DB15∕T 2037-2020 饲料中色氨酸的测定 微波水解-氨基酸自动分析仪法

ICS65.120

CCSB46

DB15

内蒙古自治区地方标准

DB15/T2037—2020

饲料中色氨酸的测定

微波水解-氨基酸自动分析仪法

Determinationoftryptophaninfeeds

microwavehydorolysis-aminoacidautomaticanalyzermethod

2020-11-30发布2020-12-30实施

内蒙古自治区市场监督管理局发布

DB15/T2037—2020

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起

草。

本文件由内蒙古自治区农牧业科学院提出。

本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC19）归口。

本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院。

本文件主要起草人：宋洁、姚一萍、王丽芳、史培、冯小慧、王雪娇、张三粉、狄彩霞、景宇鹏、

羿静、钟华晨、郭晨阳、云伏雨。

I

DB15/T2037—2020

饲料中色氨酸的测定微波水解-氨基酸自动分析仪法

1范围

本文件规定了饲料中色氨酸含量测定的微波水解-氨基酸自动分析仪法。

本文件适用于饲料原料、配合饲料、浓缩饲料和精料补充料中色氨酸的测定。

本方法定量限：0.05%（质量分数）。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6433饲料中粗脂肪的测定

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T14699.1饲料采样

GB/T20195动物饲料试样的制备

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

饲料中色氨酸经微波碱水解后，从蛋白链中释放出来，经氨基酸自动分析仪测定色氨酸含量。

5试剂和材料

5.1如无特别说明，本文件所用试剂均为分析纯试剂,水为符合GB/T6682规定的一级水。

5.2氢氧化钠。

5.3盐酸：浓度≥36%，优级纯。

5.4柠檬酸。

5.5柠檬酸钠。

5.6硼酸。

5.7乙醇。

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5.8氢氧化钠溶液（500g/L）：称取50g氢氧化钠，溶于50mL水中，冷却至室温后，定容至100mL，

混匀。

5.9氢氧化钠溶液（0.1mol/L）：称取0.40g氢氧化钠，定容至100mL水中，混匀。

5.10氢氧化钠溶液（5mol/L）：称取200g氢氧化钠，溶于200mL水中，冷却至室温后，定容至

1000mL，混匀。

5.11盐酸溶液（6mol/L）：取500mL盐酸加水定容至1000mL，混匀。

5.12柠檬酸钠缓冲溶液（0.12mol/LNa+，pH=3.45）：分别称取11.8g柠檬酸钠和6.0g柠檬酸，

溶于500mL水中，加入乙醇65mL，浓盐酸5.6mL，用水定容至1000mL，混匀，用6mol/L盐酸溶

液（5.10）或500g/L氢氧化钠溶液（5.7）调节pH至3.45，加辛酸0.1mL。

5.13柠檬酸钠缓冲溶液（0.2mol/LNa+，pH=10.85）：称取19.6g柠檬酸钠，3.1g氢氧化钠，5.0

g硼酸，溶于500mL水中，用水定容至1000mL，混匀，用6mol/L盐酸溶液或500g/L氢氧化钠溶

液调节pH至10.85，加入辛酸0.1mL。

5.14L-色氨酸标准品：纯度不小于99%。

5.15L-色氨酸标准储备液（1.0μmol/mL）：精确称取20.4mg色氨酸标准品，加适量水和数滴0.1

mol/L的氢氧化钠（5.8）溶解，用水定容至100mL，4℃冷藏保存，有效期1个月。

5.16L-色氨酸标准工作液（0.1μmol/mL）：准确吸取1.0mL色氨酸标准储备溶液于10.0mL容量

瓶中，用水稀释至刻度，为色氨酸标准上机液，4℃冷藏保存，有效期2周。

5.17针式过滤器：0.45μm水性膜。

6仪器设备

6.1氨基酸自动分析仪。

6.2微波消解仪：温度不小于180℃。

6.3天平：感量分别为0.01g和0.0001g。

6.4离心机：转速不低于10000r/min。

6.5聚四氟乙烯消解管：容积不小于50mL。

6.6pH计。

7分析步骤

7.1试样制备

按照GB/T14699.1抽取有代表性试样，四分法缩分制样。按GB/T20195制备试样，粉碎后过0.25mm

孔径筛，充分混匀后装入密封容器中备用。脂肪含量大于4%的试样，按照GB/T6433先进行脱脂处理。

7.2试样水解

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DB15/T2037—2020

准确称取0.05g～0.1g（精确至0.0001g）脂肪含量小于4%的试样，置于聚四氟乙烯消解管中，

加入5mL氢氧化钠溶液（5.9），充氮气1min，旋紧密封盖后放入微波消解仪中进行微波水解。水解条

件：功率1200w，升温时间10min，水解温度170℃，水解时间30min。取出消解管，冷却至室温，将

水解液转移至25mL容量瓶，用6mol/L盐酸（5.10）中和，使pH至中性，并用水定容至刻度，10000r/min

离心10min，经0.45μm针式过滤器过滤后用氨基酸自动分析仪测定。

7.3氨基酸自动分析仪色谱条件

氨基酸自动分析仪工作条件和洗脱梯度见表1和表2。

表1氨基酸自动分析仪工作条件

仪器条件仪器参数

色谱柱LCAK06/Na（4.6×150mm）

流动相柠檬酸钠A：0.12mol/L，pH=3.45；B=0.2mol/L，pH=10.85

检测波长（nm）570

流动相流速（mL/min）0.45

茚三酮流速（mL/min）0.25

反应器温度（℃）130

柱温（℃）74

进样体积（μL）50

注：可按照不同氨基酸分析仪的最佳工作条件进行优化。

表2氨基酸自动分析仪洗脱梯度

时间ABCD流速

序号

（min）（%）（%）（%）（%）（mL/min）

1初始30.070.00.00.00.45

215.030.070.00.00.00.45

315.10.00.00.0100.00.45

418.00.00.00.0100.00.45

518.130.070.00.00.00.45

630.130.070.00.00.00.45

730.230.070.00.00.00.00

注：A为0.12mol/L柠檬酸钠缓冲液；B为0.2mol/L柠檬酸钠缓冲液；D为20g/LNaOH溶液。

7.4测定

根据氨基酸自动分析仪色谱条件调整好氨基酸自动分析仪参数，依次吸入0.1μmol/mL色氨酸标准

工作液（5.15）和制备好的试样水解液，采用外标法单点校正测定试样中色氨酸含量。

7.5平行试验

按7.2~7.4步骤对同一试样进行平行测定。

7.6空白试验

除不称取试样外，均按7.2~7.4步骤进行测定。

3

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8结果计算

试样