素双抗溶液。青霉素作用于细菌细胞壁合成，对革兰阳性菌有效；链霉素抑制细菌蛋白质合成，主要针对革兰阴性菌。两者联用可广谱抑制常见污染菌，且在常规浓度下对哺乳动物细胞毒性较小。其他抗生素虽也有抗菌作用，但因细胞毒性或干扰实验结果较少用于常规细胞培养。无菌操作仍是防控污染的根本措施。29.【参考答案】C【解析】单克隆抗体是由单一杂交瘤细胞克隆产生的抗体，来源于一个B细胞与骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤。因其源自单一克隆，故具有高度特异性（仅识别抗原单一表位）和结构均一性，是免疫检测、靶向治疗的重要工具。多克隆抗体才是由多个B细胞克隆产生，识别多个表位。单克隆抗体制备需通过抗原免疫动物、细胞融合、筛选克隆等步骤，并非直接由多肽免疫获得，但多肽可作为抗原使用。30.【参考答案】D【解析】ELISA（酶联免疫吸附测定）中，HRP是最常用的标记酶之一，其催化底物产生颜色反应，便于检测。TMB（四甲基联苯胺）是HRP的常用显色底物，反应后呈蓝色，加入终止液变为黄色，可在450nm波长测定吸光度。该反应灵敏、稳定，适用于常规ELISA检测。吖啶酯和AMPPD多用于化学发光检测，鲁米诺也用于发光体系，但非ELISA比色法常规选择。TMB因其安全性和显色效果成为主流底物。31.【参考答案】A、C【解析】大肠杆菌表达系统具有表达效率高、培养成本低、遗传操作成熟等优点，广泛用于重组蛋白的快速生产。但其缺乏真核细胞的翻译后修饰能力（如糖基化），且对复杂结构蛋白（如需正确折叠的膜蛋白）表达效果较差，易形成包涵体。因此B、D错误。A、C为该系统的核心优势。32.【参考答案】A、B、D【解析】PCR变性通常在94–95℃进行，使DNA双链解离；退火温度约55–65℃，与引物Tm值相关；延伸在72℃由Taq酶催化。引物长度15–30bp可保证特异性与稳定性。延伸时间按1kb/min估算。故C错误，其余正确。33.【参考答案】A、B、C【解析】凝胶过滤依据分子大小分离，离子交换利用电荷差异，亲和层析基于特异性结合（如His标签与镍柱），均为层析技术。聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）是检测或分离手段，不属于层析范畴，故D不选。34.【参考答案】A、B、C【解析】单克隆抗体由单一杂交瘤细胞克隆分泌，识别同一抗原表位，特异性强。杂交瘤技术融合B细胞与骨髓瘤细胞，实现无限增殖与抗体分泌。多克隆抗体才识别多个表位，故D错误。35.【参考答案】A、B、C【解析】温度影响酶活性，pH影响细胞膜稳定性与代谢途径，溶解氧对好氧菌至关重要。三者均为关键控制参数。培养基透明度非直接控制因素，不影响代谢本质，仅可能干扰光照相关培养，故D不选。36.【参考答案】A【解析】离子交换层析利用蛋白质表面所带电荷不同，在带相反电荷的